流式細胞學技術檢測急性髓細胞白血病患者外周血淋巴細胞亞群的效果分析

汪宏梅, 張云寧, 羅 云

(江蘇省泰興市人民醫院 檢驗科, 江蘇 泰興, 225400)

流式細胞學技術檢測急性髓細胞白血病患者外周血淋巴細胞亞群的效果分析

汪宏梅, 張云寧, 羅 云

(江蘇省泰興市人民醫院 檢驗科, 江蘇 泰興, 225400)

目的分析流式細胞學技術檢測急性髓細胞白血病患者外周血淋巴細胞亞群的變化的效果。方法選取108例急性髓細胞白血病患者為白血病組，另選取108例健康人員作為健康組，采用MultiSET免洗淋巴細胞亞群試劑盒，運用美國BD公司生產的流式細胞儀CD45/SSC設門檢測10 000個細胞，采用FACS Diva軟件對細胞免疫表型及表達強度進行分析。結果白血病組患者的CD3、CD4、CD4+/CD8+、CD16+/CD56+均顯著低于健康組(P<0.05)，CD8+、CD19+均顯著高于健康組(P<0.05)。細胞CD33、CD38、Cyt-MPO抗原高表達數比例較高，分別占總數的72.5%、70.4%、67.5%; 其次為CD15、CD64，分別占總數的38.0%、32.5%。高表達CD33和CD64及Cyt-MPO表達均呈顯著正相關(P<0.05)，但是和CD15表達無相關性(P>0.05)。結論流式細胞學技術檢測急性髓細胞白血病患者外周血淋巴細胞亞群，能夠對其變化規律有一個清晰的了解。

流式細胞學技術; 急性髓細胞白血病; 外周血淋巴細胞亞群

急性髓細胞白血病又稱急性非淋巴細胞白血病，是一種高度異質化的惡性血液病，發生機制為骨髓中集聚血細胞的髓性癌，正常血細胞的生成受到快速生長的異常白細胞的干擾，進而從骨髓向血液進入，取代正常血細胞[1-2]。目前，臨床還未明確急性髓細胞白血病的具體病因，普遍認為其發病可能受到病毒感染、化學物質毒性等的影響，而癌細胞可能會在缺失機體細胞/體液免疫功能、較弱的免疫清除能力等的作用下無限增殖[3]。本研究分析流式細胞學技術檢測急性髓細胞白血病患者外周血淋巴細胞亞群的變化的效果，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院2013年5月—2016年5月收治的急性髓細胞白血病患者108例為白血病組，所有患者均符合《血液病診斷及療效標準》[4]中急性髓細胞白血病的診斷標準，均經血常規檢查及骨髓穿刺檢查確診為急性髓細胞白血病，均知情同意。其中男58例，女50例，年齡16～54歲，平均(19.4±5.4)歲; 在FAB分型方面, 10例患者為M0, 15例患者為M1, 23例患者為M2, 20例患者為M3, 13例患者為M4, 14例患者為M5, 13例患者為M6。另選取同期來本院進行體檢的108例健康人員作為健康組，其中男57例，女51例，平均(22.0±5.3)歲。2組患者的一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05), 具有可比性。

1.2 方法

采集2組患者的外周靜脈全血2 mL, 在抗凝管中放置，振搖均勻后備用。分別將50 μL抗凝全血取出來，在FACS專用試管中放置，將20 μL CD3/CD4/CD8/CD45/CD19/CD45/CD1等標記的抗體分別加入其中，旋渦混勻，室溫下進行15 min的避光放置，將450 μL溶血素加入其中，混勻后進行15 min的避光放置，采用MultiSET免洗淋巴細胞亞群試劑盒，運用美國BD公司生產的流式細胞儀CD45/SSC設門檢測10 000個細胞，采用FACS Diva軟件對細胞免疫表型及表達強度進行分析。

1.3 統計學分析

2 結 果

2.1 2組患者的外周血T、B淋巴細胞和NK細胞亞群檢測結果比較

白血病組患者的CD3、CD4、CD4+/CD8+、CD16+/CD56+均顯著低于健康組(P<0.05)，CD8+、CD19+均顯著高于健康組(P<0.05), 見表1。

表1 2組患者的外周血T、B淋巴細胞和NK細胞亞群 檢測結果比較 %

與健康組比較, *P<0.05。

2.2 白血病組患者細胞CD抗原表達分布情況

分析

白血病組患者細胞CD33、CD38、Cyt-MPO抗原高表達數比例較高，分別占總數的72.5%、70.4%、67.5%; 其次為CD15、CD64, 分別占總數的38.0%、32.5%; 再次為CD7，占總數的13.0%; 最后為CD2、CD19, 均為0%, 見表2。

2.3 白血病組患者高表達CD33和CD15、CD64及

Cyt-MPO表達的相關性分析

白血病組患者高表達CD33和CD64及Cyt-MPO表達均呈顯著正相關(P<0.05), 但是和CD15表達無相關性(P>0.05), 見表3。

3 討 論

急性髓細胞白血病屬于一種惡性腫瘤性疾病，誘發因素為造血干細胞異常增生，現階段急性髓細胞白血病患者具有較低的5年生存率[5]。發生這一現象的主要原因為現階段的治療手段無法將致病細胞徹底清除掉，在一定程度上殘留了致病細胞，從而造成白血病復發，最終造成白血病致死等。很多相關醫學研究[6-8]表明，白血病的發病受到外周血淋巴細胞亞群異常的影響。

