Clusterin與乳腺癌淋巴道轉移的相關性研究

謝 樂 毛榮軍 韓福蘭

廣東省佛山市中醫院病理科，廣東佛山 528000

Clusterin與乳腺癌淋巴道轉移的相關性研究

謝 樂 毛榮軍 韓福蘭

廣東省佛山市中醫院病理科，廣東佛山 528000

目的考察Clusterin在乳腺癌中的表達情況，以及Clusterin與淋巴道轉移的相關性。方法選取我院2015年6月～2016年6月經病理證實的乳腺癌患者55例，31例乳腺癌良性病例患者，21例癌旁組織3cm作為對照組。免疫組化SP法檢測Clusterin和D2-40蛋白表達水平，計算微淋巴管密度。結果Clusterin主要表達于細胞質；乳腺癌組織中Clusterin陽性率顯著高于乳腺良性組織和癌旁組織（P＜0.05）；乳腺癌組織中MLVD顯著高于乳腺良性組織和癌旁組織（P＜0.05）；出現淋巴結轉移的患者Clusterin陽性率高于無淋巴結轉移的患者，數據差異具有統計學意義（χ2=7.882，P＜0.05）。結論乳腺癌患者Clusterin蛋白表達水平上調，出現淋巴結轉移的乳腺癌患者Clusterin表達陽性率上升。

Clusterin；乳腺癌；淋巴道轉移；相關性

R736.3

A

2095-0616（2018）01-194-04

Correlation between Clusterin and lymphatic metastasis of breast cancer

XIE Le MAO Rongjun HAN Fulan
Department of Pathology, Foshan Hospital of Traditional Chinese Medicine, Foshan 528000, China

ObjectiveTo investigate the expression of Clusterin in breast cancer,correlation between Clusterin and lymphatic metastasis.MethodsFrom June 2015 to June 2016, 55 cases of breast cancer patients , 31 cases of benign breast cancer patients, 21 cases of 3cm adjacent cancer tissue as control group. The expression levels of Clusterin and D2-40 were detected by immunohistochemical SP method, and the density of lymphatic vessels was calculated.ResultsClusterin was mainly expressed in the cytoplasm; The positive rate of Clusterin in breast cancer was significantly higher than that in benign breast tissue andparacancerous tissue(P＜0.05); MLVD in breast cancer was significantly higher than that in benign breast tissue and paracancerous tissue(P＜0.05); The positive rate of Clusterin in patients with lymph node metastasis was higher than that in patients without lymph node metastasis(χ2=7.882,P＜ 0.05).ConclusionThe expression of Clusterin protein in breast cancer patients was upregulated.The positive rate of Clusterin expression in breast cancer patients with lymph node metastasis was increased.

Clusterin; Breast cancer; Lymphatic metastasis; Correlation

近年，乳腺癌發病率在全球呈現上升趨勢，在歐美發達國家及我國的一些大城市已成為危害婦女健康乃至生命的第一位惡性腫瘤。全球每年約有130萬人被診斷為乳腺癌，約有40萬人死于該病。近年來，乳腺癌在我國發病率逐步上升，乳腺癌已位居女性惡性腫瘤發病率之首。乳腺癌的轉移是患者術后復發及死亡的主要原因之一[1]。乳腺癌的轉移主要通過淋巴道的區域性淋巴結播散[2]，但乳腺癌淋巴道擴散的分子機制尚不清楚，但對其關鍵因子的研究有助于判斷乳腺癌的預后和發生發展。因此，研究乳腺癌淋巴道擴散的分子機制具有更重要的臨床指導意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2015年6月～2016年6月經病理證實的乳腺癌患者55例。年齡30～83歲，平均（51.1±10.3）歲，淋巴結轉移患者32例，無淋巴結患者23例。組織學分級WHO 2003年標準：Ⅰ級18例，Ⅱ級20例，Ⅲ級17例。31例乳腺癌良性病例患者，年齡25～79歲，平均（47.9±6.8）歲。取21例癌旁組織3cm作為對照組，年齡31～78歲，平均（50.2±7.5）歲。三組患者一般資料比較差異無統計學意義（P＞0.05）。本研究得到佛山市中醫院醫學倫理會批準和通過，所有患者均簽署知情同意書。

1.2 方法

標本經常規脫水、固定、石蠟包埋，連續切片，片厚度4μm。采用免疫組織化學SP法檢測Clusterin在乳腺癌、乳腺良性組織及乳腺正常組織中的表達情況。石蠟切片，片置烤片板上2h；常規二甲苯脫蠟，梯度酒精水化；PBS漂洗，高壓鍋抗原修復；PBS漂洗3次，3% H2O2孵育10min，PBS漂洗；一抗孵育1h（1∶500稀釋）；PBS漂洗，二抗孵育15min；PBS漂洗，DAB顯色。以D2-40蛋白免疫組化標記微淋巴管密度（MLVD）[3]。

