先天性耳聾基因篩查與診斷的臨床應(yīng)用進(jìn)展探討

劉繼紅 王霞

先天性耳聾是常見的臨床出生缺陷，因技術(shù)條件的影響，不能描述性診斷耳聾，也不能研究深層病因[1]。隨著近年來基因診斷技術(shù)的應(yīng)用和發(fā)展，發(fā)現(xiàn)不少先天性耳聾致病基因，臨床上開始應(yīng)用耳聾基因診斷技術(shù)，可有效診斷和預(yù)防遺傳性耳聾。隨著不斷研究與應(yīng)用分子遺傳學(xué)技術(shù)，對(duì)于耳聾的診斷基因診斷技術(shù)的作用顯著，具有指導(dǎo)康復(fù)、防聾的效果。目前國內(nèi)部分區(qū)域已經(jīng)實(shí)施新生兒耳聾基因篩查的相關(guān)工作，但還是處于發(fā)展起步的階段。以耳聾基因篩查檢測(cè)新生兒，能夠提前預(yù)警篩查陽性患兒，利于后期的預(yù)防和干預(yù)。

1 耳聾基因概述

遺傳性耳聾包括綜合征性耳聾、非綜合征性耳聾兩類[2]。遺傳性耳聾中大約有70%為非綜合征性耳聾，是主要的先天性耳聾表現(xiàn)方式。依據(jù)不同的遺傳方式，遺傳性耳聾包括顯性遺傳、X連鎖遺傳、隱性遺傳、母系遺傳等模式。非綜合征性耳聾中常染色體隱性遺傳占據(jù)80%，常染色體顯性遺傳占據(jù)15%，X連鎖遺傳或者線粒體母系遺傳占據(jù)5%。非綜合征性耳聾實(shí)際上是在人類基因組結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上依據(jù)耳聾基因遺傳方式、定位和報(bào)告順序進(jìn)行命名[3]。經(jīng)附加DFNA定位顯性遺傳的基因，以附加DFN來對(duì)隱性遺傳經(jīng)X連鎖遺傳和DFNB進(jìn)行命名。

2 基因診斷方法

目前變性高效液相色譜（DHPLC）分析、基因測(cè)序、限制性酶切、高分辨率熔解（HRM）曲線分析、基因檢測(cè)芯片等是主要的耳聾基因診斷措施[4]。現(xiàn)今應(yīng)用范圍最廣的是基因測(cè)序，屬于基因突變檢測(cè)診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，具有結(jié)果準(zhǔn)確直觀、平臺(tái)標(biāo)準(zhǔn)化的優(yōu)勢(shì)，可有序分析任意基因片段，不但適合檢測(cè)已知耳聾基因，也適合檢測(cè)新出現(xiàn)的耳聾基因，但是需要測(cè)序公司進(jìn)行測(cè)序工作，存在較長檢測(cè)時(shí)間[5]。變性高效液相色譜（DHPLC）分析與高分辨率熔解（HRM）曲線分析雖然存在不同的檢測(cè)原理，但是具備特異度高、靈敏度高以及檢測(cè)快速、成本低等特點(diǎn)，適合檢測(cè)已知耳聾基因的大樣本。限制性酶切實(shí)際上是依據(jù)限制性內(nèi)切酶來切割DNA中特定序列，構(gòu)建不等大小的核酸片段，之后通過凝膠電泳方式比對(duì)核酸片段分子量，對(duì)是否存在已知類型進(jìn)行判斷，適合在大樣本定點(diǎn)突變檢測(cè)中應(yīng)用，成本雖然較低，但耗費(fèi)時(shí)間比較長。基因芯片檢測(cè)是在人類基因組測(cè)序基礎(chǔ)上實(shí)現(xiàn)的[6]，依據(jù)已知基因位點(diǎn)特異性引物來擴(kuò)增以及熒光標(biāo)記相關(guān)基因位點(diǎn)的基因片段和帶有特異性核苷酸序列核酸探針進(jìn)行雜交處理，依據(jù)熒光結(jié)果進(jìn)行判讀。相比較傳統(tǒng)檢測(cè)方法，基因芯片檢測(cè)方式擁有速度快、高準(zhǔn)確性、高通量的特點(diǎn)，但因存在較高價(jià)格，只能同時(shí)檢測(cè)GJB2基因、SLC26A4基因、線粒體12S rRNA基因、GJB3基因等9個(gè)位點(diǎn)。耳聾基因存在多種類型，單一檢測(cè)方法不能檢測(cè)所有耳聾基因，所以，需要設(shè)計(jì)有效、合理、快速且經(jīng)濟(jì)的診斷方式[7]。

