菲牛蛭的研究進(jìn)展*

韋桂麗，王 碩，周小雷，龔小妹，歐春麗，王 杰綜述，繆劍華△審校（.廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，廣西南寧53000；.廣西藥用植物研究所西南瀕危藥材資源開發(fā)國家工程實(shí)驗(yàn)室，廣西南寧53003）

菲牛蛭為醫(yī)蛭科牛蛭屬、動(dòng)物菲牛蛭的干燥體，別名馬尼擬醫(yī)蛭，俗稱金邊螞蟥，是目前常見吸血蛭類中個(gè)體較大的品種。其性平，味咸、苦；有小毒，歸肝經(jīng)；具有破血通經(jīng)，逐瘀消癥之功效，可用于血瘀經(jīng)閉、癥瘕痞塊、中風(fēng)偏癱、跌打扭傷等癥[1]。自1992年STEINER等[2]首次從菲牛蛭提取菲牛蛭素以來，菲牛蛭的抗凝活性一直是醫(yī)藥領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)[3-4]。本文對(duì)菲牛蛭的活性成分、化學(xué)成分、藥理作用及臨床應(yīng)用進(jìn)行綜述，為菲牛蛭的進(jìn)一步研究提供參考。

1 活性成分及化學(xué)成分

1.1 活性成分 菲牛蛭的主要活性成分是菲牛蛭素和水蛭素，菲牛蛭素是一種多肽，由60多個(gè)氨基酸組成，其中50%～60%的氨基酸殘基與水蛭素相同，菲牛蛭與水蛭素均為抑制凝血酶，作用機(jī)制相同[5]。1992年STEINER等[2]首次從菲牛蛭中提取、分離到2種新水蛭素，將其命名為Hm1和Hm2，并闡明了Hm1和Hm2的一級(jí)結(jié)構(gòu)，表明2種新水蛭素均有抗凝作用。1993年SCACHERI[6]測(cè)定了菲牛蛭中2種新水蛭素異構(gòu)體氨基酸序列，對(duì)其基因進(jìn)行了克隆，并研究了Hm1和Hm2全基因的結(jié)構(gòu)和功能，也表明Hm1和Hm2有抗凝活性。1994年VINDIGNI等[7]利用限制性蛋白水解酶標(biāo)記并獲得了Hm2多肽結(jié)構(gòu)，并對(duì)其N端肽片段進(jìn)行了分離、鑒定和抗凝血酶活性檢測(cè)，結(jié)果表明Hm2具有較強(qiáng)的抗凝活性。黃愛民等[8]進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，廣西菲牛蛭消化液中含有2種抗凝物質(zhì)，即菲牛蛭素A和菲牛蛭素B，且菲牛蛭素A和菲牛蛭素B對(duì)凝血酶具有極強(qiáng)的抑制作用。另有報(bào)道稱，菲牛蛭中含有水蛭素P6、水蛭素P18，表明水蛭素也是主要活性成分[9-10]。此外，菲牛蛭中還含有其他活性成分，如抗血小板聚集活性成分[11]、纖維蛋白溶解酶[12]、抑菌活性成分[13]、透明質(zhì)酸酶、抗凝劑[14]、血管擴(kuò)張劑[15]等。

1.2 微量元素 菲牛蛭體內(nèi)的微量元素主要有鈣（Ca）、鉻（Cr）、銅（Cu）、鐵（Fe）、鎂（Mg）、錳（Mn）、釩（V）、鋅（Zn）等8種元素，其中Ca水平最高。菲牛蛭的抗癌作用與其所含有的上述微量元素有關(guān)，且Fe、Mg、Zn水平符合抗癌藥物中的微量元素水平范圍[16-19]。

1.3 脂肪酸 菲牛蛭中的脂肪酸含量相當(dāng)豐富，主要有16種脂肪酸，占脂肪酸總量的92.52%，其中包括3-甲基十三酸、肉豆蔻酸、4，8，12-三甲十三酸、十四酸、十五酸、14-甲基十五酸、9-十六烯酸、棕櫚酸、15-四基-十六酸、14-甲基-十六酸、十七酸、3，7，11，15-四甲基十六酸、9-十八烯酸、8-十八烯酸、硬脂酸、11-二十烯酸；其中飽和脂肪水平較高，占脂肪酸總量的60.17%[17-19]。菲牛蛭中所含的9-十八烯酸和11-二十烯酸等占不飽和脂肪酸的水平高于寬體金線蛭。