光學顯微鏡下（400×）隨機選擇4個視野，計算視野內的細胞數和陽性細胞數，計算陽性細胞率進行評分，陽性細胞百分比為＜5%為（-）；陽性細胞百分數高于5%為（+）[4]。

1.3 統計學分析

用SPSS 19.0軟件進行統計分析，計量資料以（x±s）表示，三組及以上計量數據比較采用方差分析，若結果陽性，則利用q檢驗進行兩兩比較，計數資料比較用χ2檢驗，利用Pearson列聯系數計算分類變量關聯性，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Clusterin在乳腺癌中的表達

免疫組化結果顯示，Clusterin主要表達于細胞質，顯示為棕黃色顆粒。癌旁組織未見Clusterin的表達。乳腺良性組織可少見Clusterin的表達。見圖1。乳腺癌組織中Clusterin陽性率為52.7%，乳腺良性組織中的陽性率為12.9%，癌旁組織中Clusterin陽性率為0.0%。三組的陽性率數據差異具有統計學意義（χ2=26.393，P＜0.05），兩兩結果為乳腺癌組織中Clusterin陽性率顯著高于乳腺良性組織和癌旁組織（P＜0.05），乳腺良性組織和癌旁組織中的Clusterin陽性率數據差異無統計學意義（P＞ 0.05），見表 1。

表1 Clusterin在乳腺癌中的表達

2.2 MLVD在乳腺癌中的表達

乳腺癌組織中MLVD為（17.80±4.03），乳腺良性組織中MLVD為（6.44±2.43），癌旁組織MLVD為（2.01±1.04）。三組MLVD值數據差異具有統計學意義（F=26.393，P＜0.05），q檢驗結果顯示，乳腺癌組織中MLVD顯著高于乳腺良性組織，而乳腺良性組織MLVD又顯著高于乳腺正常組織，數據差異均具有統計學意義（P＜0.05），見表2。

圖1 Clusterin在乳腺癌中的表達

表2 MLVD在乳腺癌中的表達（± s）

表2 MLVD在乳腺癌中的表達（± s）

注：與乳腺癌組織比較，aP＜0.05；與乳腺良性組織比較，bP＜0.05；與癌旁組織比較，cP＜0.05

分組 n MLVD乳腺癌組織bc 55 17.80±4.03乳腺良性組織ac 31 6.44±2.43乳腺正常組織ab 21 2.01±1.04 F 227.88 P＜0.001

2.3 不同淋巴結轉移狀態下Clusterin表達的差異

淋巴結轉移乳腺癌患者中22例Clusterin陽性，陽性率為68.8%。無淋巴結轉移乳腺癌患者中7例Clusterin陽性，陽性率為30.4%。出現淋巴結轉移的患者Clusterin陽性率高于無淋巴結轉移的患者，數據差異具有統計學意義（χ2=7.882，P＜0.05），見表3。

表3 不同淋巴結轉移狀態下Clusterin表達的差異

3 討論

目前，針對腫瘤淋巴轉移的機制尚不清楚。腫瘤淋巴管新生和淋巴道轉移是其研究中的熱點，腫瘤淋巴管可能來源于淋巴管的出芽生長或者骨髓的內皮細胞，最新研究顯示腫瘤淋巴管主要來源于淋巴管網內皮細胞出芽生長后形成，表明瘤內及瘤周淋巴管生成在腫瘤淋巴轉移中起著更重要的作用[5]。瘤內及瘤周淋巴管生成促進腫瘤淋巴轉移可能是：腫瘤細胞脫落，通過瘤內及瘤周新生淋巴管進入循環系統，向血管外遷移，形成新的轉移灶[6]。

本研究中利用MLVD作為對淋巴結轉移情況進行描述的參數，從該指標的名稱就可以看出，隨著MLVD數值的增加，出現淋巴結轉移的可能性也逐漸上升。在已經報道的乳腺癌和結腸癌[7]的研究中，MLVD與腋窩淋巴結轉移呈正相關，MLVD升高意味著淋巴結轉移和遠處器官轉移的概率增加，同時也意味著原發病灶惡化程度的相對提升，因為只有惡化程度較高的病灶發生轉移的概率較高。淋巴道轉移是乳腺癌的惡化的重要因素，本研究中在研究中進一步證實了該過程，乳腺癌組織中MLVD顯著高于乳腺良性組織和癌旁組織，數據差異具有統計學意義（P＜0.05），并且隨著組織癌變程度加大，MLVD的數值也出現不斷增大的趨勢，該研究結果和目前的主流研究一致[8]，也提示淋巴道轉移的途徑對于乳腺癌惡化程度的重要意義，說明MLVD衡量乳腺癌惡化程度的敏感度。

