龍匙片活血化瘀作用研究

孫會(huì)靜，李 麗

（1．廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院，廣西 南寧 530021； 2．廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530222）

龍匙片主要由匙羹藤、龍血竭、甘草組方，是廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院的臨床經(jīng)驗(yàn)方，使用時(shí)間已超過15年，主要用于治療糖尿病及其并發(fā)癥，療效顯著。但其活血化瘀的作用研究目前尚未見相關(guān)報(bào)道，本研究中通過建立急性血瘀和微循環(huán)障礙大鼠模型，觀察龍匙片對(duì)血液流變學(xué)、微循環(huán)障礙、凝血酶原時(shí)間（PT）和活化部分凝血活酶時(shí)間（APTT）的影響，進(jìn)一步了解龍匙片的作用特點(diǎn)，為其臨床應(yīng)用提供依據(jù)。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1．1 儀器、動(dòng)物與試藥

1．1．1 儀器

BI－2000型醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)（成都泰盟軟件有限公司）；全自動(dòng)動(dòng)物生化分析儀（美國 Drew公司）；LG－R－80C型全自動(dòng)血液黏度儀（北京中科富邦 LG－R－80C）；微量離心機(jī)（德國艾本德 Minispin plus公司）；體外血栓形成儀、血小板黏附儀(北京第二生化儀器廠)。

1．1．2 動(dòng)物

SD大鼠 120只，體質(zhì)量 180～220 g，雌雄各半，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)SCXK桂2009－0003。家兔，體質(zhì)量 2．0～2．5 kg，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào) SCXK 桂2009－0005。均購自廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1．1．3 試藥

龍匙片由匙羹藤 12．5 g、龍血竭 1．5 g、甘草 9 g組方，龍匙片低、中、高3個(gè)劑量（分別相當(dāng)于臨床日用量的 8 倍、15 倍、30 倍）以龍匙片生藥 3．06，5．75，11．5 g ／（kg·d）制備，加入純凈水，充分研磨，混勻；復(fù)方丹參片（陽性對(duì)照藥，廣州白云山制藥股份有限公司，批號(hào)為130918）；腎上腺素（AD，武漢遠(yuǎn)大制藥集團(tuán)有限公司，批號(hào)為20130713）；APTT檢測(cè)試劑盒購自上海榮盛生物技術(shù)有限公司，PT檢測(cè)試劑盒購自保定天岳生物工程有限公司；鏈脲佐菌素(STZ)購自Sigma公司。

1．2 方法

1．2．1 對(duì)急性血瘀SD大鼠模型的影響[1－3]

將60只SD大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、陽性對(duì)照組[（復(fù)方丹參片 5．0 g ／（kg·d）]，以及龍匙片高、中、低劑量組，各10只。各組按照試驗(yàn)方案給藥，每日1次，給藥容積為每100 g體質(zhì)量2 mL，連續(xù)14 d。第 13 天，皮下注射 AD（10 μg／kg），2 h 后，將大鼠置0～4℃冰水中游泳5 min；2 h后再次皮下注射AD，建立急性血瘀SD大鼠模型[4－5]。末次給藥后2 h，以25%烏拉坦（7 mL／kg，腹腔注射）麻醉，剪尾取血，測(cè)定凝血時(shí)間；隨后從頸總動(dòng)脈取血，其中1．5 mL采用肝素抗凝，置35℃恒溫水浴；1．2 mL注入裝有枸櫞酸鈉的硅管中；0．1 mL用于血小板黏附率測(cè)定。以上血樣經(jīng)抗凝處理后，用于測(cè)定血液流變學(xué)指標(biāo)。另取1．8 mL用于體外測(cè)定，包括血栓長度（L，mL）、血栓濕重（W，mg），并計(jì)算血栓指數(shù)（Q）。Q＝L／2＋W。

1．2．2 對(duì)大鼠AD誘導(dǎo)微循環(huán)障礙模型的影響[6－7]