在免疫系統中，淋巴細胞占有極為重要的地位，依據細胞表面標志及功能，臨床分淋巴細胞為很多不同群體，在免疫應答中進行分化及增值前經抗原活化，最終將功能表達出來對效應進行形式，對機體內穩定的環境進行有效維持。在腫瘤免疫中，T淋巴細胞發揮著中心調控的作用，其屬于一群人胸腺中輸出細胞，具有特殊標志，對細胞免疫功能及免疫調節功能進行執行，其中CD3+細胞代表T淋巴細胞總數; 在免疫應答過程中, CD4+細胞作為反應細胞占有極為重要的地位，能夠促進其他免疫細胞功能的增強或將其擴大。如果其T淋巴細胞減少，則說明患者體內具有較低的細胞免疫功能; CD8+細胞一方面會對靶細胞產生細胞毒作用，另一方面還會調節性免疫抑制CD4+細胞。如果其T淋巴細胞相對增加，則能夠為機體處于免疫抑制狀態提供良好的前提條件，并促進白細胞對癌變細胞清除能力的減弱，使癌細胞殘存，從而提升復發率; CD4+/CD8+的穩定比例對細胞免疫反應的平衡進行維持，其將抗腫瘤作用有效發揮出來的唯一條件為具有正常的水平[9]。

表2 白血病組患者細胞CD抗原表達分布情況分析[n(%)]

表3 白血病組患者高表達CD33和CD15、CD64及Cyt-MPO表達的相關性分析

Cyt-MPO屬于一種過氧化物酶，產生主體為中性粒細胞嗜天青顆粒，能夠將足夠的自由基產生出來，途徑為催化氯化物并氧化氧化氫，進而對NK細胞對腫瘤細胞的反應進行抑制，對機體免疫功能造成直接而深刻的影響; CD15屬于一種碳水化合物抗原，在單核細胞及中性粒細胞細胞膜表面糖蛋白上存在，其一方面作為第二信使在細胞間的信號傳導中參與，向細胞質及細胞核傳導細胞外信息，另一方面還使腫瘤細胞易于在基膜上黏附，途徑為通過細胞黏附作用，從而為癌癥進展提供良好的前提條件; CD19是B細胞的一個標志，在一定程度上影響著B細胞的分化、增值等; CD45是一種白細胞表面共同抗原，能夠將全部白細胞獲取過來，這些白細胞沒有雜細胞，途徑為通過CD45/SSC設門; CD33分子屬于一種跨膜受體，分布于髓系細胞細胞表現，臨床普遍認為其標志著粒細胞特異性; CD64在白細胞表面分布，屬于一種Fc受體，將體液調節和細胞免疫連接了起來[10]。

[1] 中華醫學會血液學分會. 急性髓系白血病(復發難治性)中國診療指南(2011年版)[J]. 中華血液學雜志, 2011, 32(12): 887-888.

[2] 中華醫學會血液學分會. 成人急性髓系白血病(非急性早幼粒細胞白血病)中國診療指南(2011年版)[J]. 中華血液學雜志, 2011, 32(11): 804-807.

[3] 陳影. 流式細胞術檢測急性髓細胞白血病免疫表型及其臨床意義[D]. 安徽醫科大學, 2014.

[4] 賈明峰, 席亞明, 石秀娥, 等. MPO、NQ01優基因多態性與急性白血病易感性的相關研究[J]. 中國實驗血液學雜志, 2012, 20(6): 1336-1340.

[5] 張書芹, 王光平, 朱平, 等. 急性髓系白血病CD33+/CD34+細胞表面核酸適配體的篩選及結構分析[J]. 中國實驗血液學雜志, 2011, 19(3): 561-565.

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[8] 王忠英, 林楨, 鄧小燕, 等. 急性髓細胞白血病17號染色體短臂雜合性缺失的研究[J]. 檢驗醫學與臨床, 2011, 8(9): 1025-1026, 1029.

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[10] Chen Mo, Zhu Nan, Liu Xiaochuan, et al. JMJD1C is required for the survival of acute myeloid leukemia by functioning as a coactivator for key transcription factors[J]. Genes & Development, 2015, 29 (20): 2123-2139.

Effectofflowcytometryondetectionofperipheralbloodlymphocytesubsetsinpatientswithacutemyeloidleukemia

WANGHongmei,ZHANGYunning,LUOYun

(DepartmentofLaboratory,TaixingPeople′sHospital,Taixing,Jiangsu, 225400)

ObjectiveTo analyze the effect of flow cytometry on detection of peripheral blood lymphocyte subsets in patients with acute myeloid leukemia.MethodsA total of 108 patients with acute myeloid leukemia were selected as leukemia group, and 108 healthy people were selected as control group. MultiSE lymphocyte subsets regents and flow cytometer (CD45/SSC, America) were used to detect 10 000 cells, and FACS Diva software was used to analyze the cellular immunophenotype and expression intensity.ResultsIn the leukemia patients, the CD3, CD4, CD4+/CD8+, CD16+/CD56+were significantly lower than normal people, while CD8+, CD19+were significantly higher (P<0.05). Expression of antihelion of cell CD33, CD38and Cyt-MPO were high, respectively accounting for 72.5%, 70.4% and 67.5%, and followed by CD15, CD64, which accounting for 38% and 32.5% respectively. High expressions of CD33, CD64and Cyt-MPO all showed positive correlations (P<0.05), but was not related with expression of CD15(P>0.05).ConclusionFlow cytometric analysis of peripheral blood lymphocyte subsets in patients with acute myeloid leukemia can provide a clear understanding of the change of lymphocyte subsets.

flow cytometry; acute myeloid leukemia; peripheral blood lymphocyte subsets

R 733.71

A

1672-2353(2017)21-036-03

10.7619/jcmp.201721010

2017-06-05