細胞DNA倍體分析聯合高危HPV DNA核酸檢測在子宮頸鱗狀上皮高級別內病變篩查中的應用研究

林娜　吳春林

【摘要】 目的：探討細胞DNA倍體分析聯合高危HPV DNA核酸檢測在子宮頸鱗狀上皮高級別內病變篩查中的應用價值。方法：選取2015年8月-2017年2月就診于筆者所在醫(yī)院的宮頸疾病患者260例。所有患者均同時給予細胞DNA倍體分析、高危HPV DNA核酸兩種方式單一或聯合檢測。以陰道鏡病理活檢為金標準，比較高危HPV DNA核酸檢測、細胞DNA倍體分析單獨或聯合檢測的靈敏度、特異度、準確度。結果：兩種方式聯合檢測子宮頸上皮內病變的靈敏度、特異度、準確度分別為85.64%、92.31%、86.54%，其中特異度與準確度明顯高于高危HPV DNA檢測的41.54%、78.46%及細胞DNA倍體分析的86.15%，81.15%，差異均有統計學意義（P<0.05）；聯合檢測靈敏度略低于高危HPV DNA檢測的90.77%，差異無統計學意義（P>0.05）；但明顯高于細胞DNA倍體分析的78.46%，差異有統計學意義（P<0.05）。結論：細胞DNA倍體分析聯合高危HPV DNA核酸檢測可顯著提高早期宮頸病變診斷的準確度，改善篩查工作質量，有助于防治宮頸癌，提升醫(yī)療衛(wèi)生水平。

【關鍵詞】 宮頸病變； 細胞DNA倍體分析； 人乳頭狀瘤病毒； 篩查

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2017.31.038 文獻標識碼 B 文章編號 1674-6805（2017）31-0076-03

宮頸持續(xù)感染HPV是導致正常宮頸發(fā)生惡性病變的關鍵因素，在一百多種亞型中，約有30種具有致癌性，其中16型、18型、33型等十四種HPV亞型因與宮頸癌具有緊密的關系而被稱為高危型HPV[1]。受人體免疫等影響，絕大多數HPV感染者1～2年內即可自動清除HPV病毒，低級別的宮頸上皮病變可自行消退，因而癌變發(fā)生的可能性較小，但仍有小部分患者因持續(xù)感染HPV最終進展為宮頸癌。大約有8～10年的癌前病變時期，故在發(fā)展為宮頸癌之前從早期篩查中發(fā)現宮頸癌前病變，尤其是發(fā)現宮頸高級別上皮內病變，及時阻斷病情發(fā)展，具有重大的臨床意義。HPV DNA檢查是宮頸癌篩查中較為常見的一種手段，尤其適用于發(fā)展中國家[2-3]。但有研究顯示，HPV 屬于病因，無法確定病毒活性及病變嚴重性，且絕大多數屬于一過性感染，多數感染HPV的女性并不會發(fā)展為CIN或宮頸癌，靈敏度雖高，但特異性低，因而不利于評估宮頸病變的進展情況。另外，越來越多報道表明，僅依靠HPV檢測進行ASCUS分流可能導致部分高級別宮頸病變漏診，因可能存在與HPV感染無關的宮頸病變，或HPV清除前已出現不可逆的宮頸病變，或存在HPV假陰性等[4]。DNA倍體分析屬于篩查早期宮頸病變的新型技術，為宮頸癌的篩查指出了新的方向，但因受制于取材、制片及病理醫(yī)師的判讀水平高低，細胞學檢查常伴有假陰性[5]。因此本文意將細胞DNA倍體分析聯合高危HPV DNA核酸檢測對早期的宮頸病變進行篩查研究，旨在對不同患者進行分流診治，及時發(fā)現宮頸上皮高級別內病變，阻斷病情發(fā)展，降低宮頸癌的病發(fā)率，進一步改進宮頸病變篩查工作質量。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2015年8月-2017年2月就診于筆者所在醫(yī)院婦科的宮頸疾病患者260例，年齡25～65歲，平均（39.76±4.29）歲。臨床癥狀表現為接觸性出血、陰道異常出血、白帶異味、白帶增多、下腹部疼痛、外陰瘙癢等。

