過(guò)敏毒素C3a在健康人氣道上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化中的作用研究*

李 竹，劉代順，吳凱峰，丁宏偉，劉建英△

(1.遵義醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科，貴州遵義 563000；2.遵義醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院，貴州遵義 563000)

過(guò)敏毒素C3a在健康人氣道上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化中的作用研究*

李 竹1，劉代順1，吳凱峰1，丁宏偉2，劉建英1△

(1.遵義醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科，貴州遵義 563000；2.遵義醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院，貴州遵義 563000)

目的觀察過(guò)敏毒素C3a在正常人氣道上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)中的作用及其相關(guān)分子機(jī)制。方法培養(yǎng)正常人氣道上皮細(xì)胞BEAS-2B，分為對(duì)照組，重組人(rhC3a)刺激組，rhC3a+C3a受體拮抗劑(C3aRA)的拮抗組，通過(guò)顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化情況；四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力；ELISA檢測(cè)細(xì)胞上清液中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)的蛋白表達(dá)情況；RT-PCR檢測(cè)C3a受體(C3aR)和EMT相關(guān)指標(biāo)mRNA變化情況；Western blot檢測(cè)C3aR、Smad2/3、p38-MAPK蛋白表達(dá)情況。結(jié)果30、50 nmol/L rhC3a刺激組細(xì)胞形態(tài)由正常鵝卵石樣變?yōu)樗笮危尤? μmol/L C3aRA拮抗組細(xì)胞形態(tài)較對(duì)照組比較無(wú)明顯改變。50 nmol/L rhC3a刺激組的細(xì)胞增殖較對(duì)照組降低(P=0.047)；30 nmol/L rhC3a刺激組中TGF-β1蛋白水平較對(duì)照組升高(P<0.05)，C3aR mRNA及蛋白水平較對(duì)照組均升高(P<0.05)，p-Smad2/3、p-p38-MAPK蛋白水平較對(duì)照組升高(P<0.05)，加入1 μmol/L C3aRA可以降低以上指標(biāo)表達(dá)(P<0.05)。30 nmol/L rhC3a刺激組中α-平滑肌肌動(dòng)蛋白、N-鈣黏蛋白mRNA表達(dá)上調(diào)，E-鈣黏蛋白mRNA表達(dá)下降，加入1 μmol/L C3aRA可以拮抗這一過(guò)程(P<0.05)。結(jié)論過(guò)敏毒素C3a通過(guò)結(jié)合C3aR，誘導(dǎo)正常人氣道上皮細(xì)胞發(fā)生EMT，其機(jī)制可能是通過(guò)激活Smad2/3、p38-MAPK通路來(lái)參與。