取SD大鼠60只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、陽性對(duì)照組[復(fù)方丹參片（5．0 g ／（kg·d）]，以及龍匙片高、中、低劑量組，各10只。各組按照試驗(yàn)方案給藥，每日 1次，給藥容積為每100 g體質(zhì)量2 mL，連續(xù)14 d。末次給藥后2 h，每只大鼠腹腔注射麻醉藥烏拉坦，參照Chambers法制備微循環(huán)標(biāo)本，測(cè)定細(xì)動(dòng)脈／細(xì)靜脈口徑、血流速度、毛細(xì)血管網(wǎng)交點(diǎn)數(shù)，觀察血液流態(tài)。除正常對(duì)照組外，各組于當(dāng)前視野滴加1∶250 000 AD 0．05 mL后1 min，再次測(cè)定以上指標(biāo)。分別計(jì)算滴AD后管徑、流速、網(wǎng)點(diǎn)數(shù)的減少值，計(jì)算公式如下。

管徑減少值＝滴AD后的管徑－滴AD前的管徑流速減少值＝滴AD后的流速－滴AD前的流速網(wǎng)點(diǎn)數(shù)減少值＝滴AD后的網(wǎng)點(diǎn)數(shù)－滴AD前的網(wǎng)點(diǎn)數(shù)

1．2．3 對(duì)家兔PT和APTT的影響[8]

取家兔1只，稱定質(zhì)量，腹腔注射25%烏拉坦（10 mL／kg）麻醉，行頸總動(dòng)脈插管采血，使血液流入裝有3．8%枸櫞酸鈉溶液的采血容器中，并不斷攪拌，混勻，控制血液與枸櫞酸鈉的體積比為9∶1。3 000 r／min離心 10 min，制備貧血小板血漿（PPP）。將 PPP分成5組，每組10管，分別與以下各組藥物混合：正常對(duì)照組、肝素鈉組（50 U）、龍匙片高濃度組（最終藥物質(zhì)量濃度為含生藥1．28 g／L）、龍匙片中濃度組（最終藥物質(zhì)量濃度為含生藥0．64 g／L）、龍匙片低濃度組（最終藥物質(zhì)量濃度為含生藥0．34 g／L），按照檢測(cè)試劑盒說明書操作步驟測(cè)定PT和APTT。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 13．0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料以均數(shù) ±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，行 t檢驗(yàn)。P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 對(duì)大鼠血液流變學(xué)的影響

由表1至表3可見，與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠的全血高切黏度、低切黏度、血漿黏度、還原黏度、血沉、凝血時(shí)間、血小板黏附率、纖維蛋白原、血栓（如長度、濕重、Q）等各項(xiàng)指標(biāo)均較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），表明造模成功。與急性血瘀模型組比較，龍匙片對(duì)血細(xì)胞比容無影響（P＞0．05）。龍匙片高、中劑量組各指標(biāo)顯著低于模型組（P＜0．05）。龍匙片低劑量組的全血高切黏度、血漿黏度、還原黏度、纖維蛋白原含量、Q等指標(biāo)明顯小于急性血瘀模型組（P＜0．05），全血低切黏度、血沉、凝血時(shí)間、血小板黏附率、血栓長度、血栓濕重等指標(biāo)雖有降低趨勢(shì)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）。提示龍匙片能降低大鼠血黏度，改善血液流變學(xué)，防止血栓形成，也就是說能改善中醫(yī)“血瘀癥”大鼠血液的“粘、凝、滯”狀態(tài)，且呈現(xiàn)一定量效關(guān)系[9－10]。

2．2 對(duì)腸系膜腎上腺素性微循環(huán)障礙模型的影響[11－12]

表1 對(duì)大鼠血液黏度的影響（，mPa·s，n＝10）

表1 對(duì)大鼠血液黏度的影響（，mPa·s，n＝10）

注：與正常對(duì)照組比較，＃P ＜0．05，＃＃P ＜0．01；與急性血瘀模型組比較， P ＜0．05， P ＜0．01。下表同。

組別正常對(duì)照組急性血瘀模型組陽性對(duì)照組龍匙片高劑量組龍匙片中劑量組龍匙片低劑量組劑量[g ／（kg·d）]5．00 11．50 5．75 3．06全血高切黏度3．26 ± 1．33 5．90 ± 1．25＃＃3．56 ± 1．27 3．78 ± 1．41 3．96 ± 1．30 4．09 ± 1．16全血低切黏度8．98 ± 1．30 15．24 ± 15．24＃＃9．61 ± 9．61 10．87 ± 10．87 11．40 ± 11．45 13．13 ± 13．13血漿黏度2．51 ± 1．41 5．13 ± 1．53＃＃2．53 ± 1．09 2．81 ± 0．81 3．08 ± 1．23 3．61 ± 1．63還原黏度6．13 ± 1．69 10．99 ± 2．10＃＃5．98 ± 1．93 6．16 ± 1．58 7．09 ± 2．62 8．71 ± 1．94

