鼻咽癌綜合治療后復發或放射性顱底骨壞死患者治療前后EB病毒DNA、病毒衣殼蛋白抗原-IgA和早期抗原-IgA的表達及意義

黃燕鳳, 梁 盛, 陸雪冬

(1. 廣西壯族自治區南寧市橫縣中醫醫院, 廣西 橫縣, 530300; 2. 廣西壯族自治區橫縣人民醫院, 廣西 橫縣, 530300)

鼻咽癌綜合治療后復發或放射性顱底骨壞死患者治療前后EB病毒DNA、病毒衣殼蛋白抗原-IgA和早期抗原-IgA的表達及意義

黃燕鳳1, 梁 盛2, 陸雪冬1

(1. 廣西壯族自治區南寧市橫縣中醫醫院, 廣西 橫縣, 530300; 2. 廣西壯族自治區橫縣人民醫院, 廣西 橫縣, 530300)

目的探討鼻咽癌綜合治療后復發患者治療前后EB病毒-DNA(EBV-DNA)、病毒衣殼蛋白抗原-lgA(VCA-IgA)和早期抗原-IgA(EA-IgA)的表達及意義。方法將150例鼻咽癌復發患者納入復發組，按照是否應用鼻內鏡手術分為手術組93例和放化療組57例。選取36例放射性顱底骨壞死患者為對照組(無復發)。比較各組患者治療前后血VCA-IgA、EA-IgA、EBV-DNA陽性率。結果治療前，復發組的血漿EBV-DNA陽性率顯著高于對照組(P<0.01); 2組的VCA-IgA和EA-IgA陽性率組間比較均無顯著差異(P>0.05)。治療前，不同復發類型患者其血漿EBV-DNA、VCA-IgA和EA-IgA陽性率組間比較均無顯著差異(P>0.05)。臨床分期越高，治療前EBV-DNA陽性率越高(P<0.01); 不同臨床分期患者治療前其血漿VCA-IgA及EA-IgA陽性率組間比較無顯著差異(P>0.05)。治療前，放化療組與手術組的血漿EBV-DNA、VCA-IgA、EA-IgA陽性率組間比較均無顯著差異(P>0.05)。治療結束時，手術組的血漿EBV-DNA轉陰率為91.30%, 顯著高于放化療組的68.75%(P<0.05)。放化療組患者的血漿EBV-DNA陽性率顯著高于手術組(P<0.01), 但2組VCA-IgA及EA-IgA陽性率組間比較均無顯著差異(P>0.05)。結論鼻內鏡手術治療可明顯降低鼻咽癌患者的EBV水平，檢測EBV-DNA水平對于判斷鼻咽癌是否復發及臨床分期具有重要意義。

鼻咽癌; EB病毒-DNA; 病毒衣殼蛋白抗原-IgA; 早期抗原-IgA; 鼻內鏡

相關研究[1-2]顯示，由于鼻咽癌大部分為低分化鱗癌，對放射線敏感，因此鼻咽癌首選放射治療。亦有相關資料[3]證實，鼻咽癌局部復發與遠處轉移嚴重影響放療效果。目前，應用鼻內鏡手術治療鼻咽癌殘留和復發病灶的療效良好。監測EBV-DNA水平可提示復發鼻咽癌患者的臨床療效[4]。本研究探討復發鼻咽癌患者治療前后血漿EBV-DNA、VCA-IgA及EA-IgA的表達情況及臨床意義，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院2013年12月—2016年12月收治的150例鼻咽癌復發患者作為復發組，包括男115例，女35例，年齡23～71歲，平均(48.55±14.23)歲，中位年齡49歲; 按照是否應用鼻內鏡手術，將復發組分為手術組93例和放化療組57例。2組患者除臨床分期外的一般資料比較均無顯著差異(P>0.05)。見表1。選取同期年齡及性別等相匹配的36例放射性顱底骨壞死患者作為對照組(無復發)，其中男30例，女6例，年齡22～70歲，平均(50.13±13.89)歲，中位年齡55歲。本研究患者均已簽署知情同意書。

納入標準: ① 復發性鼻咽癌，無遠處轉移且未經治療; ② 卡氏評分≥70分; ③ 有可評價療效的復發病灶。排除標準: ① 卡氏評分<70分; ②首程末次放療結束至納入研究的時間不超過3個月者; ③ 不接受對治療后復發病灶進行再治療者。

1.2 實施方法

表1 2組的一般資料比較[n(%)]