氣道重塑；纖維化；過(guò)敏毒素C3a；上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化

慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是可治療和可預(yù)防的一種限制性的不可逆氣流受限的一組慢性肺部疾病。COPD發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，氣流受限通常是呈進(jìn)行性發(fā)展，小氣道的纖維化和閉塞可能是導(dǎo)致呼吸道生理功能障礙的主要原因。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，在COPD患者氣道中，尤其是吸煙者的氣道上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial mesenchymal transition,EMT)是活躍的。EMT是上皮細(xì)胞逐漸轉(zhuǎn)化為間充質(zhì)樣細(xì)胞并失去其上皮細(xì)胞的功能和特性的過(guò)程，被認(rèn)為參與氣道重塑[1]。補(bǔ)體系統(tǒng)參與機(jī)體的特異性和非特異性免疫機(jī)制，表現(xiàn)為抗微生物防御反應(yīng)，免疫調(diào)節(jié)及介導(dǎo)免疫病理的損傷性反應(yīng)，其中補(bǔ)體C3是補(bǔ)體系統(tǒng)中含量最高的成分，C3a是補(bǔ)體C3活化過(guò)程中產(chǎn)生的裂解片段，具有過(guò)敏毒素作用，被報(bào)道參與氣道炎癥過(guò)程[2]。最新研究表明，C3a除具有促炎作用外，有可能是一種新的促纖維化因子[3]。有報(bào)道證實(shí)，C3a能夠促進(jìn)肺纖維化，與此同時(shí)阻斷C3a與其受體C3aR的結(jié)合，可以阻止肺纖維化的進(jìn)展[4]。但是，C3a是否與氣道EMT有關(guān)目前尚無(wú)報(bào)道。本課題旨在探討過(guò)敏毒素C3a在正常人氣道EMT中的作用及其相關(guān)分子機(jī)制，期待為預(yù)防COPD氣道重塑提供新的靶點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)細(xì)胞與試劑 正常人氣道上皮細(xì)胞BEAS-2B(美國(guó)ATCC公司)，重組人C3a(rhC3a)，ELISA試劑盒(美國(guó)R&D公司)，C3aR拮抗劑(C3aRA/SB290157，艾美捷科技公司)，DMEM F12培養(yǎng)基(美國(guó)Hyclon公司)，胎牛血清(杭州四季青公司)，四甲基偶氮唑藍(lán)青鏈霉素(北京索萊寶公司)，RT-PCR試劑盒(日本TaKaRa公司)，兔抗-GAPDH一抗、兔抗-C3aR、山羊抗兔-IgG/HRP、兔抗-p-Smad2/Smad3一抗、兔抗-p-p38-MAPK一抗(北京博奧森公司)，兔抗-Smad2/Smad3、兔抗-MAPK14/P38一抗(武漢博士德公司)。

1.1.2實(shí)驗(yàn)儀器 生物安全柜、ND1000核酸蛋白測(cè)定儀(美國(guó)Thermo 公司)，光學(xué)顯微鏡(日本Olympus公司)，熒光顯微鏡(德國(guó)Leica公司)，低溫高速離心機(jī)、移液器(德國(guó)Eppendorf 公司)，Stax Fax2100 型酶標(biāo)儀(美國(guó)Awarn-er公司)，電泳槽、電泳儀、凝膠成像儀(美國(guó)Bio-Rad公司)。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)及形態(tài)觀察 BEAS-2B細(xì)胞用含5%胎牛血清的DMEM F12培養(yǎng)基，置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞密度達(dá)70%～80%傳代，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。分為3組，培養(yǎng)細(xì)胞0～72 h后觀察每組細(xì)胞形態(tài)變化情況。

1.2.2四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn) 以每組每孔1×103個(gè)細(xì)胞接種于96孔板，加入5% DMEM F12培養(yǎng)24 h，倒掉原培養(yǎng)基，加入無(wú)血清培養(yǎng)基饑餓6 h，棄去培養(yǎng)基，加入不同濃度重組人C3a刺激，在96孔板周?chē)蝗尤肓姿猁}緩沖液(PBS)，分別培養(yǎng)1、24、48、72 h。吸去上清液，加入90 μL 5% DMEM F12繼續(xù)培養(yǎng)4 h，然后吸去上清液，每孔加入110 μL Formazan溶解液，置搖床上低速震蕩10 min，使結(jié)晶物充分溶解，在ELISA檢測(cè)儀490 nm處測(cè)量各孔的吸光度(A)值。每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，取平均值，繪制生長(zhǎng)曲線，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.3ELISA檢測(cè)細(xì)胞上清液中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)的蛋白水平 將收集好的細(xì)胞上清液從-80 ℃冰箱取出置于冰盒上，在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔10孔，加樣，分別設(shè)空白孔、待測(cè)樣品孔，用封板膜封板后置37 ℃溫育30 min，洗滌5次，拍干，每孔加入酶標(biāo)試劑50 μL，空白孔除外，再次溫育30 min(條件同前)，洗滌5次，拍干，加入顯色劑，37 ℃避光顯色15 min，每孔加入終止液50 μL。在15 min以?xún)?nèi)，ELISA檢測(cè)儀450 nm處測(cè)量各孔的A值。

