青春雙歧桿菌的波狀層次生長特征觀察

劉俊康， 鄧 渝, 郭林明

(第三軍醫(yī)大學藥學系 生藥學與天然藥物化學教研室，重慶 400038)

生物波研究較早地提出了生物耗散與生態(tài)統(tǒng)一機制等生物波動生長機制[1]，逐步促成了條件論的理論進展[2]。在此理論指導下，研究了體外培養(yǎng)綠膿桿菌生長的層次狀結構[3]、變形桿菌、酵母菌、大腸埃希菌等的波狀層次生長特點[4]，以及人膀胱癌細胞的波狀層次生長特征[5]，但作為厭氧菌種類的青春雙歧桿菌，其在體外培養(yǎng)，能否在生長過程中形成波狀層次的結構及對青春雙歧桿菌的生長、生存的意義研究較少，作為腸道重要的生理菌群，深入研究青春雙歧桿菌在各種環(huán)境條件下的生長特性、生存方式，以此創(chuàng)造更利于雙歧桿菌生長的條件，保持腸道微生態(tài)平衡具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌種來源 青春雙歧桿菌(Bifidobacteriumadolescentis)，本實驗室保存。

1.1.2 培養(yǎng)基、菌種稀釋液及厭氧指示劑 ①改良BS 培養(yǎng)基：多胨18 g，酵母浸膏5 g，葡萄糖10 g，可溶性淀粉0.5 g，吐溫-80 1 g，L-鹽酸半胱氨酸鹽酸鹽1 g，A液10 mL,B液15 mL，牛肝浸液150 mL，牛腦浸液312.5 mL，牛心浸液462.5 mL，瓊脂20 g，上述成分溶于超純水，定容至1 000 mL。調pH值至7.2～7.4，分裝，115 ℃無菌滅菌20 min。A液配方：K2HPO42.5 g,KH2PO42.15 g,超純水25 mL；B液配方：MgSO4·7H2O 1 g,FeSO4·7H2O 0.05 g,NaCl 0.05 g,MnSO40.033 7 g,超純水25 mL。牛腦、牛肝、牛心浸液制備方法：去筋膜，剪碎組織(約1 ～2 mm3)，稱重加雙倍量水(即500 g組織加1 000 mL水)浸泡過夜，去掉表面油脂，45 ℃預熱1 h，100 ℃水浴鍋加熱1 h后8層紗布過濾，-20 ℃冰箱保存。②菌種稀釋液：KH2PO44.5 g，Na2HPO46 g，L-鹽酸半胱氨酸鹽酸鹽 0.5 g，吐溫-80 0.5 g，瓊脂1 g，超純水定容至1 000 mL，115 ℃無菌滅菌20 min，備用。③厭氧指示劑：硼酸二鈉溶液(Na2B4O7·10H2O 2.5 g，美蘭25 mg，酚紅1 mg，超純水400 mL，以上成分混合溶解后，用5 mol/L NaOH溶液調pH值至9.0，備用)與瓊脂溶液(瓊脂0.625 g，超純水250 mL)分別加熱煮沸，混勻，分裝安瓿。……