Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白表達與子宮瘢痕愈合的相關性研究

陳丹玲，梁海英，易 菁，劉國成

(廣東省婦幼保健院產科，廣東 廣州 511400)

大量資料顯示，剖宮產產后子宮愈合是一個時間較長的過程，影響創面愈合的因素較多，通過對這些指標的變化進行有效的監測不僅能夠制定有效的干預方法，同時能夠幫助產婦獲得更好的妊娠結局[1-2]。目前在臨床工作中發現的子宮愈合與肌肉纖維增生相關的研究較多，但子宮愈合與膠原蛋白及細胞基質的相關研究較少，現廣東省婦幼保健院展開如下研究，旨在探討剖宮產術后不同時期子宮瘢痕愈合組組織與正常組組織中Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白的表達水平的異同，現將結果報告如下：

1資料與方法

1.1一般資料

選取廣東省婦幼保健院自2015年4月至2017年4月收治的45例瘢痕子宮再進行剖宮產的產婦作為觀察組。觀察組產婦年齡在27～35歲，平均年齡為(30.9±2.9)歲，孕周為33～42周，平均孕周(38.3±1.4)周；前次剖宮產所存在的指征已不存在，距離上次剖宮產時間為1～12年，平均(6.9±1.4)年，均為子宮下段剖宮產；上次剖宮產指證包括胎兒窘迫9例，產程停滯9例，巨大兒7例，胎盤前置6例，妊娠期高血壓疾病6例，胎盤早剝4例，妊娠合并內科疾病4例；既往剖宮產次數為1～3次，平均(2.8±0.3)次。另選擇45例因產科并發癥需要行首次剖宮產的產婦作為對照組，年齡25～35歲，平均年齡為(31.6±2.7)歲，孕周為32～41周，平均孕周(37.9±1.5)周。兩組臨床資料比較無明顯差異，具有可比性。全部研究對象均簽署了關于本次試驗的知情權同意書，研究符合我院醫學倫理會標準。

1.2分組

按照剖宮產術中肉眼可見的子宮瘢痕肌層厚度將觀察組分為A組(子宮下段完整組：指的是子宮下段的肌層與漿膜層均保存完整無缺損，且肌層的厚度在3mm以上)、B組(子宮下段變薄組：指的是子宮下段的肌層與漿膜層均保存完整，但肌層較薄，厚度在3mm及以下)及C組(子宮下段破裂組：指的是子宮肌層部分或全部缺損，僅存在漿膜層者)；將觀察組產婦按照本次妊娠距離上次剖宮產的時間間隔分為6組，分別為<3年組、3～4年組、5～6年組、7～8年組、9～10組及>10年組。

1.3方法

分別收集子宮瘢痕組織與子宮下段正常組織，對兩組收集到的組織進行免疫組化染色與檢測。探究子宮瘢痕肌層與剖宮產間隔時間的相關性，并對子宮瘢痕肌層組織中Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白的表達情況進行分析。檢測方法為：①收集到兩組產婦的子宮瘢痕組織后，用甲醛固定后制備成石蠟切片。②操作步驟：二甲苯脫蠟→抗原修復→內源性過氧化物酶滅活→加入一抗(1:200 Ⅰ、Ⅲ型膠原)→放置在4℃的環境中過夜→DAB染色→蘇木精溶液→脫水→封片。③結果判斷標準：將PBS代替一抗作為空白對照組，對結締組織的染色情況進行觀察，無染色或者是與背景染色一致的即為陰性細胞[3-4]。著色的強度標準為[5]：無染色為0分；染色弱為1分；中染色為2分；強染色為3分。陽性細胞的評分標準[6]：陽性細胞<10%為0分；陽性細胞在10%～20%為1分；陽性細胞在30%～50%為2分；陽性細胞在50%以上為3分。總體評分的計算方法為染色強度與陽性細胞評分之和。

1.4統計學方法

采用統計學軟件SPSS 19.0對數據進行處理及分析，計數資料比較則采用χ2檢驗，計量資料比較采用t檢驗，多組間計量資料比較采用方差分析，以均數±標準差(χ±S)表示，P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1本次妊娠距離上次剖宮產間隔時間與瘢痕子宮肌層愈合的關系

本次妊娠距離上次剖宮產間隔時間在3～4年組的產婦在B組、C組中比例均明顯低于間隔時間<3年組、5～6年組、7～8年組、9～10年組、>10年組中B組、C組中產婦的比例，差異具有統計學意義(均P<0.05)，見表1。

表1本次妊娠距離上次剖宮產間隔時間與瘢痕子宮肌層愈合的關系[n(%)]

Table 1 Relationship between interval of present pregnancy and last cesarean section and healing of scarred uterine muscle [n(%)]

間隔時間(年)例數(n)A組B組C組<3年組82(25．00)3(37．50)3(37．50)3～4年組97(77．78)1(11．11)1(11．11)5～6年組72(28．57)3(42．86)2(28．57)7～8年組72(28．57)2(28．57)3(42．86)9～10年組61(16．67)2(33．33)3(50．00)>10年組82(25．00)3(37．50)3(37．50)χ26．987．228．25P<0．05<0．05<0．05