1.2.4RT-PCR檢測(cè)不同基因mRNA的表達(dá) 不同組細(xì)胞待細(xì)胞密度達(dá)80%時(shí)，加入1 mL Trizol提取液提取細(xì)胞總RNA，具體方法按照TaKaRa RT-PCR試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。PCR引物由Invitrogen和上海生物工程公司合成，具體序列見(jiàn)表1。

1.2.5蛋白免疫印跡(Western blot)檢測(cè)不同蛋白水平 以每組每孔1×106個(gè)細(xì)胞接種于6孔板，待細(xì)胞密度達(dá)80%時(shí)，加入RIPA裂解液提取蛋白，根據(jù)二喹啉甲酸(BCA)蛋白定量試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定蛋白水平。30 μg總蛋白在10%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分離后，遷移到聚偏氟乙烯(PVDF)膜，5%脫脂奶粉4 ℃搖床封閉2 h，洗膜，加入稀釋好的相應(yīng)一抗4 ℃孵育過(guò)夜(不超過(guò)18 h)，洗膜，加入稀釋好的二抗37 ℃孵育2 h，電化學(xué)發(fā)光(ECL)試劑盒檢測(cè)。

表1 PCR基因引物序列

2 結(jié) 果

2.1rhC3a誘導(dǎo)BEAS-2B細(xì)胞發(fā)生形態(tài)改變 正常BEAS-2B細(xì)胞形態(tài)呈鵝卵石或鋪路石樣，分別加入10、30、50 nmol/L rhC3a刺激細(xì)胞0、24、48、72 h后觀察每組細(xì)胞形態(tài)變化情況。觀察到30、50 nmol/L組細(xì)胞在48、72 h，細(xì)胞由正常形態(tài)變?yōu)樗笮位蜷L(zhǎng)條形，見(jiàn)圖1。

2.2C3aRA可以抑制BEAS-2B細(xì)胞發(fā)生形態(tài)改變 分別加入30、50 nmol/L rhC3a刺激細(xì)胞30 min后，加入1 μmol/L C3aRA，觀察到在48、72 h拮抗組細(xì)胞形態(tài)較刺激組未發(fā)生明顯條形或梭形變，見(jiàn)圖2。

2.350 nmol/L rhC3a降低BEAS-2B細(xì)胞的增殖 分別加入0、10、30、50 nmol/L rhC3a刺激BEAS-2B細(xì)胞1、24、48、72 h，觀察每組細(xì)胞的增殖情況。發(fā)現(xiàn)50 nmol/L rhC3a組在72 h較對(duì)照組和10 nmol/L rhC3a組比較，增殖下降，見(jiàn)表2。

2.4rhC3a可以誘導(dǎo)TGF-β1水平的激活 用ELASA法檢測(cè)各組細(xì)胞上清液中TGF-β1的蛋白水平結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在不同時(shí)間點(diǎn)(12、24、48、72 h)，30 nmol/L rhC3a組中TGF-β1蛋白水平均顯著高于對(duì)照組和10 nmol/L rhC3a組，加入1 μmol/L C3aRA均可以抑制TGF-β1的蛋白水平,見(jiàn)表3。

2.5rhC3a可誘導(dǎo)C3aR活化，C3aRA能夠抑制C3aR的活化用RT-PCR法檢測(cè)C3aR的mRNA水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在48 h，30 nmol/L rhC3a組中C3aR的mRNA水平顯著高于對(duì)照組和10 nmol/L rhC3a組，加入1 μmol/L C3aRA可以抑制C3aR mRNA的水平，其中對(duì)照組(0 nmol/L rhC3a)、1 μmol/L C3aRA組、10 nmol/L rhC3a組、10 nmol/L rhC3a+1 μmol/L C3aRA組、30 nmol/L rhC3a組、30 nmol/L rhC3a+1 μmol/L C3aRA組中C3aR mRNA水平分別為0.085±0.018、0.078±0.025、0.065±0.020、0.097±0.029、0.338±0.031、0.092±0.017，見(jiàn)圖3。 另外，用Western blot法檢測(cè) C3aR的蛋白水平，得到同樣結(jié)果，30 nmol/L rhC3a刺激細(xì)胞48 h后，C3aR的蛋白水平顯著高于對(duì)照組，加入1 μmol/L C3aRA可以抑制C3aR的蛋白水平，其中對(duì)照組(0 nmol/L rhC3a)、30 nmol/L rhC3a組、30 nmol/L rhC3a+1 μmol/L C3aRA組的C3aR mRNA表達(dá)水平分別為0.835±0.003、1.381±0.016、1.315±0.007，見(jiàn)圖4。

