薄層色譜技術在中藥檢驗中的應用

向金蓮 王 偉 任飛宇

（云南省食品藥品監督管理局藥品和醫療器械審評中心，云南 昆明 650000）

薄層色譜鑒別法（TLC）是在20世紀20年代發展起來的，主要用于中藥快速分離與定性分析[1]。該技術具有分離、鑒定雙重功能，而且操作簡便、直觀性強。該技術的主要原理是將待測樣品溶液點在薄層板上，在展開容器內利用展開劑展開，然后將待測樣品中的相關成分分離開來。然后，將得到的色譜圖與相關對照物按照標準的色譜圖進行對比分析。同時，也可利用薄層掃描儀掃描進行鑒別或含量測定。近年來隨著科技的快速發展，薄層色譜法得到了極大的發展，涌現出不少新技術。本文主要對這些技術在中藥材檢驗中的應用進行簡要綜述。

1 高效薄層色譜法及其應用

該技術中所應用的薄板是采用顆粒較細的吸附劑利用噴霧法制成的，具有涂層均勻、重現性好等優點。點樣配備了新裝備，因此，可自動或半自動操作。吸附劑在疏水與親水方面的性能進行了改進，可完成正相薄層色譜分離，還能完成反相薄層色譜分離。這極大提高了色譜的選擇性。展開方式更加多元化，不僅能實現普通TLC樣的直線展開，還能實現向心式展開或圓心式展開。由于對點樣技術與板計算進行了改進，極大提高了對藥材的檢測靈敏度，分離能力也明顯提高。同時，這還繼承了TLC在敞開式床上分離的有關優勢，包括同步檢測功能，逐步展開，避免中毒等。HPLTC技術除了用于藥材的定性分析，還可用于藥材的定量分析。目前，主要應用于對生物堿、黃酮類物質的檢測與分析。張尊聽等利用HPLTC技術檢測了野葛根中游離葛根素與總葛根素的含量[2]。楊小明等利用反相高效薄層色譜技術對銀杏葉石油醚提取物進行分離，得到了純度較高的聚戊烯醇同系物的相關混合物[3]。米莉莉等利用HPLTC掃描技術對比分析了天然蟲草與人工蟲草菌絲體中和苷類有效成分的含量。同時，他們還得到了不同蟲草樣品的熒光淬滅薄層色譜指紋圖譜[4]。在此技術的基礎上，伍慶發現了如何快速檢測知母藥材中菝葜皂苷元的方法[5]。張建生等運用該技術對麻黃所含的生物堿類化合物進行了鑒別，同時，分離出6種生物堿[6]。梁乾德等綜合運用3種檢查方法對四物湯中C1、C2、C3部位以及四味單藥相應部位進行了分析對比。其中，檢查方法包括HPTLC、高效液相色譜法、電噴霧離子化質譜法[7]。上述研究結果證實高效薄層色譜法在測定中藥成分方面具有諸多優勢，不僅分離效率高，而且穩定性與重現性均很好。因此，此法可用于中藥材質量控制與含量測定研究中。

2 反相薄層色譜法及其應用

反相薄層色譜法（RP-TLC）中的固定相采用的是經烷基化修飾的硅膠，基本都是被化學鍵和在載體物質上。這不是機械覆蓋在它的上面，制備過程非常復雜，不過斑點擴散小，而且分離效果高。化學鍵合相硅膠的硅烷化程度，為分離提供選擇性。因此，我們可根據需要挑選合適的固定材料，獲得最好的分離效果。該技術所用的展開劑比較簡單，通常選用水、甲醇、乙腈等溶劑。若有必要還需采用至少2種溶劑的混合展開劑。

張子忠等對北沙參成分進行了檢測，最終得到了8個主要譜峰。同時，他們還定性研究了歐前胡素成分。實驗中所運用的展開劑為甲醇與水，比例為7∶3，并選用了甲基鍵合硅膠GF254板[8]。蘭亦青等通過對白芍中的有效成分進行檢測分析，分離出芍藥苷、丹皮酚、苯甲酸3種成分。實驗中運用了RP- C18F254 高效反相薄層板，選用水位溶劑調節劑，同時，將0.1%TBABr加入水中，作為離子對試劑[9]。OhnoT借助該檢測技術對人參、紅參中人參皂苷Rgl進行了鑒定，同時，還鑒定了五味子中的五味子素，梔子中的梔子苷，葛根中的葛根素，龍膽與日本龍膽中含有的龍膽苦苷等成分[10]。

3 假相薄層色譜法及其應用

該檢測技術中采用的流動相并非有機溶劑，而是環糊精的水溶液與低濃度的表面活性劑。其中，所用的固定劑多是聚酰胺薄膜。該檢測技術能夠將一些不溶于水的物質以及芳烴異構體進行有效的分離，同時，還能檢測藥物中含有的一些微量雜質，并能進行體內藥物分析。