由表4可見，與正常對(duì)照組比較，急性血瘀模型組的細(xì)動(dòng)脈管徑、流速及網(wǎng)點(diǎn)數(shù)明顯減少（P＜0．01），提示急性血瘀模型造模成功。與急性血瘀組比較，龍匙片大、中劑量均可顯著改善腎上腺素誘導(dǎo)的細(xì)動(dòng)脈管徑、流速及網(wǎng)點(diǎn)數(shù)的異常（P＜0．05）；低劑量組雖有改善趨勢(shì)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0．05）。

表2 對(duì)大鼠凝血功能的影響（，n＝10）

表2 對(duì)大鼠凝血功能的影響（，n＝10）

組別正常對(duì)照組急性血瘀模型組陽性對(duì)照組龍匙片高劑量組龍匙片中劑量組龍匙片低劑量組劑量[g／（kg·d）]5．00 11．50 5．75 3．06血細(xì)胞比容（%）45．29 ± 5．80 48．27 ± 5．39 47．16 ± 7．25 46．95 ± 6．41 49．18 ± 9．30 48．80 ± 8．41血沉（mm ／h）1．74 ± 0．43 3．29 ± 0．86＃＃1．96 ± 1．00 2．09 ± 0．98 2．37 ± 0．85 3．20 ± 1．11凝血時(shí)間（min）2．51 ± 0．78 1．52 ± 0．67＃＃2．37 ± 0．52 2．32 ± 0．76 2．08 ± 0．37 1．83 ± 0．41血小板黏附率（%）21．48 ± 3．84 27．77 ± 6．48＃21．08 ± 3．12 21．61 ± 2．08 22．31 ± 4．37 23．93 ± 4．24

表3 對(duì)大鼠血栓指標(biāo)的影響（，n＝10）

表3 對(duì)大鼠血栓指標(biāo)的影響（，n＝10）

血栓組別 劑量[g ／（kg·d）]Q正常對(duì)照組急性血瘀模型組陽性對(duì)照組龍匙片高劑量組龍匙片中劑量組龍匙片低劑量組5．00 11．50 5．75 3．06纖維蛋白原（g ／L）2．05 ± 0．93 4．59 ± 0．95＃＃2．93 ± 1．28 2．84 ± 0．82 3．01 ± 1．53 3．20 ± 1．38長度（mm）13．68 ± 2．78 21．07 ± 4．39＃＃13．94 ± 3．24 15．32 ± 4．98 16．62 ± 3．99 18．06 ± 4．23濕重（mg）53．68 ± 8．19 77．68 ± 9．30＃＃58．14 ± 7．57 61．70 ± 6．40 66．96 ± 9．63 69．69 ± 9．57 60．53 ± 8．88 88．22 ± 10．70＃＃65．11 ± 8．04 69．36 ± 7．49 75．27 ± 10．66 78．72 ± 8．58

測(cè)定細(xì)動(dòng)脈／細(xì)靜脈口徑、血流速度、毛細(xì)血管網(wǎng)交點(diǎn)數(shù)和觀察流態(tài)的數(shù)據(jù)，將細(xì)動(dòng)脈中的血液流態(tài)分為4級(jí)。0級(jí)：線流，為正常流態(tài)；Ⅰ級(jí)：虛線流；Ⅱ級(jí)：粒流；Ⅲ級(jí)：瘀滯。由表5可見，增加數(shù)的0級(jí)指未發(fā)生改變(加重）的例數(shù)。與正常對(duì)照組比較，急性血瘀模型組的0級(jí)流態(tài)減少例數(shù)及Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ級(jí)增加例數(shù)均顯著少于正常對(duì)照組（P＜0．05），說明急性血瘀模型造模成功。與急性血瘀模型組比較，龍匙片高、中劑量組可明顯抑制AD引起的流態(tài)改變，表現(xiàn)為0級(jí)流態(tài)減少例數(shù)及Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ級(jí)流態(tài)增加例數(shù)均明顯減少（P＜0．05）。低劑量組雖有降低趨勢(shì)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05），顯示龍匙片能抑制AD引起的微循環(huán)流態(tài)改變。