與手術組比較, *P<0.05。

1.2.1 鼻內鏡手術: 全麻后，用腎上腺素棉片收縮鼻腔黏膜3次，使用0度鼻內鏡常規切除鼻中隔后1/3，沿腫瘤周邊正常黏膜切開，切除深度達顱底骨質，依據腫瘤的位置及侵犯情況做相應范圍切除。

1.2.2 放療: 采用調強放療，MRI顯示腫瘤影像邊界，勾畫腫瘤靶區2.0～2.2 Gy/次，腫瘤靶區總劑量為50～60 Gy, 計劃靶區1.8～2.0 Gy/次，計劃靶區總劑量為45～60 Gy, 5 d/周。

1.2.3 化療: TP(紫杉醇+順鉑)方案: 第1天，靜脈滴注多西紫杉醇75 mg/m2，持續60 min; 第1～3天，靜脈滴注順鉑30 ms/m2, 每21 d為1周期，持續2～4周期。

1.3 標本采集

治療前及治療后，分別取所有研究對象的肘靜脈血2.0 mL, 分別置于1個抗凝管和1個促凝管中，離心半徑10 cm, 3 000 r/min離心5 min, 分離抗凝管中的上層血漿，用于提取DNA，分離促凝管中的血清，冰箱保存，待測。

1.4 主要儀器及試劑盒

SM600全自動酶標儀(購自上海永創醫療器械有限公司)和AM5000型實時熒光定量PCR儀(美國AmCell公司)。CUSABIO ELISA試劑盒、熒光定量PCR試劑盒(由上海碩盟生物科技有限公司提供)。

1.5 檢測方法

嚴格按照說明書操作。VCA-IgA和EA-IgA采用ELISA法測定，采用酶標儀定性檢測，得吸光度值(A值)。判定為陽性: VCA-IgA比值>1.0, EA-IgA比值>1.1。采用熒光定量PCR測定EBV-DNA水平，目的基因來自EB病毒的BamHI-W片段。判定為陽性: 擴增結果>0 copy/mL。

1.6 統計學方法

應用SPSS 22.0統計軟件分析。計數資料以頻數(頻率)表示，采用卡方檢驗或Fisher確切概率法計算兩組的構成比的差異程度。采用趨勢卡方檢驗分析率的變化趨勢。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 復發和無復發患者治療前各項指標的陽性率比較

治療前，復發組的血漿EBV-DNA陽性率為51.33%, 顯著高于對照組(P<0.01); 2組的血清VCA-IgA和EA-IgA陽性率組間比較均無顯著差異(P>0.05)。見表2。

表2 復發組和對照組治療前各項指標比較[n(%)]

與對照組比較, *P<0.01。

2.2 不同復發類型治療前各項指標的陽性率比較

治療前，不同復發類型患者其血漿EBV-DNA、血清VCA-IgA和EA-IgA陽性率組間比較均無顯著差異(P>0.05), 見表3。

表3 不同復發類型治療前各項指標比較[n(%)]

2.3 不同臨床分期的復發組患者治療前的各項指標比較

治療前血漿EBV-DNA的陽性率由高至低排序為: Ⅳ期>Ⅲ期>Ⅱ期>Ⅰ期，即臨床分期越高，治療前EBV-DNA陽性率越高(P<0.01); 不同臨床分期患者治療前其血清VCA-IgA及EA-IgA陽性率組間比較無顯著差異(P>0.05), 見表4。

表4 不同臨床分期的復發組患者治療前的各項指標比較[n(%)]

與Ⅰ期比較, **P<0.01; 與Ⅱ期比較, ##P<0.01; 與Ⅲ期比較, △△P<0.01。

2.4 放化療組與手術組治療前后各項指標的動態變化

治療前，放化療組與手術組的血漿EBV-DNA、VCA-IgA、EA-IgA陽性率組間比較均無顯著差異(P>0.05), 見表5。手術組患者的術后血漿EBV-DNA轉陰率為91.30%(42/46), 顯著高于放化療組患者放化療后的68.75%(22/32) (P<0.05)。治療結束時，放化療組患者的血漿EBV-DNA陽性率顯著高于手術組(P<0.01), 但2組VCA-IgA及EA-IgA陽性率組間比較均無顯著差異(P>0.05), 見表6。

表6 不同處理方法治療后各項指標的陽性率比較[n(%)]