1.4 氨基酸 菲牛蛭中有18種氨基酸，包括天門冬氨酸、亮氨酸、格氨酸、L-甲硫氨酸、胱氨酸、谷氨酸、丙氨酸、賴氨酸、纈氨酸、絲氨酸、組氨酸、甘氨酸、蘇氨酸、苯丙氨酸、精氨酸、色氨酸、異亮氨酸、脯氨酸；其中含有人體必需的7種氨基酸，占氨基酸總量的28.16%，明顯高于寬體金線蛭的21.40%與日本醫(yī)蛭的22.50%[19]。這18種氨基酸中甘氨酸水平最高，其次是亮氨酸，這些水平較高的氨基酸在菲牛蛭活血化瘀方面有重要作用[20]。菲牛蛭體內(nèi)的黃嘌呤水平較高，而尿嘌呤和次黃嘌呤水平較低[21]。

2 藥理作用

2.1 抗凝作用 多位學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，菲牛蛭具有較強(qiáng)的抗凝活性[22-25]，其抗凝血的作用機(jī)制是水蛭素與凝血酶發(fā)生反應(yīng)。水蛭素對(duì)凝血酶有極強(qiáng)的抑制作用，是迄今為止所發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)凝血酶天然特異抑制劑。實(shí)驗(yàn)采用《中華人民共和國藥典》的抗凝血酶活性測(cè)定法測(cè)定菲牛蛭中天然水蛭素的抗凝血作用，結(jié)果表明菲牛蛭中天然水蛭素具有較高的抗凝血酶活性。黃愛民等[26]研究發(fā)現(xiàn)，廣西菲牛蛭中提取的2種菲牛蛭素在體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)中，菲牛蛭素A、B均能明顯延長(zhǎng)活化的部分凝血活酶時(shí)間（APTT）、血漿凝血酶原時(shí)間（PT）及凝血酶時(shí)間（TT），其中菲牛蛭素A對(duì)TT的作用最明顯，菲牛蛭素B則對(duì)PT的作用更強(qiáng)，表明廣西菲牛蛭中的抗凝物質(zhì)菲牛蛭素A、B在體內(nèi)外均有較強(qiáng)的抗凝活性。另有研究表明，菲牛蛭的抗凝血活性遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于寬體金線蛭和日本醫(yī)蛭，其抗凝活性分別是兩者的13.2倍和3.6倍[27]。丁月珠等[28]采用凝血酶滴定法和發(fā)色底物法-萃取-高效液相色譜（HPLC）法，比較了寬體金線蛭和菲牛蛭抗凝血酶活性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)菲牛蛭的抗凝血酶活性遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于寬體金線蛭。

2.2 抗栓和溶栓作用 目前關(guān)于水蛭素抗血栓與溶栓的報(bào)道較多，其抗血栓的作用機(jī)制主要是水蛭素與凝血酶特異性結(jié)合形成非共價(jià)鍵緊密結(jié)合的穩(wěn)定化合物，阻止了凝血酶的催化反應(yīng)與纖維蛋白原的凝固。實(shí)驗(yàn)研究表明，菲牛蛭具有明顯的抗血栓作用[29-30]。其中，菲牛蛭凍干粉的抗血栓作用最強(qiáng)，其次是日本醫(yī)蛭凍干粉、歐洲醫(yī)蛭凍干粉，而寬體金線蛭凍干粉的抗血栓作用最弱；菲牛蛭頭部段凍干粉則比菲牛蛭全身凍干粉樣品溶血栓效果更佳，溶栓率為66.8%。

2.3 降低血脂和改善血液循環(huán) 菲牛蛭能提高血液流動(dòng)性和變形能力，疏通血管，改善微循環(huán)，從而降低血脂，防止動(dòng)脈粥樣硬化。曹斌等[31]在高脂飼料喂飼鵪鶉2周后，用藥組同時(shí)灌服不同劑量的菲牛蛭4、6周后，測(cè)定血脂水平及血液流變學(xué)指標(biāo)時(shí)發(fā)現(xiàn)，菲牛蛭各組的膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）明顯低于模型對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。菲牛蛭組的全血黏度、紅細(xì)胞剛性指數(shù)和紅細(xì)胞壓積明顯低于模型對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），表明菲牛蛭具有降低血脂和改善血液流變學(xué)作用。

