家畜血吸蟲病毛蚴孵化法的實踐運用

熊家亮 ，謝愛玲 ，彭又新

（1.湖北省荊州市動物疫病預防控制中心，荊州 434020；2.湖北省洪湖市動物疫病預防控制中心，洪湖 433200）

1 糞便毛蚴孵化法原理

人和動物感染血吸蟲后，會隨糞便排出血吸蟲蟲卵。血吸蟲蟲卵具有與一般寄生蟲蟲卵不一樣的特征。其最主要的特點就是成熟蟲卵卵內含有毛蚴。血吸蟲蟲卵隨同人和家畜糞便排出體外并在自然環境中遇到水后，在適當條件下數小時就會孵出毛蚴。毛蚴在放大鏡下或肉眼觀察可見。利用這一原理，采集家畜新鮮糞便，采用適當的方法，控制掌握條件，利用水來孵化出毛蚴以診斷血吸蟲[1]。

2 糞便毛蚴孵化法的種類及使用

2.1 尼龍網兜淘洗孵化法（三角燒瓶）

這是最早應用于家畜血吸蟲病診斷的方法。采用兩層尼龍網兜進行淘洗糞便，上層網兜孔大，主要起過濾糞渣的作用；下層網兜孔小，主要起兜住蟲卵的作用；洗好后將下層網兜中的內容物到入三角燒瓶中進行孵化。由于此方法操作繁瑣耗時長，在家畜的診斷上早已棄用，但衛生部門目前仍在應用。

2.2 頂管法

用一特制的糞杯盛裝糞液，上面再倒插一裝滿清水的試管進行孵化。此種方法操作簡單，我國大部分血吸蟲病流行區均采用此方法用于家畜血吸蟲病的診斷。湖北省又將此方法稱為“試管倒插孵化法”。此種方法使用塑料糞缽成本低、易搬運。我們荊州市在對家畜實行普查時多使用這種方法。在實踐中，使用頂管法時糞樣需要經過淘洗而易導致蟲卵流失。而為提高檢出率按標準或要求實行“一糞三檢”或“三糞三檢”又耗時長效率低。

2.3 直孵法（平底長頸燒瓶）

糞液直接裝入平底長頸燒瓶中，頸的中部放入適量的脫脂棉，再加入清水進行孵化。全國有少數地方采用此方法用于家畜血吸蟲查病。筆者在實踐中將此種方法用于家畜血吸蟲感染地市級的風險監測[2]。操作步驟、耗時及檢出率與試管倒插法相比略優，可作為試管倒插法的補充。其缺點是玻璃燒瓶在搬運過程中易破碎。在風險監測中，因樣品數量少采用此法綜合評價仍值得肯定。

3 糞便毛蚴孵化法的實踐操作

3.1 試管倒插孵化法

3.1.1 器械的準備

特制的塑料杯及杯蓋，與杯蓋孔相適應的玻璃試管以及管口上套用的橡皮筋圈，竹筷、40～60孔/吋銅篩、無碘食鹽，其它還有剪刀、膠布、5～10倍放大鏡、水溫計、PH試紙、毛巾、肥皂、糞桶、臉盆、水桶、水瓢、大盛水桶或水缸、大腳盆、試管刷、鬧鐘、臺燈、一次性手套、一次性飯盒、塑料袋、糞檢登記表等。

3.1.2 編號

對所用的塑料糞杯逐一進行編號，每個糞杯都唯一的號碼。用醫用膠布粘貼編號。

3.1.3 登記

將糞檢登記卡上的內容詳細記入糞檢登記表，同時記錄對應的糞杯號，同時將一定量的糞樣放入對應的糞杯中。每個糞杯中家畜的糞量為：牛、馬屬動物糞便50～100 g，豬、羊、犬糞便各30～40 g。

3.1.4 洗糞

將塑料杯內加上2/3容量的洗糞用水,用筷子充分攪拌淘洗，而后取出糞篩糞渣，將杯內加滿洗糞用水，靜置25～30 min。由于羊糞為顆粒狀，較硬，糞杯中加洗糞水之前需將其弄碎。

3.1.5 換水

靜置到時后倒去糞杯中1/2的糞水，再加滿洗糞用水，靜置15～20 min，此為第1次換水。到時后再倒去糞杯中2/3的糞水，再加滿洗糞用水，靜置15 min此為第2次換水。在實際操作中，溫度較高時可減少1次換水，以縮短洗糞時間及減少工作量，并不影響毛蚴的孵化及觀查效果。

3.1.6 上孵化水

倒去杯中上2/3的糞水，加滿孵化用水,靜置30 min。

3.1.7 蓋杯蓋及孵化

取與杯蓋孔相適應的玻璃試管，裝滿洗糞用水倒插于杯蓋孔上一并蓋在杯上進行孵化。為防止試管下滑，應在試管上纏上適量的橡筋。已加孵化水的糞杯不能放到陽光下直曬，已上試管的糞杯既不能放到陽光下直曬，也不能用電扇吹。如出現糞杯中的糞水上翻到試管中的現象應將試管中的水換成溫度略高的孵化水。