與手術組比較, **P<0.01。

3 討 論

相關研究[5-6]表明，鼻咽癌大部分為低分化鱗癌，并且其發生、發展與EB病毒感染有關。目前, EBV抗原主要包括VCA和EA。亦有相關研究[7]證實，持續監測VCA-IgA對于診斷早期鼻咽癌具有重要意義。在鼻咽癌中, EA-IgA具有較高的特異性，是機體EBV復制的標志之一[8-9]。本研究中，復發組的血漿EBV-DNA陽性率為51.33%, 而鼻咽癌無復發患者中未見檢出EBV-DNA。本研究結果表明，鼻咽癌治療后無復發的患者VCA-IgA和EA-IgA陽性率分別為55.56%和30.56%, 提示不能僅通過檢測VCA-IgA和EA-IgA判斷患者有無復發和轉移[10]。

本研究結果表明，臨床分期越高，治療前EBV-DNA陽性率越高，提示EBV-DNA水平可能與鼻咽癌患者臨床分期有關，與國外相關研究結果一致[11]。亦有研究[12]顯示，頸部鼻咽癌復發灶的腫瘤負荷大于局部鼻咽癌復發灶，使其EBV-DNA載量水平較高。而目前局部和頸部均復發的鼻咽癌發生率較低。本研究結果顯示，治療前，不同復發類型患者其血漿EBV-DNA、VCA-IgA和EA-IgA陽性率組間比較均無顯著差異(P>0.05)。

目前，鼻咽癌復發患者通常進行以手術為主的綜合治療。手術切除腫瘤可迅速降低機體EBV-DNA水平，可能是由于腫瘤細胞產生量減少，而血液循環清除率增高，使血漿中EBV水平降低。治療前復發性鼻咽癌患者EBV-DNA水平越高，其預后越差。EBV-DNA的清除率與預后密切相關。本研究結果顯示，治療前，放化療組與手術組的血漿EBV-DNA陽性率組間比較均無顯著差異。手術組患者的術后血漿EBV-DNA轉陰率為91.30%(42/46), 顯著高于放化療組患者放化療后的68.75%(22/32) (P<0.05)。治療結束時，放化療組患者的血漿EBV-DNA陽性率顯著高于手術組(P<0.01)。

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Expressionofepstein-barrvirusDNA,viralcapsidantigen-lgAandearlyantigen-IgAinpatientswithrecurrenceorradiationnecrosisofskullbaseaftercomprehensivetreatmentofnasopharyngealcarcinomaanditsclinicalsignificance

HUANGYanfeng1,LIANGSheng2,LUXuedong1

(1.HengxianHospitalofTraditionalChineseMedicineinNanningofGuangxiZhuangAutonomousRegion,Hengxian,Guangxi, 530300; 2.HengxianPeople′sHospitalofGuangxiZhuangAutonomousRegion,Hengxian,Guangxi, 530300)

ObjectiveTo investigate the expression of epstein-barr virus DNA, viral capsid antigen-lgA and early antigen-IgA in patients with recurrence or radiation necrosis of skull base after comprehensive treatment of nasopharyngeal carcinoma and its clinical significance.MethodsA total of 150 patients with recurrent nasopharyngeal carcinoma (NPC) treated in our hospital were divided into operation group (n=93) and chemoradiotherapy group (n=57). At the same time, 36 patients with skull base necrosis were selected as control group (without recurrence). The positive rates of VCA-IgA, EA-IgA and EBV-DNA in each group before and after treatment were compared.ResultsBefore treatment, the positive rate of plasma EBV-DNA of recurrence group was significantly higher than that of the control group(P<0.01). The positive rate of VCA-IgA and EA-IgA between two groups showed no statistically significant difference (P>0.05). Before treatment, there was no statistical significant difference in the positive rate of plasma EBV-DNA, VCA-IgA and EA-IgA among different groups (P>0.05). The higher clinical stage was, and the higher positive rate of EBV-DNA was before treatment (P<0.01). There was no significant difference in the positive rate of plasma VCA-IgA and EA-IgA among the patients with different clinical stages (P>0.05). After treatment, the negative rate of EBV-DNA was 91.30% in the operation group, which was significantly higher than 68.75% in the chemoradiotherapy group. The positive rate of plasma EBV-DNA in chemotherapy group was significantly higher than that in the surgery group (P<0.01), but the positive rate of VCA-IgA and EA-IgA between groups showed no significant difference (P>0.05).ConclusionEndoscopic sinus surgery can significantly reduce the level of EBV in NPC patients, and the detection of EBV-DNA is of great significance in the diagnosis of recurrence and clinical staging of NPC.

nasopharyngeal carcinoma; epstein-barr virus DNA; viral capsid antigen-lgA; early antigen-IgA; nasal endoscope

2017-07-18

廣西壯族自治區衛生廳基金項目(Z2011236)

R 739.6

A

1672-2353(2017)23-064-04

10.7619/jcmp.201723019