HIF-2α與VE-cadherin在宮頸腺癌中的作用研究

伍艷平 黃小環 龔 莉 李月潔 周鐵軍▲

1.西南醫科大學附屬醫院病理科，四川瀘州 646000；2.重慶三峽醫藥高等專科學校，重慶 404120

HIF-2α與VE-cadherin在宮頸腺癌中的作用研究

伍艷平1黃小環2龔 莉1李月潔1周鐵軍1▲

1.西南醫科大學附屬醫院病理科，四川瀘州 646000；2.重慶三峽醫藥高等專科學校，重慶 404120

目的探究HIF-2α與VE-cadherin宮頸腺癌發生發展中的作用。方法收集60例宮頸腺癌組織和18例同期因子宮肌瘤行子宮全切手術的正常宮頸組織，采用免疫組織化學方法檢測HIF-2α與VE-cadherin蛋白在宮頸腺癌及正常宮頸組織中的表達。結果宮頸腺癌組織中HIF-2α與VE-cadherin的陽性表達率分別為56.67%和65.00%，明顯高于正常宮頸組織，差異有統計學意義（P＜0.05）；HIF-2α和VE-cadherin蛋白的表達與宮頸腺癌瘤體的大小、臨床分期、淋巴結轉移有關（P＜0.05），與宮頸腺癌的病理分級及其患者年齡無關（P＞0.05）；HIF-2α和VE-cadherin在宮頸腺癌中的表達具有正相關關系，二者相關系數為0.632（P＜0.05）。結論HIF-2α和VE-cadherin在宮頸腺癌中的表達顯著升高，且VE-cadherin可能是HIF-2α的下游靶基因，二者可能共同參與調節宮頸腺癌的發生發展和轉移過程。

缺氧誘導因子-2α；血管內皮鈣粘素；宮頸腺癌；轉移

R737.33

A

2095-0616（2018）01-30-04

四川省科學技術廳與瀘州市人民政府、瀘州醫學院聯合科研專項資金計劃項目（川科發計[2014]10號）；瀘州醫學院附屬醫院科研課題[2014]71號）。

▲通訊作者

The role of HIF-2α and VE-cadherin in cervical adenocarcinoma

WU Yanping1HUANG Xiaohuan2GONG Li1LI Yuejie1ZHOU Tiejun1
1.Department of Pathology,the Affiliated Hospital of Southwest Medical University,Luzhou 646000,China;2.Chongqing Three Gorges Medical College, Chongqing 404120, China

ObjectiveTo investigate the effect of HIF-2alpha and VE-cadherin in cervical adenocarcinoma.MethodsImmunohistochemistry was used to detect the protein expression of HIF-2alpha and VE-cadherin in 60 cases of cervical adenocarcinoma and 18 cases of normal cervical tissues.ResultsThe positive expression rates of HIF-2alpha and VE-cadherin in cervical adenocarcinoma were 56.67% and 65.00% respectively,which were significantly higher than those in normal cervical tissues,the difference was statistically significant (P＜0.05).The expression of HIF-2 alpha and VE-cadherin were significantly correlated with tumor sizes(P＜0.05),clinical stage (P＜0.05) and lymphatic metastasis(P＜0.05),but showed no statistical correlation with pathological grade(P＞0.05)and age (P＞ 0.05) in cervical adenocarcinoma.In addition，the expression of VE-cadherin was positively correlated with the expression of HIF-2alpha(r=0.632,P＜0.05).ConclusionThe protein expression of HIF-2alpha and VE-cadherin were significantly increased in cervical adenocarcinoma.VE-cadherin may be the downstream target gene of HIF-2alpha.They two may co-participate the initiation and development of cervical adenocarcinoma.

HIF-2α;VE-cadherin;Cervical adenocarcinoma;Metastasis

宮頸癌是女性生殖系統最常見的惡性腫瘤之一，其平均發病年齡呈年輕化趨勢，嚴重威脅全球婦女的健康[1]。復發和轉移是導致惡性腫瘤患者主要的致死原因，關于腫瘤發生發展機制的研究很多，但是目前仍不清楚。目前針對宮頸癌的治療手段主要為手術治療、放化療、生物治療等，這些治療手段在治療過程中都會對正常組織細胞造成損傷。近年來，靶向治療受到廣泛關注，針對有HER2基因突變的乳腺癌的靶向治療已經取得了一定的成果。找到有關宮頸癌發生發展的關鍵因子，將為宮頸癌的預防和治療提供新的方向。有研究表明HIF-2α和VE-cadherin在多種惡性腫瘤中存在著表達異常，參與腫瘤生長、轉移等過程。本研究旨在通過免疫組織化學檢測HIF-2α與VE-cadherin宮頸腺癌組織中的表達情況，探究二者在宮頸腺癌發生發展中的作用。