Clusterin是一種76～80kDa高度保守的異二聚體分泌型糖蛋白，廣泛分布于人體組織，參與了體內多種生理功能，如參與脂類交換和運輸，調節細胞-細胞、細胞-基質相互作用，調節補體作用，細胞保護作用。人體存在的分泌性Clusterin[9]和核型Clusterin，分泌性Clusterin是生理條件下的主要存在形式，Clusterin具有雙向調節的作用，一方面可以發揮促凋亡的作用，另外一方面可以誘導腫瘤的耐藥性作用。核型Clusterin是一種細胞凋亡促進因子，而分泌型Clusterin則是促進腫瘤的發生、發展[10]。在本研究中，比較了乳腺癌組織，乳腺良性組織和癌旁組織中Clusterin表達的情況，結果顯示乳腺癌組織中Clusterin陽性率顯著高于乳腺良性組織和癌旁組織（P＜0.05），此結果提示Clusterin可能在乳腺癌的發生與發展過程中起到了重要的促進作用。通過免疫組化的方法，本研究中也發現Clusterin主要存在于胞漿中。盡管Clusterin在各類惡性腫瘤的發生，發展中確切的分子機制尚不清楚，但是在近些年的研究結果表明，Clusterin可能是通過抗細胞凋亡的機制直接發揮促腫瘤生長達到作用，Sintich等[11]認為Clusterin及其抗體均為大分子蛋白，不會直接進入細胞內部，細胞膜才是其作用部位，而Kruger等[12]的研究結果與本研究相類似，其結果為Clusterin表達的上調與乳腺從正常組織到癌前病變和乳腺惡性變的進展密切相關。

Clusterin如何促進乳腺癌的發生發展，是否Clusterin可影響淋巴道轉移，目前尚未見Clusterin與淋巴道轉移的相關報道，本研究中嘗試分析不同淋巴結轉移狀態下Clusterin表達的差異，結果顯示，出現淋巴結轉移的患者Clusterin陽性率高于無淋巴結轉移的患者，數據差異具有統計學意義（χ2=7.882，P＜ 0.05），但是作為橫斷面研究，尚無法確定兩者之間的因果關聯，只能猜想乳腺癌的淋巴結轉移可能與Clusterin的高表達有關，由于目前關于Clusterin和淋巴結轉移之間的研究較少，尚無法分析其可能機制。

綜上所述，乳腺癌患者中Clusterin蛋白表達水平上調，出現淋巴結轉移的乳腺癌患者Clusterin表達陽性率上升，但其機制有待進一步研究。

[1] 薛書霞，張景華，李景武，等 .Clusterin、Livin、Caspase-3蛋白在乳腺浸潤性導管癌中的表達[J].海南醫學院學報，2011，17（12）：1612-1617.

[2] 李景武，張景華，薛書霞，等.乳腺浸潤性導管癌中Clusterin蛋白表達及其與臨床病理特征的關系[J].腫瘤學雜志，2012，18（6）：405-407.

[3] Radziwonbalicka A，Santosmartinez MJ，Corbalan JJ，et al.Mechanisms of platelet-stimulated colon cancer invasion:role of clusterin and thrombospondin 1 in regulation of the P38MAPK-MMP-9 pathway[J].Carcinogenesis，2014，35（2）：324-327.

[4] 李義強，趙春雨，李壯，等.乳腺癌微淋巴管生成與淋巴道轉移的關系 [J].黑龍江醫藥科學，2012，35（2）：65-66.

[5] Yong Tang，Fenghua Liu，Chunning Zheng，et al.Erratum to： Knockdown of clusterin sensitizes pancreatic cancer cells to gemcitabine chemotherapy by ERK1/2 inactivation[J].Journal of Experimental & Clinical Cancer Research: CR，2012，31（1）：73-77.

[6] 陳鑫.伴有內乳區淋巴結轉移的ⅢC期乳腺癌的預后分析研究[D].石家莊：河北醫科大學，2015：32-40.

[7] 謝曉斌，陳小衛，龍捷，等.VEGF-C基因表達下調對乳腺癌增殖及淋巴轉移抑制作用研究[J].中華腫瘤防治雜志，2014，21（22）：1778-1782.

[8] Sujit K Bhutia，Das SK.Mda-7/IL-24 differentially regulates soluble and nuclear clusterin in prostate cancer[J].Journal of Cellular Physiology，2012，227（5）：1805-1809.

[9] Niu ZH，Wang Y，Chun B，et al.Secretory clusterin(sCLU)overexpression is associated with resistance to preoperative neoadjuvant chemotherapy in primary breast cancer[J].European Review for Medical & Pharmacological Sciences，2013，17（10）：1337-1339.

[10] 李陽.NF-kB、VEGF-C及VEGFR-3在乳腺浸潤性導管癌中的表達及其與淋巴結轉移的關系[D].石家莊：河北聯合大學，2014：36-41.

[11] Sintich SM，Steinberg J，Kozlowski JM，et al.Cytotoxic sensitivity to tumor necrosis factor-alpha in PC3 and LNCaP prostatic cancer cells is regulated by extracellular levels of SGP-2(clusterin)[J].Prostate，1999，39（2）：87-93．

[12] Kruger S，Ola V，Fischer D，et a1.Prognostic significance of clusterin immunoreactivity in breast cancer[J].Neoplasma，2007，54（1）：46-50.

2017-09-04）