建立泰樂（鹽酸特拉唑嗪膠囊）微生物限度的檢查方法

周 蓉 陳小燕 余曉燕 劉 衛 葉紅芳

（揚子江藥業集團江蘇制藥股份有限公司，江蘇 泰州 225321）

建立泰樂（鹽酸特拉唑嗪膠囊）微生物限度的檢查方法

周 蓉 陳小燕 余曉燕 劉 衛 葉紅芳

（揚子江藥業集團江蘇制藥股份有限公司，江蘇 泰州 225321）

目的建立泰樂（鹽酸特拉唑嗪膠囊）1 mg的微生物限度檢查新方法。方法參考《中國藥典》2015版，采用平皿法以及薄膜過濾法（沖洗量300 mL），接種6種試驗菌測定其回收率。結果適用性試驗中各試驗菌的回收率均在0.5～2。結論該方法可行有效，能用于泰樂（鹽酸特拉唑嗪膠囊）1 mg的微生物限度檢查。

泰樂（鹽酸特拉唑嗪膠囊）；適用性試驗；微生物限度檢查法

泰樂（鹽酸特拉唑嗪膠囊）1 mg是一種主要以鹽酸特拉唑嗪為原料，糊精、乳糖等為輔料制成的硬膠囊劑，其經粉碎、混合、制粒、充填等工序制成。降壓效果顯著，安全性較高，毒性小；且對血脂有良好調節作用，亦可降低其他血管疾病的發病率；并能改善前列腺肥大患者的尿流動力和臨床癥狀，可用于前列腺肥大。鹽酸特拉唑嗪膠囊的溶出速率比之片劑有所提高，并且增加了生物利用度及其制劑穩定性。該試驗按《中國藥典》2015版建立泰樂（鹽酸特拉唑嗪膠囊）1 mg的微生物限度檢查方法[1]。

1 儀器與試藥

1384生物安全柜（Thermo Fisher Scientific），集菌儀（HTY-601型）；反復使用集菌培養器；低溫微生物培養箱（BINDER）。

試驗菌株：銅綠假單胞菌[CMCC（B）10104]、金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26003]、枯草芽孢桿菌[CMCC（B）63501]、大腸埃希菌[CMCC（B）44102]、白色念珠菌[CMCC（F）98001]、黑曲霉[CMCC（F）98003]（均來源于中國食品藥品檢定研究院，每種菌株接種代次均為第二代）。

試驗用培養基：沙氏葡萄糖瓊脂培養基（SDA）、沙氏葡萄糖液體培養基（SDB）、胰酪大豆胨液體培養基（TSB）、胰酪大豆胨瓊脂培養基（TSA）、麥康凱瓊脂培養基、麥康凱液體培養基（以上培養基均來自北京三藥科技開發公司）。

試驗用稀釋劑：pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液（揚子江藥業集團有限公司液體制劑車間制備分裝）。

試驗用供試品：泰樂（鹽酸特拉唑嗪膠囊）1 mg（揚子江藥業集團江蘇制藥股份有限公司固體制劑1號車間生產，批號15090111、15090711、15091611）。

2 方法與結果[2]

2.1 菌液制備：上述菌種按《中國藥典》2015版藥典四部1100生物檢查法中的菌液制備方法，制備試驗所需濃度的菌懸液和孢子懸液，備用[3]。

2.2 供試液制備：取泰樂（鹽酸特拉唑嗪膠囊）10 g，加入溫度不超過45 ℃的試驗用稀釋劑約100 mL，輕微振搖，待供試品充分溶散，作為1∶10的供試液，備用。

2.3 計數方法的適用性檢查

2.3.1 需氧菌總數：試驗組：首先往經滅菌的反復使用的集菌器內加入pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液約50 mL以潤濕濾膜，其后用移液器取上述制備的1∶10供試品溶液9.9 mL和＜10000 cfu的檢驗用菌（銅綠假單胞菌[CMCC（B）10104]、枯草芽孢桿菌[CMCC（B）63501]、黑曲霉[CMCC（F）98003]、白色念珠菌[CMCC（F）98001]、金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26003]）菌懸液各0.1 mL混和均勻后，吸取混合液1 mL至含100 mL pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液的濾筒內濾過，其后用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗過濾4次，每次使用100 mL緩沖液，過濾完成后用無菌不銹鋼鑷子夾取濾膜，貼于胰酪大豆胨瓊脂培養基（TSA）平板上，放在30～35 ℃的培養箱培養72 h。