2.4 抗腫瘤作用 菲牛蛭對(duì)腫瘤癥狀緩解的效果明顯，其能夠抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)與增殖，同時(shí)對(duì)癌癥放化療的損傷有良好的輔助治療作用。實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)[32-33]，體外實(shí)驗(yàn)中，菲牛蛭提取物對(duì)人肝癌細(xì)胞、人宮頸癌細(xì)胞、人結(jié)腸癌細(xì)胞、人舌鱗癌細(xì)胞、人肺癌細(xì)胞、人胃癌細(xì)胞等6種腫瘤細(xì)胞的增殖具有不同程度的抑制作用，但對(duì)小鼠成纖維細(xì)胞毒性作用相對(duì)較弱；同時(shí)，與順鉑組比較，菲牛蛭提取物與順鉑聯(lián)合使用能夠抑制S180荷瘤鼠的腫瘤生長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），可使S18荷瘤鼠的谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、總膽紅素（TBIL）、尿素（BUN）、肌酐（CREA）水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），由此可見，菲牛蛭提取物與順鉑聯(lián)合使用治療S180荷瘤鼠具有相加的抗腫瘤作用，且菲牛蛭提取物能夠減輕順鉑對(duì)S180荷瘤鼠的肝腎毒性反應(yīng)。

此外，菲牛蛭具有抗血小板聚集[11]、纖溶及抗痛風(fēng)等作用[34]；菲牛蛭素可刺激人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞和雞胚絨毛尿囊膜血管，促進(jìn)血管新生[35]。

3 有害物質(zhì)檢測(cè)與毒性實(shí)驗(yàn)

藥材中有害元素水平與農(nóng)藥殘留量是藥材、新藥申報(bào)和藥品控制的重點(diǎn)內(nèi)容之一，吳志軍等[36]采用原子吸收分光光度法、毛細(xì)管氣相色譜（CGC）-電子捕獲檢測(cè)器（ECD）和CGC-氮磷檢測(cè)器（NPD）氣相色譜法測(cè)定菲牛蛭樣品中的有毒有害物質(zhì)水平并進(jìn)行了急性毒性實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明菲牛蛭中重金屬元素Cu、Cr、砷、汞、鉛的水平及有機(jī)氯、有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量均低于藥典對(duì)中藥的一般要求；急性毒性實(shí)驗(yàn)LD50＞10 g/kg，表明無明顯不良反應(yīng)。

4 臨床應(yīng)用

活體菲牛蛭可以分泌一種生物多肽類的水蛭素，其可有效擴(kuò)張血管、降低血液黏稠度、減少血管阻力、降低血小板凝集性、減少血管壁脂質(zhì)的沉積、具有抗炎性，故臨床上采用活體菲牛蛭吸血療法較為常見。徐惟永等[37]自2011年5月至2013年8月以來將痛風(fēng)患者隨機(jī)分為菲牛蛭治療組和對(duì)照組，各30例，對(duì)照組給予常規(guī)治療，菲牛蛭治療組在常規(guī)治療上輔以活體菲牛蛭生物治療，觀察結(jié)果顯示，菲牛蛭治療組的臨床治療總有效率高達(dá)93%，均無不良反應(yīng)，其與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），表明菲牛蛭具有治療痛風(fēng)的作用。楊曉楠等[38]自1991年1月至2006年11月以來應(yīng)用活體菲牛蛭吸血療法救治了8例移植皮瓣靜脈淤血的患者，其中1例皮瓣遠(yuǎn)端邊緣部分出現(xiàn)小面積壞死，另外7例均取得良好的治療效果，可見菲牛蛭也可應(yīng)用于整形美容外科等相關(guān)學(xué)科中。

5 小 結(jié)

我國有水蛭近百種，水蛭之名首見于《神農(nóng)本草經(jīng)》[39]，被列為下品藥；其后《名醫(yī)別錄》也有收載[40]?！吨袊幍洌?015版）》收載的藥用水蛭有寬體金線蛭、日本醫(yī)蛭和柳葉螞蟥3種，而市場(chǎng)上出售的水蛭藥材實(shí)際上多為寬體金線蛭。研究發(fā)現(xiàn)，吸血蛭類的菲牛蛭抗凝活性明顯高于非吸血蛭類的寬體金線蛭[18-23]，因此，對(duì)菲牛蛭的綜合利用越來越受到人們的關(guān)注。目前對(duì)菲牛蛭的研究還停留在簡(jiǎn)單的抗凝、抗血栓等初步藥效學(xué)研究階段，對(duì)其機(jī)制的探討尚欠缺，臨床研究的報(bào)道較少，有待進(jìn)一步研究。

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