戈早川等通過實驗成功分離出黃連及相關制劑中的組分，主要有藥根堿、小檗堿、巴馬汀。實驗所用展開劑是按照9∶1比例配制的2%CPC-醋酸乙酯，采用聚酰胺薄膜。此外，他們還建立了一種膠束薄層掃描法能同時測定四種成分[11]。

4 微乳薄層色譜法的應用

有機溶劑是經典薄層色譜法中常用的一類展開劑。近年來隨著技術的發展，以微乳為展開劑的薄層色譜研究有所發展。微乳（microemulsion，ME）的主要成分是乳化劑、助乳化劑、水相以及油相。這些成分共同構成了光學上各向同性，熱力學溫度的液-液分散體。將這些組分合理搭配就能形成均勻透明的穩定體系或微呈乳光的穩定體系。將微乳作為流動相的色譜被稱為微乳色譜。

崔淑芬等通過該技術鑒別了3種甘草，分別為光果甘草、烏拉爾甘草、脹果甘草。他們將11%甲醇，2.4%正庚烷、0.23 mmol/LSDS配制成微乳[12]。康純等通過該技術成功分離出黃酮類的有效成分，實驗所采用的固定相為聚酰胺薄膜，流動相采用SDS-正丁醇-正庚烷-水微乳液。其中，SDS有6種可用，包括油包水（W/O）型、雙連續型（W/O-O/W）及水包油（O/W）型，主要區別在于含水量不同[13]。展開劑選用含水量75%（O/W型）微乳液-甲酸，按比例9.5∶0.5配制。此外，他們還對槐米、黃芩等7種中藥材與中藥飲片、雙黃連口服藥等7種中成藥的成分進行了分離測定，取得了較好的效果[14]。

5 薄層色譜技術的應用前景

由于薄層色譜技術在中藥材、中藥成方制劑中有效成分的定性鑒別專屬性強，使用設備簡單，易于操作，在目前的藥品質量標準定性鑒別中（如中國藥典和國家食品藥品監督管理局標準），已大大地超過了顯微鑒別、理化鑒別和光譜鑒別。自20世紀80年代以來，薄層技術在色譜板、點樣技術、展開技術方面獲得了快速發展，加之的日益規范化，儀器設備精密度的提高，在中藥檢驗中得到了廣泛應用[15]。目前，該技術主要被用于對中藥材及相關中藥制劑的定性定量分析。若繼續加強這方面技術的研究，薄層色譜技術將會有更好的應用前景。

參考文獻

[1] 單紅艷.薄層色譜法檢驗中藥應注意的問題[J].中國中醫藥現代遠程教育,2011,9(17):146-147.

[2] 張尊聽,楊伯倫,劉謙光,等.太白山野葛根中異黃酮和葛根素含量隨季節的變化[J].天然產物研究與開發,2002,13(6):33-33.

[3] 楊小明,謝吉明,陳鈞.銀杏聚戊烯醇同系物的提取及其HPTLC法的初步分析[J].鎮江醫學院學報,2000,10(4):617-617.

[4] 米莉莉,張素文,孫家進,等.冬蟲夏草及人工蟲草核苷類成分的TLCS研究[J].中成藥,2003,25(5):402-402.

[5] 伍慶.知母中菝葜皂甙元測定方法探討[J].貴州師范大學學報自然科學版,2002,20(4):72-72.

[6] 張建生.高效薄層色譜法鑒別國產麻黃中的麻黃生物堿[J].藥物分析雜志,1992,12(1):38-38.

[7] 梁乾德,馬百平,李衛華,等.用色譜和ESI-MS方法考察四物湯提取部位的化學成分[J].中國中藥雜志,2004,29(4):334-334.

[8] 張子忠,呂青濤,丁兆平.北沙參的反相薄層色譜分離與色譜參數的測定[J].基層中藥雜志,1992,6(3):25-25.

[9] 蘭亦青,范友華,盧寧,等.白芍中丹皮酚、芍藥苷和苯甲酸的反相薄層色譜分析[J].天然產物研究與開發,2001,13(6):42-44.

[10] 朱景寧(譯).以反相薄層色譜法/掃描密度測定法對生藥進行鑒定[J].國際中醫中藥雜志,2007,29(3):174-174.

[11] 戈早川,周建明.膠塑薄層掃描法測定黃連及其制劑中的小檗堿、巴馬汀和藥根堿[J].分析化學,2004,32(1):1-1.

[12] 崔淑芬.微乳薄層色譜法鑒別甘草的研究[J].中草藥,2007,38(4):540-540.

[13] 康純,聞莉毓,丁仲伯.微乳薄層色譜用于黃酮類成分分離鑒定的研究[J].藥物分析雜志,2000,20(2):123-123.

[14] 鄭志偉.雙波長薄層掃描法測定尿塞通片中鹽酸小檗堿的含量[J].安徽中醫學院學報,2003,22(3):51-51.

[15] 張虹,陳振德,柳正良.TLC-HPLC法分析榧屬植物葉中的紫杉酸[J].第二軍醫大學學報,2003,24(1):106-106.