表4 對(duì)大鼠腸系膜腎上腺素性微循環(huán)障礙的作用（n＝10）

表5 對(duì)大鼠腸系膜微循環(huán)障礙模型流態(tài)的影響（，n＝10）

表5 對(duì)大鼠腸系膜微循環(huán)障礙模型流態(tài)的影響（，n＝10）

組別正常對(duì)照組急性血瘀模型組陽性對(duì)照組龍匙片高劑量組龍匙片中劑量組龍匙片低劑量組劑量[g ／（kg·d）]滴AD前(例) 滴AD后(例) 增加數(shù)(例)0Ⅰ級(jí) Ⅱ級(jí) Ⅲ級(jí) Ⅰ級(jí) Ⅱ級(jí) Ⅲ級(jí) Ⅰ級(jí)1Ⅱ級(jí)10 9 10 2 1 4 3 2 3 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 2 4 8 7 7 4 3 1 6 5 2 3 4 4 0 0 1 2 3 1 0 0 0 3 0＃4 4 5．00 11．50 5．75 3．06 9 8 9 2 2 0 0 0 0 1 2Ⅲ級(jí)3 1＃0 0 0 3 0級(jí)減少數(shù)(例)8 5＃2 2 1 5

2．3 對(duì) PT及APTT的影響

由表6可見，與正常對(duì)照組比較，肝素組的PT和APTT均有顯著延長（P＜0．01），龍匙片高、中濃度組的 PT和 APTT均明顯延長（P＜0．05）；龍匙片低劑量組能明顯提高 APTT（P＜0．01），但對(duì) PT無影響（P＞0．05），龍匙片對(duì) PT和 APTT的影響顯示出明顯的濃度依賴關(guān)系，表明龍匙片有抑制內(nèi)、外源性凝血系統(tǒng)的作用。

表6 龍匙片對(duì)家兔PT及APTT的影響（，n＝10）

表6 龍匙片對(duì)家兔PT及APTT的影響（，n＝10）

組別正常對(duì)照組肝素組龍匙片高濃度組龍匙片中濃度組龍匙片低濃度組藥物濃度50 U 1．15 g ／L 0．57 g ／L 0．31 g ／L PT（s）11．12 ± 2．26 45．16 ± 5．20＃＃76．89 ± 12．37＃＃16．20 ± 2．82＃＃11．95 ± 2．84 APTT（s）40．26 ± 10．77 295．20 ± 8．11＃＃222．98 ± 35．87＃＃90．72 ± 15．84＃＃60．94 ± 14．49＃

3 討論

龍匙片是臨床經(jīng)驗(yàn)方，由匙羹藤、龍血竭和甘草組方，可降低血糖、活血化瘀。匙羹藤 Gymnema sylvestre(Retz．)schult為蘿 科植物匙羹藤屬類植物，性平、味苦，藥理作用主要包括降血糖、調(diào)血脂、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抑制甜味、抗齲齒和抑制肥胖等[13]。龍血竭有“血中圣藥”美譽(yù)，廣泛用于各種血證，具有活血散瘀、定痛止血、斂瘡生肌等功效[14－17]。甘草的主要生物活性成分包括三萜類化合物、黃酮類化合物及多糖類化合物等，具有抗炎、抗氧化、降血糖、抗血栓等生理活性[18－20]。

本研究中采用動(dòng)物試驗(yàn)性急性血瘀模型、急性微循環(huán)障礙模型和體外試驗(yàn)，觀察不同劑量的龍匙片活血化瘀作用。結(jié)果表明，龍匙片能改善血瘀后血液流變學(xué)的異常，還可抑制機(jī)體微循環(huán)障礙的形成，體外可抑制內(nèi)源性和外源性凝血系統(tǒng)。龍匙片有顯著的活血化瘀作用[21]，與其臨床應(yīng)用相符合，并能相互佐證。

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