臨床產ESBLs大腸埃希菌整合子檢測及基因型分析

藍惠華， 張 玲， 王瑋瑋， 楊 艷， 程 玲， 駱園園， 金丹丹， 王厚照

(廈門大學附屬成功醫院 檢驗科,福建 廈門 361003)

質粒編碼的超廣譜β-內酰胺酶(Extended Spectrum Beta-Lactamases，ESBLs)是革蘭陰性桿菌中抵抗β-內酰胺酶類抗生素的最主要機制之一，自20世紀80年代初首次報道以來，β-內酰胺酶類抗生素尤其是廣譜頭孢菌素的濫用，是導致產ESBLs菌株廣泛流行的主要因素[1]。產ESBL大腸埃希菌(ESBL-EC)是目前臨床分離的最常見的產ESBLs菌株，可引起醫院許多嚴重和致命性感染，如腦膜炎和血液感染等。整合子與細菌多重耐藥和耐藥基因播散密切相關，為了解ESBL-EC的β-內酰胺類獲得性耐藥基因與整合子遺傳標記存在狀況，對98株ESBL-EC進行了14種β-內酰胺類獲得性耐藥基因以及3種整合子標記(Intl1、Intl2和Intl3)檢測，為臨床治療、預防產ESBLs 細菌引起的感染提供一定參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 研究對象 分離的ESBL-EC菌株來源于2014年1月至12月廈門大學附屬成功醫院住院患者的中段尿、陰道分泌物、血液等標本，剔除同病例相同部位重復分離的菌株，共98株。質控菌株：大腸埃希菌ATCC25922、銅綠假單胞菌 ATCC27853，由該院微生物室保存提供。

1.1.2 儀器和試劑 生物安全柜(HFSAFE-1200B2)，哥倫比亞血瓊脂平板(鄭州安圖)，CO2恒溫培養箱(MCO-15AC)，VITEK-Compact 2全自動微生物分析系統(法國梅里埃公司)，Micro17R微量冷凍離心機，Thermo微量移液器，恒溫金屬浴，XW-80A型旋渦混合器，Nanophotometer超微量可見分光光度計，BIO-Rad S1000基因擴增儀，BIO-Rad電泳儀，BIO-Rad凝膠成像系統。dNTPs、TaqDNA聚合酶、蛋白酶K和DNA Marker由TaKaRa公司提供；TBE電泳緩沖液由實驗室自配；MH瓊脂和藥敏紙片購自英國OXOID公司。

1.2 方法

1.2.1 細菌分離和鑒定及藥物敏感試驗 采用VITEK-Compact 2全自動微生物分析系統配套的鑒定卡和藥敏卡進行細菌鑒定及藥敏。……