3 基因診斷的應(yīng)用

耳聾基因診斷技術(shù)能夠提供給先天性遺傳性耳聾患者準(zhǔn)確的基因水平診斷依據(jù)，有利于評(píng)估后代遺傳性耳聾患病風(fēng)險(xiǎn)或者進(jìn)行婚育指導(dǎo)。基因診斷也能夠檢測(cè)懷孕早期胎兒基因發(fā)生突變的情況，有利于降低發(fā)生遺傳性耳聾的概率。現(xiàn)今在國內(nèi)外開已經(jīng)開展對(duì)于聽力殘疾人群的相關(guān)基因診斷措施，但一般都是在耳聾患者中，在篩查正常人群耳聾基因方面還處于初步發(fā)展階段[8]。

4 結(jié)論

聽力殘疾是目前各類殘疾的首位疾病，如發(fā)生聽力障礙不僅會(huì)嚴(yán)重威脅殘疾人健康，也會(huì)對(duì)其日后生存質(zhì)量帶來極大影響，是對(duì)出生人口素質(zhì)影響的關(guān)鍵因素，同時(shí)也是遺傳咨詢和孕前檢查的常見疾病。人聽覺系統(tǒng)中聽覺傳導(dǎo)通道、感覺通絡(luò)、傳音通路的中樞系統(tǒng)和聽覺神經(jīng)出現(xiàn)病變，十分容易誘發(fā)聽力減退現(xiàn)象，統(tǒng)稱為耳聾，聽力障礙是該疾病的主要表現(xiàn)。遺傳性是由于改變了遺傳素質(zhì)引發(fā)阿的耳聾，異常遺傳物質(zhì)會(huì)嚴(yán)重影響后代，引發(fā)其耳聾，是常見的一種神經(jīng)系統(tǒng)缺陷疾病，如與外耳畸形合并發(fā)生，叫做綜合征型耳聾。如果患者沒有發(fā)生其他系統(tǒng)疾病和外耳畸形，被叫做非綜合征型耳聾。遺傳性耳聾的存在很多種基因，目前已鑒定或者克隆的常染色體隱性遺傳耳聾基因?yàn)?0個(gè)，常染色體顯性遺傳耳聾基因?yàn)?7個(gè)，線粒體耳聾基因?yàn)?個(gè)，X連鎖耳聾基因?yàn)?個(gè)。先天性耳聾是因孕前遺傳因素引發(fā)的，也可能是因?yàn)槿焉锊涣家蛩匾l(fā)的，如孕婦感染梅毒、風(fēng)寒等引發(fā)的，或者孕期耳毒性藥物的不合理使用；未來耳聾治療過程中干細(xì)胞治療和基因治療屬于主要方向，但還處于發(fā)展階段，不能正式應(yīng)用。耳聾基因篩查能夠早期診斷與干預(yù)遺傳性耳聾，有利于后期的預(yù)防。目前國內(nèi)擁有眾多的耳聾患者，由于耳聾群體交流存在一定特殊性，最為常見的就是同證婚配。因同證婚配提升同基因型耳聾婚配率，若不開展人為的干預(yù)，會(huì)將遺傳性耳聾新生兒發(fā)生例數(shù)增加[9-12]。