1 資料與方法

1.1 主要試劑

兔抗人HIF-2α多克隆抗體及兔抗人VE-cadherin多克隆抗體均購自英國Abcam公司，Envision法免疫組織化學檢測試劑盒及DAB試劑盒購自北京中杉金橋有限公司。

1.2 一般資料

收集篩選2011年9月～2013年6月西南醫科大學附屬醫院手術切除的宮頸腺癌石蠟組織塊60例，患者年齡26～70歲，平均（43.36±9.36）歲，≥56歲39例，＜56歲21例。根據國際婦產科聯盟最新的關于宮頸腺癌臨床分期（FIGO分期），其中Ⅰ期40例，Ⅱ期20例；按分化程度為：高分化29例、中分化18例和低分化13例，其中淋巴結轉移陽性患者19例，淋巴結轉移陰性患者41例。隨機選取同期因子宮肌瘤行子宮全切手術的正常宮頸組織塊18例作為對照組，所選宮頸腺癌組織患者術前均未接受化療及放療。

1.3 免疫組織化學檢測及評判標準

石蠟切片厚約3μm，經過脫蠟脫苯、檸檬酸液高壓抗原修復、3%過氧化氫溶液阻斷內源性過氧化物酶活性，然后滴加HIF-2α和VE-cadherin抗體（稀釋度1∶100），在37℃濕盒中孵育3h，然后加Envision試劑室溫孵育2h，DAB顯色（顯微鏡下控制顯色時間），蘇木精襯染，中性樹脂封片。免疫組織化學染色結果采用雙盲計分。HIF-2α和VE-cadherin的表達以細胞染色強度、細胞陽性百分率，兩者得分相加來進行判定[2]。無染色記為0分，淡黃色記為1分，棕黃色記為2分，棕褐色記為3分；細胞陽性率＜5%記為0分，≥5%～＜25%記為1分，≥25%～＜50%記為2分，≥50%記為3分。上述二項相加，0～1分為陰性（-），2～3分為（+），4分為（++），5～ 6分為（+++）。統計時，0～1分為陰性，其余均為陽性。

1.4 統計學處理

所有數據用SPSS15.0統計分析軟件進行數據的統計學處理。計數數據和半定量數據采用χ2檢驗，相關分析采用Spearman's等級相關分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HIF-2α和VE-cadherin在正常宮頸組織和宮頸腺癌中的蛋白表達

HIF-2α的表達于細胞核和細胞漿，呈棕黃色顆粒（見圖1），VE-cadherin主要表達于胞漿（見圖2）。HIF-2α在宮頸腺癌組織中的陽性表達率為56.67%，在正常宮頸組織中的陽性表達率11.1%，HIF-2α在宮頸癌組的表達明顯高于正常宮頸組，差異有統計學差異（P＜0.05）；VE-cadherin在宮頸腺癌組中的陽性表達率為65.00%，明顯高于正常宮頸組，差異有統計學差異（P＜0.05）。見表1。

圖1 HIF-2α在宮頸腺癌中的陽性表達（Envision ×200）

圖2 VE-cad在宮頸腺癌中的陽性表達（Envision ×200）

表1 HIF-2α和 VE-cadherin 在正常宮頸組織和宮頸腺癌中的蛋白表達

2.2 HIF-2α和VE-cadherin蛋白的表達與臨床病理參數的關系

HIF-2α和VE-cadherin蛋白的表達與腫瘤瘤體的大小、臨床分期、淋巴結轉移有關（P＜0.05）。與年齡、分化程度無關（P＞0.05）。見表2。

2.3 宮頸腺癌HIF-2α與VE-cadherin蛋白的表達的相關性

HIF-2α和VE-cadherin表達水平免疫組化的半定量數據進行相關分析顯示：HIF-2α和VE-cadherin在宮頸腺癌中的表達具有正相關關系，二者相關系數為0.632，P＜0.05。見表3。

