靈芝孢子油抗腫瘤活性機制研究進展

郭原，周亞杰，馮鵬，馮敏

（南京中科藥業有限公司，江蘇 南京 210008）

0 引言

靈芝，是中醫藥的瑰寶。不管是古代醫藥典范之作還是現代的藥理臨床均證明：靈芝具有延年益壽、防病治病之功效。東漢時期的《神農本草經》、明代著名醫藥學家李時珍的《本草綱目》都對靈芝的功效有詳細且極為肯定的記載?，F代藥理學與臨床實踐進一步證實了靈芝的藥理作用。

靈芝孢子是靈芝在生長成熟時期從菌蓋彈射出來的極為細小的顆粒，是靈芝的生殖細胞。靈芝孢子油是通過超臨界二氧化碳流體萃取技術從破壁的靈芝孢子中提取的油狀脂質物，集成了靈芝孢子的多種活性成分。世界靈芝研究專家發表了越來越多的論文，證明三萜類化合物是靈芝孢子粉的主要藥理成分，是靈芝孢子發揮抗炎、鎮痛、鎮靜、抗衰老、毒殺腫瘤細胞、抗缺氧等作用的主要功效成分。本文對近5年來靈芝孢子油在抗腫瘤機理方面的研究狀況作一分析，以期為下一步靈芝孢子油的研究提供線索。

1 抗腫瘤活性及機制

靈芝三萜類化合物是從靈芝中分離到的一種具有藥理活性的主要苦味成分，多數為高度氧化的羊毛甾烷衍生物，依據其結構和官能團的不同，又可分為靈芝酸，靈芝孢子酸等10多種由于化學結構的多樣性，使三萜類化合物有較廣泛的藥理活性，靈芝孢子油中的靈芝三萜對多種腫瘤細胞的生長和轉移都有抑制作用。

1.1 口腔粘膜癌抗癌機理

蔡研等[1]通過建立金黃地鼠頰囊動態癌變模型，對所取標本進行病理檢驗，并采用免疫組化技術檢測bcl-2和survivin在兩組動物模型中的表達變化，結果表明服用靈芝三萜后，在DMBA誘導下產生的細胞凋亡抑制基因表達含量增高的趨勢有所降低，小鼠頰囊癌變的發生率明顯降低，且惡性程度也有所降低。凋亡調節基因Bcl-2，survivin的下調說明靈芝三萜對金黃地鼠頰黏膜癌變的抑制作用可能與控制腫瘤細胞的生長有關。

1.2 乳腺癌抗癌機理

焦春偉[2]等探討靈芝孢子油對人惡性乳腺癌細胞MT-1凋亡的影響，結果表明：靈芝孢子油對MT-1細胞有明顯的抑制作用，且呈濃度依賴，并能增加caspase-3酶的活性。

宋玉仙[3]等通過觀察靈芝孢子油對人乳腺癌MCF-7細胞增值、遷移及凋亡的影響，發現不同濃度的靈芝孢子油對MCF-7的增殖和遷移均有一定程度的抑制作用，且呈時間、劑量依賴性；靈芝孢子油能顯著誘導MCF-7細胞凋亡；RT-PCR結果顯示，靈芝孢子油能上調Bax同時下調Bcl-2和VEGF的mRNA表達水平。

張京[4]等通過不同劑量的靈芝孢子油分別刺激體外培養的人源高惡性乳腺癌細胞系MDA-MB-231細胞及MDA-MB-231細胞制作的荷廇小鼠，結果表明靈芝孢子油可在體內和體外抑制人源高惡性乳腺癌細胞MDA-MB-231的EGFR蛋白表達，且有劑量依賴性；均可在體內和體外抑制VEGF RNA表達，增強血管生成抑制因子TSP-1RNA表達。

1.3 肺腺癌抗癌機理

呂明明[5]等通過CCK-8法檢測靈芝孢子油對A549細胞得體外抗腫瘤作用，結果表明靈芝孢子油顯著促進原代腫瘤細胞凋亡，對原代腫瘤細胞中凋亡相關蛋白baxmRNA有明顯上調作用，對bcl-2 mRNA有明顯下調作用。

王亞平[6]等通過觀察靈芝孢子油對人肺腺癌細胞LTEP-a2增值、凋亡與miR-16及其靶基因表達得影響，發現靈芝孢子油呈劑量、時間性地抑制人肺腺癌LTEP-a2細胞的增殖，同時細胞形態發生明顯變化。Annexin-V/PI雙染檢測提示，靈芝孢子油在低濃度下就可促進細胞凋亡；靈芝孢子油可顯著上調LTEP-a2細胞中miR-16的表達并相應下調bcl2和VEGF基因的表達。

唐文[7]等研究發現靈芝孢子油中得靈芝酸GA-T可以抑制人類實體瘤無胸腺的小鼠體內的生長。結果表明靈芝孢子油明顯抑制高轉移性肺癌細胞系（95-d）得增殖，同時誘導細胞凋亡并且阻滯細胞周期在G1期。此外，降低線粒體膜電位（Δψm）和細胞色素c的釋放也是誘導細胞凋亡得關鍵因素。數據進一步表明，蛋白質p53和Bax基因隨著時間得延長在95-d細胞的表達增多，而bcl-2的表達沒有明顯改變；因此bcl-2/Bax表達的比例下降.

