小兒呼吸道合胞病毒毛細支氣管炎血Th17/Treg失衡機制及意義

毛國其，蔣文良

(重慶市大足區人民醫院兒童中心，重慶402360)

呼吸道合胞病毒作為臨床上一類及其容易引起嬰幼兒下呼吸道感染的常見病原體，以毛細支氣管炎的發生率較高，據調查資料顯示，每年有40%～50%的毛細支氣管炎可由呼吸道合胞病毒所致，臨床上可表現為不同程度的喘息發作、反復咳嗽等癥狀，且部分患兒可隨著疾病的不斷進展發展成為哮喘，加重病情，對患兒的生命健康造成進一步的影響[1]。目前，關于呼吸道合胞病毒毛細支氣管炎的發病機制尚未研究清楚，隨著對T淋巴細胞亞群的研究深入，對血Th17/Treg水平進行了分析，發現這兩種T細胞亞群在肺炎發生發展過程中具有重要的作用[2]。現重慶市大足區人民醫院對小兒呼吸道合胞病毒毛細支氣管炎血Th17/Treg失衡的機制展開分析，結果總結報告如下:

1資料與方法

1.1一般資料

選取重慶市大足區人民醫院2014年9月至2016年9月收治的60例呼吸道合胞病毒毛細支氣管炎患兒作為觀察組，另選擇我院收治的60例接受同期體檢的健康小兒作為對照組。觀察組患兒入院后均接受了固相酶聯免疫吸附試驗對呼吸道合胞病毒檢測，均呈現陽性，臨床上表現為不同程度的氣促、喘憋、陣發性咳嗽、肺部濕羅音等情況，診斷標準參考《諸福棠實用兒科學》[3]，排除了合并嚴重心腦血管疾病、肝腎功能障礙、發病前1個月內使用過糖皮質激素者、存在自身免疫性疾病者。觀察組中男35例，女25例，年齡2～20月齡，平均(14.9±2.4)月齡，病程在2～5d，平均病程為(3.9±0.5)d；對照組中男36例，女24例，年齡在3～22月齡，平均(15.1±1.9)月齡。兩組患兒一般資料無明顯差異，具有可比性。全部患兒均簽署了關于本次試驗的知情權同意書，試驗符合醫學倫理會審核批準。

1.2方法

采用流式細胞術對兩組小兒外周血Th17/Treg的百分率進行測量與分析，另采用定量聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction，PCR)的方法對Th17h和Treg特異性轉錄因子Rort及Foxp3 mRNA的表達水平進行測量。抽取兩組患兒空腹靜脈血5mL，放置在離心機中給予離心處理，共離心10min左右，將血清分離后放置在-20℃環境中保存[4]。所采用的流式細胞分析儀及固定破膜劑均由美國BD公司提供。參考反轉錄試劑盒說明書提取外周血淋巴細胞總RNA，合并第一條cDNA鏈，做基因擴增，對轉錄因子Rort及Foxp3 mRNA的表達水平進行測量，利用2-△Ct法進行mRNA的相對定量分析[5]。

1.3統計學方法

采用SPSS 18.0統計軟件對本次研究所取得的數據進行分析，計量資料采取t檢驗，數據以均數±標準差(χ±S)的形式表示，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1兩組小兒外周血Th17/Treg的百分率對比

觀察組Th17百分率高于對照組，Treg百分率低于對照組，差異均具有統計學意義(均P<0.05)，見表1。

表1兩組小兒外周血Th17/Treg的百分率對比(χ±S)

Table 1 Comparison of percentage of Th17/Treg in peripheral blood between two groups(χ±S)

組別例數(n)Th17(%)Treg(%)對照組601．63±0．367．40±1．12觀察組603．25±1．023．21±0．85t3．364．12P<0．05<0．05

2.2兩組小兒Th17和Treg特異性轉錄因子RORγt及Foxp3 mRNA的表達水平對比

觀察組Th17特異性轉錄因子RORγt表達水平高于對照組，Treg特異性轉錄因子Foxp3表達水平低于對照組，差異均具有統計學意義(均P<0.05)，見表2。

表2兩組小兒Th17和Treg特異性轉錄因子RORγt及Foxp3 mRNA的表達水平對比(χ±S)

Table 2 Comparison of expression levels of Th17 and Treg specific transcription factor RORγt and Foxp3 mRNA between two groups(χ±S)

組別例數(n)RORγtFoxp3對照組601．89±0．876．23±1．08觀察組605．71±0．892．34±0．61t3．894．09P<0．05<0．05