2.6rhC3a可誘導(dǎo)BEAS-2B細(xì)胞發(fā)生EMT，C3aRA能夠抑制EMT過(guò)程 分為對(duì)照組(0 nmol/L rhC3a)、1 μmol/L C3aRA組、10 nmol/L rhC3a組、10 nmol/L rhC3a+1 μmol/L C3aRA組、30 nmol/L rhC3a組、30 nmol/L rhC3a+1 μmol/L C3aRA組，作用48、72 h，用RT-PCR法檢測(cè)EMT相關(guān)指標(biāo)的mRNA水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，10 nmol/L、30 nmol/L rhC3a組細(xì)胞48 h和72 h后，α平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)mRNA水平較對(duì)照組和1 μmol/L C3aRA組升高，加入受體拮抗劑后可以抑制其mRNA水平的表達(dá)；在48 h，僅30 nmol/L rhC3a組N-鈣黏蛋白(N-cadherin)mRNA水平高于對(duì)照組，加入受體拮抗劑后可以抑制其mRNA水平的表達(dá)，在72 h，10 nmol/L、30 nmol/L rhC3a組N-cadherin mRNA水平均高于對(duì)照組，加入受體拮抗劑同樣可以抑制其mRNA水平的表達(dá)，且1 μmol/L C3aRA組N-cadherin的mRNA水平低于對(duì)照組；在30 nmol/L rhC3a刺激48、72 h后，E-鈣黏蛋白(E-cadherin)的mRNA水平較對(duì)照組降低，加入受體拮抗劑后其mRNA水平升高，見(jiàn)圖5，表4、5。

圖1 不同濃度rhC3a刺激BEAS-2B細(xì)胞后的形態(tài)變化情況(×200)表2 不同濃度rhC3a作用下BEAS-2B細(xì)胞的A值

組別rhC3a(nmol/L)1h24h48h72h對(duì)照組00．109±0．0160．309±0．0350．302±0．0050．327±0．025arhC3a組100．109±0．0130．328±0．0590．322±0．0220．334±0．017a300．108±0．0110．342±0．0130．323±0．0270．312±0．006500．107±0．0130．378±0．0420．328±0．0230．300±0．007

a：P<0.05，與50 nmol/L rhC3a組比較

表3 不同濃度rhC3a聯(lián)合C3aRA對(duì)TGF-β1蛋白水平的影響

續(xù)表3 不同濃度rhC3a聯(lián)合C3aRA對(duì)TGF-β1蛋白水平的影響

a：P<0.05，各組與30 nmol/L rhC3a+1 nmol/L C3aRA組比較

圖2 不同組BEAS-2B細(xì)胞的形態(tài)變化情況(×200)

圖3 rh C3a和C3aRA對(duì)C3aR mRNA水平的影響

圖4 rhC3a和C3aRA對(duì)C3aR 蛋白水平的影響

2.7rhC3a對(duì)Smad2/3、p38-MAPK蛋白表達(dá)的影響 采用30 nmol/L rhC3a刺激BEAS-2B細(xì)胞48 h，用Western blot檢測(cè)Smad2/3、p38-MAPK的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，30 nmol/L rhC3a組的p-Smad2/3、p-p38-MAPK蛋白水平較對(duì)照組(0 nmol/rhC3a)增加，加入受體拮抗劑可以抑制其蛋白的表達(dá)，而總Smad2/3(P=0.451)、總p38-MAPK(P=0.263)的蛋白水平與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)圖6、表6。

