枸杞多糖對甲醛致小鼠睪丸組織氧化損傷和酶活性的影響

孫晶，常會忠，張立群，張小蕾＊

（1.山西省長治市人民醫院，山西 長治 046000；2.貴州醫科大學醫學檢驗學院，貴州 貴陽 550025）

枸杞多糖對甲醛致小鼠睪丸組織氧化損傷和酶活性的影響

孫晶1，常會忠1，張立群1，張小蕾2＊

（1.山西省長治市人民醫院，山西 長治 046000；2.貴州醫科大學醫學檢驗學院，貴州 貴陽 550025）

目的觀察枸杞多糖（LBP）對甲醛（FA）致雄性小鼠睪丸組織氧化損傷和酶活性的影響。方法健康雄性昆明種小鼠96只，隨機分為8組，FA低、中、高［0.2 mg/(kg.d)、2.0 mg/(kg.d)、20 mg/(kg.d)］劑量組，LBP低、中、高［50 mg/(kg.d)、100 mg/(kg.d)、200 mg/(kg.d)］劑量拮抗組，陽性對照組［環磷酰胺50 mg/(kg.d)］和陰性對照組（生理鹽水）。FA染毒組和陰性對照組腹腔注射，每天1次，連續14 d，陽性對照組腹腔注射，隔天1次，共14 d。LBP拮抗組腹腔注射高劑量FA，同時灌胃LBP溶液，每天1次，連續14 d。給藥結束后，處死小鼠，測定小鼠睪丸組織超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量、葡萄糖6磷酸脫氫酶（G-6-PD）和山梨醇脫氫酶（SDH）活性。結果FA染毒組睪丸組織SOD下降，MDA含量增高，LBP組較FA染毒組SOD升高，MDA含量下降；FA染毒組睪丸組織G-6-PD、SDH活性降低，LBP中、高劑量組均明顯增高。結論FA染毒雄性小鼠致睪丸組織氧化損傷和標志酶活性下降，LBP可能通過抗氧化作用減輕睪丸組織氧化損傷，提高標志酶活性。

甲醛；枸杞多糖；雄性小鼠；生殖毒性；氧化損傷

枸杞子是我國的傳統中藥材，LBP是枸杞子的主要功能成分之一，具有較強的生理活性[1-5]。前期研究證實，LBP可明顯改善小鼠的精子數量，活動率和畸形率，也可改善小鼠體內性激素水平。本實驗主要研究枸杞多糖對小鼠睪丸組織氧化損傷和酶活性的影響。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與儀器 甲醛（重慶江川化工）、LBP（湖北遠成藥業）、環磷酰胺（江蘇恒瑞醫藥）、考馬斯亮蘭試劑盒、超氧化物歧化酶試劑盒、丙二醛試劑盒（南京建成生物工程研究所），葡萄糖6磷酸脫氫酶試劑盒、山梨醇脫氫酶試劑盒（美國Rapidbio(RB)公司），主要儀器有低速多管架自動平衡離心機（長沙邁佳森）、721型分光光度計（山東高密彩虹）、自動平衡微型離心機（德國）、低溫離心機（sigma公司）、酶標儀（芬蘭）。

1.2 實驗動物及處理 由貴州醫科大學動物中心提供的6周齡-8周齡健康雄性昆明種小鼠96只，體質量30 g-35 g，適應性喂養1周后，隨機分為8組，FA低、中、高［0.2 mg/(kg.d)、2.0 mg/(kg.d)、20 mg/(kg.d)］劑量組，LBP低、中、高［50 mg/(kg.d)、100 mg/(kg.d)、200 mg/(kg.d)］劑量拮抗組，陽性對照組［環磷酰胺50 mg/(kg.d)］和陰性對照組（生理鹽水）。甲醛染毒組和陰性對照組腹腔注射，每天1次，連續14 d，陽性對照組腹腔注射，隔天1次，共14 d。LBP拮抗組腹腔注射高劑量甲醛，同時灌胃LBP溶液，每天1次，連續14 d。給藥體積為0.05 mL/g體質量，小鼠給藥期間，自由飲食飲水。染毒結束后，禁食24 h，眼球取血，脫臼處死。取一側睪丸，制備睪丸勻漿，按說明書操作測定睪丸SOD、MDA和G-6-PD、SDH活性[6]。

1.3 統計學方法 采用SPSS 17.0軟件進行數據分析，計數資料采用率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；計量資料采用均數±標準差（Mean±SD）表示，組間比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組睪丸組織SOD、MDA結果比較 FA染毒組SOD降低，LBP中、高劑量組與FA高劑量組比較，SOD增高，差異有統計學意義（P＜0.05或P＜0.01）。FA中、高劑量組MDA增高，LBP低、中、高劑量拮抗組與FA高劑量組比較，MDA降低，差異有統計學意義（P＜0.01）。見表1。

3.2 各組睪丸組織G-6-PD、SDH結果比較 FA組G-6-PD下降，LBP中、高劑量組與FA高劑量組比較，G-6-PD增高，差異有統計學意義（P＜0.05）。FA各組SDH活性下降，LBP低、中、高劑量組SDH升高，與FA高劑量組比較，差異有統計學意義（P＜0.01），見表2。

表1 各組睪丸組織SOD、MDA結果比較（Mean±SD）

表2 各組睪丸組織G-6-PD、SDH結果比較（Mean±SD）

3 討論

本研究中，隨LBP拮抗劑量的增高，SOD活性逐漸升高，MDA含量逐漸下降，與高劑量FA染毒組相比，差異有統計學意義。這與國內學者的結論是一致的。LBP拮抗甲醛氧化損傷的途徑可能有兩種：一是LBP直接清除體內過多的自由基；二是通過提高抗氧化酶活力的間接作用來清除過多自由基。而且有學者指出，LBP清除自由基的能力與LBP濃度成正相關性[7]。

G-6-PD可作為反映睪丸間質細胞功能的標志酶，SDH可作為睪丸成熟、精子功能成熟和形態完善的標志酶。本研究中，FA染毒組G-6-PD、SDH活力顯著下漸，提示睪丸和精子功能成熟障礙，這與謝穎等的結果是一致的。LBP各組，G-6-PD、SDH均升高，表明LBP可以提高睪丸細胞標志酶活性，減輕FA對睪丸功能的損害。其具體機制尚有待于進一步研究。

[1]Zhu CP,Zhang SH.Lycium barbarum polysaccharide inhibits the proliferation of He La cells by inducing apoptosis [J].J Sci Food Agric,2013,93(1): 149-156.

[2]燕憲濤,路新國.枸杞多糖生物活性的研究進展[J].中國食物與營養,2011,17(11): 73-75.

[3]張雅莉,黃曉旭,蔡美琴.枸杞多糖的抗氧化及緩解體力疲勞作用研究進展[J].上海交通大學學報,2015(6): 24-26.

[4]譚克力,羅瓊.枸杞多糖對受照射大鼠生殖系統的保護作用[J].中華放射醫學與防護雜志,2008,28(3): 258-259.

[5]羅瓊,黃曉蘭,李卓能,等.枸杞多糖對雄性大鼠性功能及生殖功能的影響[J].營養學報,2006,28(1): 62-65．

[6]謝穎,易義珍,唐明德,等.甲醛對雄性小鼠生殖細胞的毒性[J].環境與健康雜志,2003,20(2): 84-85.

[7]周黨俠,王海旭,張潔,等.甲醛急性染毒對性成熟期雄性大鼠睪丸支持細胞結構和功能的影響[J].現代泌尿外科雜志,2009,14(2): 125-127.