動物檢疫中熒光定量PCR技術應用

李琳琳

（山東省濰坊市昌樂縣畜牧獸醫局 242600）

熒光定量PCR技術可以通過在PCR整體反應體系增加熒光基團，應用熒光獨有的信號積累實施監測整個PCR的進程情況，最后可以通過標準化的曲線進行對相關未知的板塊進行定量分析。不僅可以實現PCR從定量監測到定性的飛躍，還可以根據常規的PCR相對比，具備比較有差異性的靈活性更加強、無任何污染、自動性靈敏度較高、反應多重性等優點。目前現階段已經廣泛應用基因表達研究等很多核心領域。

1 動物檢疫中熒光定量PCR技術的應用

我國實時熒光定量PCR技術是根據上世紀90年代所面世的，短短的經歷了幾年的時間，已經被逐漸的廣泛應用在各大生物學的領域當中。Taq Man、Lightcycler、Amplisensor和分子信標熒光探針也是目前我國用于熒光定量PCR檢測的重要來源[1]。

1.1 應用炭疽桿菌的檢測

炭疽桿菌的檢測是一種面對重要性的人畜共患病的原理，具備很高的致病性效果，并且還是重要的生物領域戰劑基礎之一，因此，打造一種簡單性快速的炭疽桿菌的檢測方法是非常有必要的操作。我國的相關科學調查表明，炭疽桿菌的檢測編碼存在熱毒素的PXO1質梨上的基因以及編碼莢膜的PXO2質粒為基礎的靶，打造了一種簡單化并且便捷的定量檢測形式。該檢測方法的靈敏度需要達到103拷貝體系，還能夠區分出炭疽桿菌的檢測與其他炭疽桿菌的檢測情況[2]，方便快捷并且準確的對炭疽桿菌進行定量監測分析。

1.2 大腸桿菌的定量檢測情況

大腸桿菌通常都是人類腹瀉或者是出血性腸炎及溶血性尿毒癥所導致的重要發病原因，也是我國現階段比較流行性的疾病。通過相關的科學調查研究表明，我國流行病學對其他的感染技能比較低，因此，對低劑量的大腸桿菌的檢測就比較極為重要。由于以往我國傳統的醫學分離培養檢測技術存在著檢測靈敏度比較低的情況，并且大腸桿菌的血清學鑒定情況也不太穩定，可能會出現一些遺漏的情況[3]。根據大腸桿菌O157∶H7 rfb E基因作為合適的待檢測靶基因，根據復合性的熒光定量原理進行分析檢測，建立一個檢測大腸桿菌 O157∶H7 rfb E基因的重要方法。該情況檢測的靈敏度可以比以往傳統的檢測靈敏度高達一倍之多，定量檢測的漏洞也會隨之減少一大半。能夠快速并且方便準確的對大腸桿菌O157∶H7 rfb E進行定量分析，也算是為大腸桿菌定量檢測情況提供了良好的新型解決辦法。

1.3 單獨的李斯特菌檢測情況

單獨的李斯特菌被WHO譽為4種主要的食物源性疾病致病菌基礎之一，目前現階段該菌已經被國家質檢總局列為進出口食品必須檢查的菌或者是監控病原菌。此外，其他方法的檢測情況消耗的時間都比較長，檢定員也需要的多并且步驟也是相當的復雜，不利于對該菌進行快速診斷。通過該菌的重要毒素基因的ly A基因作為靶序列設計一對引物，打造了快速檢測單獨李斯特菌的檢測方法，在單獨李斯特菌的檢測當中具備很重要的位置價值。與此同時，由于瘋牛病或者是綿羊癢病也已經被國家證實同人的克雅氏病存在著直接性的關聯，FQ-PCR技術還可以采用動物源飼料或者是食品日常用品成分的定量實時檢測功能。

2 總結

根據目前的FQ-PCR在動物檢疫中的使用主要是根據病原體檢測的情況下。今后隨著我國的FQ-PCR技術在不斷的完善創新，可以將FQ-PCR與生物當中所產生的芯片等在應用其他的信息技術進行相結合應用，日后將會大大的提升該技術自身在動物檢疫相關領域的應用以及推廣。