表2 HIF-2α and VE-cadherin 蛋白表達與宮頸腺癌患者臨床病理參數的關系

表3 HIF-2α and VE-cadherin 蛋白表達水平在宮頸腺癌原發病灶中的相關性

3 討論

缺氧誘導因子（HIF）是細胞適應缺氧微環境的主要調節因子，其持續表達并調節大量編碼基因，參與腫瘤的發生、發展過程[3]。目前明確HIF家族主要包含HIF-1、HIF-2以及HIF-3[4]。HIF主要由氧不穩定的HIF-1α、HIF-2α和HIF-3α功能性亞基及穩定表達的組成性亞基HIF-β構成。研究表明缺氧時，HIF-α的穩定性增強，由細胞質中轉入細胞核與芳香烴受體核轉位蛋白（aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator，ARNT）形成二聚體，然后與靶基因啟動子中的缺氧反應元件（hypoxia response elements，HRE）結合，通過招募轉錄因子促進靶基因轉錄，參與了腫瘤血管生成，細胞增殖、存活、代謝、侵襲和轉移，調節腫瘤干細胞生長[5-7]。還有研究表明HIF參與調節放射治療、化療及免疫治療相關基因，增加腫瘤的耐藥性[7-8]。

HIF-2α是缺氧誘導因子家族中的關鍵因子，它位于2P21-P16，編碼含有870氨基酸的蛋白。HIF-2α的表達具有組織特異性和種屬特異性，它參與多種生物學過程。有研究表明特異性的拮抗HIF-2α能抑制腫瘤血管生成；甚至臨床實驗表明使用HIF-2小分子抑制劑（如PT2385和PT2399）能特異性分解HIF-2α和HIF-β形成的二聚體，從而有效阻斷透明細胞腎細胞癌細胞生長、增殖和腫瘤血管形成[9]。Wang等[10]研究指出，HIF-2α與干細胞因子（stem cell factor，SCF）基因啟動子中的HRE相互作用促進其轉錄，通過正向調節上皮間質轉化過程促進肝癌細胞的浸潤和轉移。本研究表明HIF-2α的陽性表達率為56.67%，明顯高于正常宮頸組織11.11%，而且其表達水平與癌組織的大小、淋巴結轉移情況和腫瘤的臨床分期有關，與其他研究者的研究結果類似[11-13]。提示HIF-2α在宮頸腺癌的發生、發展、浸潤和轉移中起著一定作用。

VE-cadherin是一種跨膜蛋白，它位于血管內皮細胞之間，參與細胞間粘附，通過影響血管的通透性參與腫瘤細胞轉移等生物學行為[14]。它在高度侵襲性腫瘤中表達，而在非侵襲性腫瘤中不表達[15]。有研究表明將基因修飾的樹突狀細胞疫苗（DC-VEC）轉入已接種腫瘤細胞的小鼠體內，發現DC-VEC疫苗能延緩腫瘤進程和延長小鼠生存期，進一步研究發現實驗組小鼠體內產生了大量免疫球蛋白，腫瘤組織中T細胞浸潤增加并且表現出強烈的抗VE-cadherin細胞毒性作用，使得腫瘤的血管生成也受到抑制；還有研究表明下調VE-cadherin表達能抑制惡性黑色素瘤血管生成擬態的形成[15-16]。提示VE-cadherin可能是通過調節腫瘤免疫、腫瘤營養供給來影響腫瘤的生長。本研究表明VE-cadherin的陽性表達率為65.00%，明顯高于正常宮頸組織5.56%，而且其表達水平與癌組織的大小、淋巴結轉移情況和腫瘤的臨床分期有關，這與其它腫瘤的研究基本一致。但是值得注意的是，Zhao等[17]得到了相反的結論。

研究表明VE-cadherin的表達與HIF-2α、HIF-1α、Bcl-2及 R3-PTPs有關。HIF-2α 可與Ets-1、Twist-1等協同作用于VE-cadherin啟動子中的HRE，調控其表達并參與血管生成，影響腫瘤的生長[18-21]。本研究表明HIF-2α和VE-cadherin在宮頸腺癌中呈正相關關系，r=0.632（P＜0.05）。提示VE-cadherin可能是HIF-2α的下游靶基因，HIF-2α可能是通過誘導VE-cadherin的表達來增加宮頸腺癌浸潤及轉移的機會。因此聯合檢測宮頸腺癌患者腫瘤組織中HIF-2α和VE-cadherin的表達水平可能對其腫瘤浸潤、轉移有一定預警作用。同時HIF-2α抗體、VE-cadherin抗體和抗血管生成劑在宮頸腺癌的治療方面可能具有潛在的基礎與臨床研究價值，可以為宮頸腺癌的治療提供新的思路。

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2017-09-25）