3討論

3.1毛細支氣管炎患兒體內變態反應變化

毛細支氣管炎作為臨床上一類較為常見的下呼吸道感染性疾病，以喘息為主要臨床癥狀與表現，呼吸道合胞病毒作為引起嬰幼兒毛細支氣管炎發生的病原體，屬于副黏病毒科肺病毒[6]。目前雖然有報道解釋毛細支氣管炎與哮喘的發生有明確的相關性，但具體的發病機理仍不清楚，但有研究報道指出，毛細支氣管炎患兒體內存在類似于哮喘患兒的變態反應，例如存在Th1/Th2細胞因子失衡，通常可表現為Th1細胞因子受到抑制，Th2細胞因子亢進，但這不能完全解釋毛細支氣管炎的發生機制[7]。近年來，隨著研究的不斷進展，發現Th17細胞與Th1、Th2的CD4+T細胞亞群并不相同，發現Th17可通過不同的途徑引起疾病的發生，表明Th17在炎癥及自身免疫性疾病的發生發展中起到重要的作用。

3.2毛細支氣管炎患兒體內Treg與Th17的失衡表現

在正常情況下，Treg與Th17在功能上呈現出互相拮抗的狀態，且在分化上互相一致，能夠形成一種平衡的狀態來維持機體正常的免疫功能狀態。Th17細胞具有較為明確的IL-23依賴性，能夠促進分泌出IL-17A、IL-17F、IL-21等多種細胞因子，其中IL-17能夠參與各類炎癥性疾病、腫瘤性疾病及自身免疫性疾病的發生發展，而人類的IL-17通常由Th17細胞、嗜酸性粒細胞及單核細胞等細胞產生。有臨床資料顯示，IL-17能夠對中性粒細胞的發育成熟產生突出的促進作用，能夠招募中性粒細胞，并有效促進了細胞因子的釋放，加重炎癥反應，另外，IL-17還能夠對氣道組織的纖維化產生促進作用，并參與了氣道的重塑[8]。Treg細胞則能夠對免疫細胞產生突出的負性調節作用，通過促進釋放出IL-10等效應因子，從而對T細胞的活性及增殖產生抑制作用，發揮免疫抑制的功能。而RORγt和Foxp3分別作為Th17和Treg細胞特異性的轉錄因子，參與了兩種細胞的分化和細胞因子的分泌，通過對二者表達水平的檢測，能夠進一步分析Th17/Treg的失衡參與了小兒呼吸道合胞病毒毛細支氣管炎的發生發展情況。

本研究結果顯示，觀察組Th17百分率高于對照組，Treg百分率較低，差異具有統計學意義(P<0.05)。觀察組Th17特異性轉錄因子RORγt表達水平高于對照組，Treg特異性轉錄因子Foxp3表達水平較低，差異具有統計學意義(P<0.05)。結果提示小兒呼吸道合胞病毒毛細支氣管炎相比于健康小兒在Th17及Treg方面呈現出明顯的表達差異，當Th17/Treg表現出失衡的情況時，則參與了疾病的發生發展。綜上所述，Th17/Treg的失衡參與了小兒呼吸道合胞病毒毛細支氣管炎的發生發展，但由于本次研究樣本量有限，在收集數據方面可能存在一定的差異，需要進一步擴大樣本量進一步研究，以獲得精確的結論，從而為呼吸道合胞病毒肺炎患兒的治療提供可靠依據。

[1]陳建江,黃肖梅,萬學凌.白三烯受體拮抗劑對呼吸道合胞病毒性毛細支氣管炎Th1/Th2細胞平衡的影響[J].臨床合理用藥雜志,2015,8(17):8-10.

[2]Khor C S,Sam I C,Hooi P S,etal.Epidemiology and seasonality of respiratory viral infections in hospitalized children in Kuala Lumpur, Malaysia: a retrospective study of 27 years[J].BMC Pediatr,2012,12:32.

[3]Hundorfean G,Neurath M F,Mudter J.Functional relevance of T helper 17 (Th17) cells and the IL-17 cytokine family in inflammatory bowel disease[J].Inflamm Bowel Dis,2012,18(1):180-186.

[4]Li H F,Xie Y C.Does increased serum IL-17 level imply its pathogenic role in myasthenia gravis?[J].Muscle Nerve,2012,45(1):147.

[5]Miossec P,Kolls J K.Targeting IL-17 and TH17 cells in chronic inflammation[J].Nat Rev Drug Discov,2012,11(10):763-776.

[6]葉永燦,黃少彬.呼吸道合胞病毒肺炎120例患者的血氣特點及治療分析[J].山西醫藥雜志,2017,46(11):1351-1353.

[7]杜許芳,周炯英.Th17/Treg失衡在肺炎支原體肺炎患兒中的作用及其機制[J].臨床與病理雜志,2016,36(12):2017-2021.

[8]周君芬.孟魯司特對毛細支氣管炎患兒血清IL-6和IL-10水平的影響[J].中國婦幼健康研究,2014,25(6):982-984.