3.2 直孵法的實際操作

3.2.1 器械的準備

平底長頸燒瓶、燒杯（500 ml）、脫脂棉為本方法專用器械，以取代糞杯，所需其他器械與頂管法相同。

3.2.2 操作

將平底長頸燒瓶進行編號，每個長頸燒瓶配一個對應的燒杯。將糞檢登記卡上的內容詳細記入糞檢登記表，同時記錄對應的燒瓶號。

取家畜糞便于燒杯中，加入自來水充分攪拌，然后將燒杯內加滿水，靜置25～30 min。

將燒杯中的糞液倒去一半，剩余的糞液倒入對應的燒瓶中，未倒干凈的糞渣用孵化水沖洗灌入燒瓶中，將燒瓶頸內壁上的糞渣用孵化水沖洗干凈并繼續向燒瓶中加入孵化水使液面距離瓶口8 cm左右，然后將適量脫脂棉放入頸口中與液面輕輕接觸（要求脫脂棉厚薄均勻，厚度約2 cm左右），在脫脂棉上方輕輕注入孵化水至瓶口，1 h后進行毛蚴觀察。

4 糞便毛蚴孵化法的注意事項

4.1 畜糞的采集和送檢

4.1.1 采集量

畜糞的采集量與每頭家畜檢查所用糞杯數密切相關。如果進行一糞三檢，大家畜（牛、馬屬）的采糞量應為200 g，豬100 g，羊和犬50～60 g。

4.1.2 采集方法

一種是拾糞。即采取家畜自然排出的糞便，用一次性筷子或樹枝將其采集。為了避免污染，采糞時所用采糞器具不能連續使用，要求一具采一頭畜糞，糞樣要新鮮；另一種是掏糞。即用手伸進直腸采糞，最好是戴上橡皮手套進行，每采一頭更換一副手套，如徒手采集，每采完一頭后，必須將手洗凈后再采另一頭，以防交叉污染。

4.1.3 糞樣包裝送檢

采得糞樣可用潔凈容器（如一次性飯盒）盛裝并再用干凈的塑料袋包裝，或者使用兩層干凈的塑料袋包裝，詳細填寫《動物血吸蟲病糞樣送檢登記卡》放入對應的塑料袋中送檢[3]。糞樣送檢登記卡須填寫的內容有:鄉(鎮)名,村名,組別,畜主姓名,畜別,性別,年齡,特征,家畜編號,送檢時間等。采到糞樣后應立即上送，冬季防止冰凍，夏季防止日曬。

4.2 用水的準備

（1）將自來水放入潔凈無蓋的容器中靜置12 h以上即可作為洗糞和孵化用水。一般于前1 d下午或晚上將自來水放入無蓋的桶、盆或缸中，第2天上午即可作為洗糞和孵化水使用。（2）河水、井水、池塘水用做洗糞和孵化用水必須進行殺滅水蟲和澄清水質的處理。其方法是是將水加溫至60℃以上，冷后澄清再用。（3）孵化時水溫須達到15℃以上，否則應升溫。當水溫高于28℃時，洗糞用水中可按1%的比重加入無碘食鹽以抑制洗糞過程中毛蚴過早逸出。（4）由于現今自來水已經普遍使用，所以一般不用河水、井水和池塘水作為孵化和洗糞用水。（5）有些地方的自來水并不是按標準生產的，使用前須檢查水中是否有水蟲。

5 毛蚴的觀查及結果判定

（1）通常情況下牛、羊糞樣于第1、3、5 h各觀察1次，每個樣品每次觀察應在2 min以上。實際操作中，由于時間所限，每個糞杯最多觀查2次。（2）毛蚴的出現時間與水溫關系密切。水溫較高時，毛蚴出現的時間早，同時毛蚴存活的時間也較短，所以夏季觀察毛蚴的時間要相應地提前并抓緊時間觀察。（3）發現血吸蟲毛蚴即判定為陽性。在一個試管中有1～5個毛蚴判為+，6～10個為++，11～20個為+++，21個以上為++++。在同一糞樣的幾個試管中，只要在一個試管中發現一個毛蚴，則該家畜為陽性。（4）毛蚴往往在距水面4cm的范圍內活動，灰白色、折光強、梭形，多呈與水面平直或斜向的直線運動。觀察毛蚴應在光線充足的地方進行，為了便于觀察，可襯以黑色背景。（5）觀察時，毛蚴必須與水蟲嚴加區別。可疑時應用吸管吸取置于載玻片上鏡檢簽別。（6）在光線較暗的環境中及夜晚進行毛蚴孵化操作時必須補充燈光并達到所需的亮度。（7）為了便于毛蚴的觀查，可在插好試管的糞杯前放置一臺燈以增加亮度。

[1] 林矯矯，胡述光，劉金明．中國家畜血吸蟲病防治[J]．中國動物傳染病學報，2011，19(3):75-81．

[2] 童來保，朱傳剛，陸珂，等．糞便毛蚴孵化法檢測牛血吸蟲病的評價[J]．熱帶病與寄生蟲學，2012，10(1):8-10．

[3] 李亞敏，邱丹，張詠梅，等．豬、牛日本血吸蟲病糞便孵化法毛蚴孵出時間比較[J]．中國獸醫寄生蟲病，1995(2):32+49．