A:作用48 h;B:作用72 h

圖5 rhC3a和C3aRA對(duì)EMT相關(guān)指標(biāo) mRNA水平的影響表4 不同濃度rhC3a聯(lián)合C3aRA作用48 h對(duì)EMT相關(guān)指標(biāo)mRNA水平的影響

表5 不同濃度rhC3a聯(lián)合C3aRA作用72 h對(duì)EMT相關(guān)指標(biāo)mRNA水平的影響

表6 rhC3a、C3aRA對(duì)Smad2/3、p-p38-MAPK蛋白及其磷酸化水平的影響

圖6 rhC3a對(duì)Smad2/3、p38 MAPK通路的影響

3 討 論

COPD的主要特征在于小氣道重塑與細(xì)支氣管周?chē)w維化及肺氣腫，其中，以小氣道纖維化尤為重要[5]。由于持續(xù)性的氣流受限，COPD患者的肺功能呈進(jìn)行性減退，嚴(yán)重影響其勞動(dòng)力和生活質(zhì)量，并造成巨大的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。根據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，在20世紀(jì)有1億人因COPD死亡[6]，2014年發(fā)布的數(shù)據(jù)表明，至2030年COPD將上升成為全球第三大死亡原因[7]。

目前認(rèn)為EMT深入地參與了COPD的病理學(xué)改變。它涉及氣道的纖維化和氣流阻塞，也可能與COPD患者肺癌的高患病率有關(guān)[8]。EMT通過(guò)氣道上皮細(xì)胞的活化變成成纖維細(xì)胞，而成纖維細(xì)胞通過(guò)刺激上皮細(xì)胞來(lái)刺激產(chǎn)生更多的EMT，從而促進(jìn)小氣道狹窄和氣流阻塞的惡性循環(huán)。從COPD患者氣道活檢中證實(shí)了各種蛋白質(zhì)的表達(dá)上調(diào)，成為EMT的生物標(biāo)記物。如α-SMA，波形蛋白(vimentin)和纖維連接蛋白(fibronectin)，負(fù)責(zé)組織重塑和纖維化[9]，參與間充質(zhì)細(xì)胞蛋白的表達(dá)。E-cadherin的表達(dá)下降，被認(rèn)為是EMT上皮細(xì)胞的標(biāo)記物，同時(shí)伴隨N-cadherin的表達(dá)增加，這是間充質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)記物，這種變化通常被稱(chēng)為“鈣黏蛋白的轉(zhuǎn)換”[10]。

C3a已被證實(shí)是一種促炎因子，在COPD患者的誘導(dǎo)痰和血清中表達(dá)均增加[11]。在近年來(lái)的研究中表明，其的確有促纖維化作用，除了參與肺纖維化的過(guò)程以外，在腎臟疾病中，C3a也可誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞發(fā)生EMT，通過(guò)C3aRA可以減弱TGF-β/Smad3誘導(dǎo)的腎小管EMT[12-13]。目前，暫無(wú)C3a在氣道EMT中的作用研究，但已有研究證實(shí)，促纖維化密切相關(guān)的因子TGF-β1 能夠促進(jìn)氣道EMT的發(fā)生[14]。因此本研究采用rhC3a刺激正常人氣道上皮細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)TGF-β1水平的激活，并證實(shí)了C3aR水平的活化，以及EMT的發(fā)生，而C3aRA則能夠抑制這一過(guò)程，猜測(cè)rhC3a可能是EMT過(guò)程的上游信號(hào)分子。C3aRA是C3aR的拮抗劑，通常拮抗劑阻斷的是配體和受體的結(jié)合，而在本研究中能夠抑制受體本身的水平，其中的具體機(jī)制尚不清楚[15]。 除此之外，有研究表明在人類(lèi)肺泡和支氣管上皮細(xì)胞系中，TGF-β1可以通過(guò)激活Smad2誘導(dǎo)EMT的發(fā)生[16]。尿激酶型纖溶酶原激活物受體(uPAR)信號(hào)通路通過(guò)激活許多細(xì)胞信號(hào)因子能夠誘導(dǎo)EMT的發(fā)生，包括磷脂酰肌醇3-激酶(PI3k)、Src家族激酶、Akt、ERK/MAPK等[17]。而本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究C3a與Smad2/3、p38-MAPK信號(hào)通路的關(guān)系，首次證實(shí)了C3a可以激活Smad2/3、p38-MAPK信號(hào)通路。