1.2 方法

1.2.1 取樣方法 非經期采樣，患者取膀胱截石位，采用窺陰器直視宮頸，用棉球將過多的粘液與分泌物拭去，于宮頸內放入專用采樣器，將其向前輕柔抵住，旋轉3～5周，輕緩取出采樣器，刷頭置入保存液內，取樣管瓶蓋擰緊后，貼上標簽送檢。

1.2.2 檢測方法

1.2.2.1 高危HPV DNA 核酸檢測 采用羅氏Cobas 4800系統及相應的試劑盒檢測HPV DNA亞型。檢測將所需洗液、樣本制備試劑、樣本提取試劑、陰陽性質控從冰箱取出，平衡30 min至室溫。將樣本充分振蕩混勻后轉移至二極導管，至少保證體積1.0 ml，隨后將編號后的二極管放置于樣本架，并上載到cobas x480軌道上，隨即可進行全自動核酸提取。待HPV DNA提取成功后手動取出微孔板，封膜，轉移至cobas z 480進行核酸擴增和熒光檢測，最后由系統軟件給出結果，報告結果為HPV16（+/-）、HPV18（+/-）、其他12型高危（+/-）。

1.2.2.2 細胞DNA倍體分析 將標本振蕩，離心5 min（800 rpm），50%乙醇清洗，離心2次，棄上清液，加固定劑2～3 ml，振蕩，混勻，加200 μl細胞懸液入細胞離心管，離心、甩片5 min，制成液基薄層細胞片2張。1張采用巴氏染色做常規(guī)細胞學檢查，由具有資質的病理醫(yī)師閱片，采用TBS系統對結果進行分級判斷，細胞學結果異常的需經病理主任醫(yī)師確認。另1張采用Feulgen染色進行DNA倍體分析，采用廈門麥克奧迪醫(yī)療診斷系統有限公司提供的全自動細胞DNA倍體定量分析儀及全自動圖片分析系統。

1.2.2.3 宮頸病理活檢 將≥3個DNA異常倍體細胞標本或細胞學診斷判讀為Aucus以上的行電子陰道鏡及宮頸活組織病理檢查。宮頸組織病理活檢結果以WHO子宮頸腫瘤組織學分類標準報告，結果包括正常/慢性炎癥、宮頸上皮低級別內病變（CINⅠ）、宮頸上皮高級別內病變（CINⅡ和CINⅢ）和宮頸浸潤癌。

1.3 觀察指標

根據陰道鏡病理活檢為診斷金標準，DNA倍體分析診斷標準：病變細胞（DI≥2.5）≥3個或細胞學診斷判讀為Aucus以上，高危HPV DNA核酸檢測結果由Cobas系統給出：HPV16（+/-）、HPV18（+/-）、其他12型高危（+/-）。二者聯合診斷以陰道鏡病理活檢為診斷金標準，比較高危HPV DNA核酸檢測，細胞DNA倍體分析單獨檢查及兩者聯用時的靈敏度、特異度及準確度。比較高危HPV DNA核酸檢測，細胞DNA倍體分析單獨檢查及兩者聯用時的靈敏度、特異度及準確度。其中靈敏度=真陽性/（真陽性+假陽性），即與病理診斷陽性符合的例數/病理診斷陽性例數；特異度=真陰性/（真陰性+假陰性），即與病理診斷陰性符合的例數/病理診斷陰性例數；準確度=（真陽性+真陰性）/（真陽性+真陰性+假陽性+假陰性），即與病理診斷陽性、陰性符合的例數/病理診斷總例數。endprint

1.4 統計學處理

采用SPSS 21.0軟件對所得數據進行統計分析，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗；計數資料以率（%）表示，采用字2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