1.4 肝癌抗癌機理

孫琳[8]等探討了靈芝孢子油對人肝癌細胞株HepG2的影響及其機制，通過實驗發現，靈芝孢子油對體外培養的肝癌HepG2細胞有抑制增殖作用，且具有劑量、時間相關性；靈芝孢子油能降低HepG2細胞遷移速度；HepG2細胞凋亡率隨靈芝孢子油濃度增加而增加；VEGF、Bcl-2和BaxmRNA表達下調，p53的mRNA無顯著變化；靈芝孢子油也能改變Toll樣受體mRNA的表達情況；靈芝孢子油處理后，HepG2細胞骨架改變，偽足減少，并且出現典型的凋亡細胞形態。

金玲[9]等研究了靈芝孢子油軟膠囊抗肝癌作用及對肝癌小鼠免疫功能的影響，高、中劑量靈芝孢子油均可顯著提高荷瘤小鼠網狀內皮細胞吞噬功能及特異性細胞免疫功能、可顯著提高荷瘤小鼠的血清溶血素水平、能顯著提高荷瘤小鼠血清生物調節因子IFN-γ和TNF-α水平（P＜0.05）。

張國清[10]等研究了靈芝孢子油與環磷酰胺合用對肝癌實體瘤(HepS)的增效減毒作用及免疫功能的機制，靈芝孢子油與CTX合用對肝癌實體瘤鼠瘤重明顯減小，抑瘤率為45.0%，胸腺系數未見明顯變化；血液中的WBC明顯升高，T淋巴細胞酯酶染色率明顯增加；吞噬指數K和吞噬系數a明顯增高；具有增強炭粒吞噬廓清能力和促進DTH反應的作用。 CTX與靈芝孢子油合用可提高靈芝孢子油的抑瘤作用，同時可減輕CTX的不良反應，改善和增強機體免疫功能。

1.5 前列腺癌抗癌機理

張豫明[11]研究靈芝孢子油對雙氰睪酮誘導的前列腺癌LNCaP增殖、雄激素受體AR的激活和轉錄活性及相關激酶的影響，結果表明靈芝孢子油明顯降低DHT刺激的LNCaP細胞的增殖活性，同時靈芝孢子油降低了DHT誘導的前列腺癌LNCaP細胞中AR和蛋白激酶D的磷酸化活性，而對其本底蛋白的表達水平無影響。熒光素酶報告基因活性檢測進一步表明靈芝孢子油明顯抑制DHT誘導的LNCaP細胞中AR的轉錄激活活性。

1.6 卵巢癌抗癌機理

梁慧超[12]研究了靈芝孢子油在卵巢癌治療過程中增強化療藥物療效，減低藥物不良反應的機制。結果表明靈芝三萜高劑量、中劑量、低劑量組與空白對照組比較，ABCB1的表達降低，差異有統計學意義，提示靈芝三萜可以影響人卵巢上皮癌細胞ABCB1基因和蛋白水平的表達。同時提示靈芝三萜可能通過影響人卵巢上皮癌細胞ABCB1的表達，增強順鉑對人卵巢上皮癌細胞的殺傷力。

2 增強免疫力

蔣兆健[13]等觀察了靈芝孢子油注射液的免疫增強作用，研究表明靈芝孢子油注射液可顯著提高正常小鼠和H22荷瘤小鼠的廓清指數K、吞噬系數α和脾臟系數；靈芝孢子油注射液可顯著提高正常小鼠和H22荷瘤小鼠由2，4-二硝基氟苯（DNFB）引起的遲發性過敏反應，說明靈芝孢子油注射液具有顯著的免疫增強作用，可提高血清IFN-γ水平。

陳鐵暉[14]等探索了靈芝孢子油膠囊對機體免疫功能的影響，研究表明中高劑量組的靈芝孢子油能促進小鼠脾淋巴細胞轉化，增強小鼠自然殺傷細胞的活性，同時能促進小鼠遲發型變態反應和小鼠抗體生成細胞增殖，提高小鼠血清溶血素水平，增強小鼠碳廓清能力。

袁誠[15]等以H22荷瘤小鼠為研究對象，研究了靈芝孢子油口服乳得免疫增強作用，結果顯示靈芝孢子油口服乳具有顯著的增強免疫作用，可提高H22荷瘤小鼠的生物調節因子IL-1、TNF-α、INF-γ的水平。

3 結論

孫青[16]等探討靈芝孢子油對老齡小鼠的免疫保護作用，結果顯示靈芝孢子油中高劑量對小鼠淋巴細胞增殖能力、抗體生成細胞數、抗體體積、單核-巨噬細胞碳廓清能力等都有明顯的增強作用。