綜上所述，C3a通過(guò)結(jié)合C3aR，可誘導(dǎo)正常人氣道上皮細(xì)胞發(fā)生EMT，其機(jī)制可能是通過(guò)激活Smad2/3、p38-MAPK通路來(lái)參與。本課題組今后也將繼續(xù)深入研究其可能的機(jī)制并對(duì)相關(guān)動(dòng)物模型進(jìn)行探討。C3a有望成為氣道重塑干預(yù)治療的新靶點(diǎn)，對(duì)COPD的治療和預(yù)后有著重大意義。

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StudyontheroleofallergictoxinC3ainepithelialmesenchymaltransitionofnormalhumanbronchialepitaheliumcells*

LiZhu1,LiuDaishun1,WuKaifeng1,DingHongwei2,LiuJianying1△

(1.DepartmentofRespiratoryMedicine,ThirdAffiliatedHospitalofZunyiMedicalCollege,Zunyi,Guizhou563000,China;2.SchoolofPublicHealth,ZunyiMedicalCollege,Zunyi,Guizhou563000,China)

ObjectiveTo investigate the role of anaphylatoxin C3a on epithelial mesenchymal transition(MTT) in normal human bronchial epithelium cells and its molecular mechanism.MethodsNormal human bronchial epithelium cells BEAS-2B were cultured,and divided into control group,rhC3a stimulation group,rhC3a+C3a receptor(C3aRA)antagonist group,the morphological changes of cells were observed by microscope;cell proliferation was detected by MTT;the expression of TGF-β1 protein level in cell supernatant was evaluated by ELISA;the expression of C3aR mRNA and EMT related indicators mRNA changes were detected by RT-PCR;the expression of C3aR and Smad2/3,p38 MAPK pathway proteins were detected by Western blot.ResultsCell morphology in 30,50 nmol/L rhC3a stimulation group was changed from normal cobblestone like to spindle shape,cell morphology in C3aRA antagonist group had no significant change when compared with the control group.The cell proliferation was reduced in 50 nmol/L rhC3a stimulation group(P=0.047);the levels of TGF-β1,p-Smad2/3,p-p38-MAPK protein were increased(P<0.05),C3aR mRNA and protein levels were also significantly increased (P<0.05) in 30 nmol/L rhC3a stimulation group when compared with control group,but the addition of 1 μmol/L C3aRA could reduce their expressions(P<0.05).30 nmol/L rhC3a could induce the up regulation of α -SMA and N-cadherin mRNA,and decrease the expression of E-cadherin mRNA,adding 1 μmol/L C3aRA can antagonize this process (P<0.05).ConclusionAnaphylatoxin C3a can induce EMT in normal human bronchial epithelium cells by combining C3aR,its mechanism may be involved in activating Smad2/3 and p38-MAPK pathway.

airway remodeling;fibrosis;anaphylatoxin C3a;epithelial mesenchymal transition

貴州省科學(xué)技術(shù)基金(黔科合J字[2013]2310號(hào))。

李竹(1989-)，住院醫(yī)師，碩士，主要從事慢性阻塞性肺疾病方面的研究。△

，E-mail:ljy2317@126.com。

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.34.002

R714.253

A

1671-8348(2017)34-4757-06

2017-08-21

2017-09-29)