2.2不同時期子宮瘢痕肌層組織中Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白的表達水平對比

觀察組中3～4年組Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋評分與對照組相比無明顯差異(P>0.05)。觀察組中<3年組、5～6年組、7～8年組、9～10年組、>10年組Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋評分與對照組相比均較高，差異具有統計學意義(均P<0.05)，見表2。

表2不同時期子宮瘢痕肌層組織中Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白的表達水平對比(χ±S)

Table 2 Comparison of expression of collagen Ⅰand Ⅲ in scarred myometrium in different periods(χ±S)

間隔時間(年)例數(n)Ⅰ型膠原蛋白評分Ⅲ型膠原蛋白評分觀察組 <3年組85．52±0．475．70±0．36 3～4年組92．35±0．452．38±0．41 5～6年組73．35±0．713．29±1．15 7～8年組74．72±0．514．68±0．56 9～10年組65．19±0．605．31±0．68 >10年組85．56±0．615．67±0．53對照組452．36±0．282．40±0．51F6．367．25P<0．05<0．05

3討論

3.1Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白在剖宮產術后不同時期子宮瘢痕愈合中的表達

剖宮產在臨床工作中較為常見，目前對于剖宮產的研究也較多，但剖宮產對產婦的影響不僅表現為心理以功能方面的變化，對于子宮的恢復情況及后期創口的愈合也需要進行關注和研究，但目前關于此方面的分析仍較少。吳彩林等于2013年研究發現，由于瘢痕子宮的愈合、子宮恢復與再次妊娠及生產有密切的相關性，因此，對這方面進一步研究至關重要。有資料顯示，在正常條件下，子宮肌層主要由不同類型的平滑肌組織、彈力纖維及膠原纖維構成，其中平滑肌組織與膠原纖維的比例可維持在8:2左右，而在瘢痕組織中則可見到大量分布的、交錯縱橫排列的膠原纖維束，同時伴隨著較少的纖維細胞數量[7]。另有報道指出，由瘢痕組織所構成的細胞通常可分泌出多種因子，一方面促進了肉芽組織的過度表達，另一方面對膠原纖維及纖維連接蛋白等細胞外基質產生了促進分泌的作用。其中人體內的纖維型膠原以Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型為主，同時可作為體內含量最高的蛋白質，與彈性纖維共同維持組織內的彈性功能，并確保提供有效的張力強度[8]。申恒春于2013年臨床資料發現，瘢痕子宮在愈合期間，同樣也可伴隨成分方面的改變，例如機體為了進一步促進組織修復能力的明顯提升，使得Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白的含量發生相應的改變。在瘢痕逐漸形成的過程中，當膠原沉積量明顯升高時則會導致瘢痕疙瘩的出現，并對膠原分解過程進行有效的控制，同時也在一定程度上減少了膠原過度沉積的情況，促進瘢痕縮小并軟化。

3.2Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白表達在剖宮產術后不同時期子宮瘢痕愈合中的相關性

本次研究結果顯示，本次妊娠距離上次剖宮產間隔時間在3～4年組的產婦在B組、C組中比例均明顯低于間隔時間<3年組、5～6年組、7～8年組、9～10年組、>10年組中B組、C組中產婦的比例，差異具有統計學意義(P<0.05)。提示本次妊娠距離上次剖宮產間隔時間在2～4年期間，此時傷口愈合情況要明顯優于其他時期，出現子宮薄弱甚至破裂的風險較低，分析出現此結果的原因是在這段時期，瘢痕肌層所存在的炎癥逐漸消失，平滑肌也隨之修復，能夠確保子宮瘢痕肌肉達到最佳的狀態，相比之前或之后的時間而言，極大程度地降低了子宮瘢痕愈合不良的情況，也降低了子宮破裂的發生風險[9]。在觀察組中3～4年組Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白評分與對照組相比無明顯差異(P>0.05)。觀察組中<3年組、5～6年組、7～8年組、9～10年組、>10年組Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白評分與對照組相比均較高，差異具有統計學意義(P<0.05)。結果提示，Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋為人體內含量最高的兩類蛋白，在觀察組中3～4年組Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋評分與對照組相比無明顯差異可說明此時子宮瘢痕基層膠原的表達情況與正常的子宮無明顯差異，體現出此時期達到了最佳的愈合狀態，且同時具備了最佳的抗張力強度，而隨后表現為抗張力強度明顯降低，與以往研究報道基本一致[10]。

綜上所述，本次妊娠距離上次剖宮產時間間隔3～4年可作為子宮肌層修復的最佳愈合時期，原因是此時期內Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白的表達水平與正常子宮肌層表達無明顯差異。由于本次研究樣本量有限，在收集數據方面可能存在一定的缺陷，可通過進一步深入分析以獲得精確的結論。

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