260例患者經陰道鏡病理診斷顯示，正常或宮頸炎癥65例，子宮頸鱗狀上皮病變195例，其中低級別病變102例，高級別病變85例，宮頸癌8例。兩種方式聯合檢測出子宮頸上皮內病變的特異度、準確度均明顯高于高危HPV DNA 核酸與細胞DNA倍體分析分別單獨檢測，差異有統計學意義（P<0.05），見表1、表2、表3、表4。

3 討論

HPV DNA分型檢測旨在從分子生物學水平對宮頸早期病變進行及時跟蹤及輔助診斷：了解病毒擴增、基因亞型、病毒載量及病毒基因組通過自我組裝整合到宿主細胞，誘導E6、E7基因表達癌蛋白，阻止細胞凋亡，致細胞周期失控，從而作為細胞發(fā)生高級別病變的重要信號[6]。而細胞DNA倍體分析作為新發(fā)展的細胞學檢測方法主要從細胞水平對宮頸早期病變進行判斷，通過結合細胞形態(tài)改變及細胞核內DNA含量或倍體的測定來判斷細胞的生理狀態(tài)和病理改變[7]。

本文研究結果提示，盡管高危型HPV DNA核酸檢測可獲得相對較高的靈敏度（90.77%），但其特異度僅為16.92%，易對患者造成不必要的心理壓力，甚至誤治或行陰道鏡病理檢查，也無法對宮頸病變程度進行監(jiān)測，造成漏診。單獨的細胞學檢測具有較高的靈敏度（79.49%）和特異度（86.15%），但因取材、制片及病理醫(yī)師的診斷水平高低因素，也常伴有假陰性，造成誤診。而兩種方法聯合篩查彌補了各自單獨檢測時的缺點，同時從細胞和分子水平對HPV感染后細胞的一系列變化進行跟蹤判斷，通過顯著提高特異度（92.31%，分別高于41.54%和86.15%）和準確度（86.15%），減少了誤診、漏診事件的發(fā)生，也有助于改進宮頸癌篩查工作質量[8]。

宮頸癌是目前唯一一個病因明確并且可以預防的癌癥，它的發(fā)生是一個漸進的過程，包含多個階段，由HPV感染至CIN，再到宮頸癌的演變過程長達數十年，在此期間進行準確的篩查及診治具有重要意義，尤其對于宮頸上皮高級別病變患者。目前，宮頸癌的篩查工作仍面臨一定挑戰(zhàn)，每年仍有不少新確診的宮頸癌患者，且呈年輕化與地區(qū)增長性趨勢，尤其是經濟欠發(fā)達地區(qū)，多存在人口基數大、醫(yī)療衛(wèi)生資源短缺、病理醫(yī)生不足、經費較少等問題[9]。細胞學檢測的發(fā)展大大降低了宮頸癌的死亡率，但受上述問題影響，加之宮頸細胞學檢測對醫(yī)生主觀判斷宮頸細胞異常狀態(tài)的依賴性較強，同時細胞核發(fā)生異常時病情多已進展至中晚期，不利于早期診斷宮頸病變[10-11]。

HPV持續(xù)感染是導致頸癌變的重要原因，因此HPV DNA分型檢測必然在宮頸癌篩查中的占據重要地位，在早期宮頸病變的篩查及分流診治中具有關鍵性作用。細胞DNA倍體分析對高危HPV的檢出率高，其檢測圖像系統對異常細胞有較高的敏感性，可以及時發(fā)現細胞核中DNA含量和結構發(fā)生異常的變化，進而發(fā)現DNA異倍體細胞，可以是腫瘤預測和預后評估的一項重要檢測方法，為患者的進一步分流診治提供重要的檢測依據[12]。因此，本文在高危HPV DNA核酸檢測的基礎上聯合細胞DNA倍體分析進行研究，結果提示，兩種方式聯合檢測顯著提高了宮頸病變篩查的靈敏度、特異度及準確度，減少漏診、誤診的發(fā)生，有利于高危HPV感染婦女的分流診治，及時發(fā)現早期的宮頸病變，避免宮頸上皮高級別病變漏診，對于阻斷病情發(fā)展，預防宮頸癌，具有較高的臨床應用價值。

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（收稿日期：2017-07-25）endprint