RIP3介導的壞死性凋亡在C57BL/6小鼠顱腦創傷模型中的作用

于澤奇 衣泰龍 涂悅 楊小颯 江繼鵬 董曉煜 張賽 程世翔

·基礎研究·

RIP3介導的壞死性凋亡在C57BL/6小鼠顱腦創傷模型中的作用

于澤奇1衣泰龍2涂悅2楊小颯2江繼鵬2董曉煜3張賽2程世翔2

目的 探討受體相互作用蛋白3（RIP3）介導的壞死性凋亡在C57BL/6小鼠顱腦創傷（TBI）模型中的作用及其機制。 方法 采用電子控制性皮質撞擊儀（CCI），設定打擊參數（速度5 m/s、時間120 ms、深度1 mm），對小鼠頂葉大腦皮質進行精確撞擊，建立顱腦創傷模型。將80只雄性C57BL/6小鼠隨機分為4組，每組20只：Ctrl組不予處理，Sham組僅開骨窗，TBI組CCI打擊后原位注射4 μl的DMSO，GSK’872組CCI打擊后原位注射4 μl的 GSK’872。再采用改良型神經功能缺損評分（mNSS）量表評估小鼠顱腦創傷后損傷程度，腦干濕比重法檢測顱腦創傷后腦水腫程度，HE染色法檢測小鼠腦皮層及海馬區損傷程度，以創傷后覺醒時間評價損傷后恢復情況，Western blot法檢測RIP3/RIP1/混合連接激酶結構域樣蛋白 （MLKL）、Akt/p-Akt/哺乳動物雷帕霉素靶蛋白 （mTOR）/p-mTOR、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶8（Caspase-8）/X連鎖凋亡抑制蛋白(XIAP)、Caspase-1/核苷酸結合寡聚化結構域樣受體蛋白3(NLRP3)蛋白表達變化。 結果 與TBI組相比，GSK’872 可明顯降低 mNSS 評分 [1 d：（11.95±1.50） vs （13.05±1.82），t=2.084，P＜0.05；3 d：（8.95±1.39） vs （11.00±2.10），t=3.634，P＜0.01；5 d：（6.75±1.33） vs （8.90±1.52），t=4.759，P＜0.01；7 d：（4.00±1.08） vs （7.15±1.09），t=9.200，P＜0.01]， 同時可明顯減輕腦水腫 程度 [（77.91±0.84）%vs（80.34±0.94）%，t=8.692，P＜0.01]，減輕皮層及海馬區損傷程度，并促進創傷后覺醒[（4.08±0.63） h vs（5.11±0.74） h，t=4.717，P＜0.01]。 Western blot結果顯示， 與 TBI組相比， 應用 GSK’872 后能降低RIP3[（0.70±0.03） vs （1.04±0.04），t=13.051，P＜0.01]、RIP1[（0.93±0.02） vs （1.16±0.03），t=11.203，P＜0.01]、MLKL[（0.75±0.04） vs （1.03±0.03），t=9.873，P＜0.01]、Akt[（0.55±0.04） vs （0.77±0.05），t=6.278，P＜0.01]、p-Akt[（0.80±0.04） vs（0.99±0.04），t=6.217，P＜0.01]、mTOR[（0.48±0.05） vs （0.90±0.05），t=10.608，P＜0.05]、p-mTOR[（0.59±0.06） vs（1.00±0.05），t=9.144，P＜0.01]、Caspase-1[（0.80±0.04） vs（0.98±0.05），t=5.226，P＜0.01]、NLRP3[（0.51±0.03） vs （0.89±0.03），t=15.590，P＜0.01]、XIAP[（0.50±0.03） vs（0.83±0.03），t=13.340，P＜0.01] 蛋白表達， 并可促進 Caspase-8 持續升高 [（0.83±0.03） vs（0.71±0.03），t=5.044，P＜0.01]，差異具有統計學意義。 結論 RIP3介導的壞死性凋亡在小鼠顱腦創傷中起重要作用，應用GSK’872可減輕小鼠顱腦創傷后的損傷程度，提示RIP3有可能成為將來臨床上治療顱腦創傷新的靶點。

受體相互作用蛋白3；……