菌液組：測出每一個所用試驗菌所需加的菌數量。

供試品對照組：參照試驗組同樣的方法進行試驗，不加試驗菌。

稀釋劑對照組：參照試驗組同樣的方法進行試驗，以pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液取代供試液，作為稀釋劑對照組。

2.3.2 霉菌和酵母菌總數

試驗組 用移液器吸取＜10000 cfu的試驗菌（黑曲霉和白色念珠菌）菌懸液0.1 mL和上述1∶10的供試液9.9 mL，待混和均勻，用移液器取1 mL混合液至無菌培養皿內，加入15～20 mL溫度不超過45 ℃溶化的沙氏葡萄糖瓊脂培養基（SDA），混勻，凝固，放在20～25 ℃的培養箱培養5 d。

菌液組 測出每一個所用試驗菌所需加的菌數量。

供試品對照組 參照試驗組同樣的方法，不加試驗菌。

稀釋劑對照組 參照試驗組同樣的方法，以pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液取代供試液，作為稀釋劑對照組。

2.4 控制菌檢查：供試液制備 參照2.2供試液制備的方法制備1∶10的供試液，備用。

2.4.1 大腸埃希菌檢查[4]：供試品對照組 移液器吸取10 mL供試液，接種至100 mL的胰酪大豆胨液體培養基（TSB）中，混和均勻，在32.5 ℃培養24 h。

試驗組：用移液器吸取不超過100 cfu的大腸埃希菌[CMCC（B）44102]菌懸液1 mL以及10 mL的供試液，接種到約100 mL的胰酪大豆胨液體培養基（TSB）中，在32.5 ℃ 培養24 h。

陽性對照組：用移液器吸取不超過100 cfu的大腸埃希菌[CMCC（B）44102]菌懸液1 mL，接種至100 mL的胰酪大豆胨液體培養基（TSB）中，在32.5 ℃ 培養24 h。

陰性對照組：取pH7.0無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液10 mL，接種至約100 mL的胰酪大豆胨液體培養基（TSB）中，在32.5 ℃ 培養24 h。

檢查：取上述各組培養物1 mL，接種至約100 mL的麥康凱液體培養基中，在43 ℃培養24 h；取上述各組的麥康凱液體培養物劃線于已凝固的麥康凱瓊脂培養基平板上，在32.5 ℃培養18 h。

標準規定：試驗組以及陽性對照組應顯陽性，陰性對照組及供試品對照組應無菌落生長[5]。

2.5 適用性試驗結果：見表1、2。

表1 泰樂（鹽酸特拉唑嗪膠囊）計數方法適用性檢查結果

表2 泰樂（鹽酸特拉唑嗪膠囊）控制菌適用性檢查結果

3 討 論

2015版《中國藥典》中微生物限度檢查方法與《歐洲藥典》8.0[6]極為相似，但是較2010版《中國藥典》相比，所用的培養基及其菌株均有變化；以需氧菌總數取代細菌計數；霉菌和酵母菌總數數取代霉菌及酵母菌計數。對于菌液濃度，2010版《中國藥典》規定應為50～100 cfu，而2015版《中國藥典》規定不大于100 cfu，要求降低。回收率方面，2015版《中國藥典》規定要求達到0.5～2，與2010版《中國藥典》相比，回收率范圍更廣。

泰樂（鹽酸特拉唑嗪膠囊）具有不同程度的抑菌作用，經多次試驗，建議需氧菌總數采用薄膜過濾法[7]，且以總沖洗量為300、400、500 mL進行適用性試驗，最后確定400 mL的總沖洗量幾乎可以消除抑菌活性，各試驗菌的回收率均能達到要求；故最終確定測定霉菌和酵母菌總數可以采用平皿法；控制菌檢查采用常規方法。2015版《中國藥典》中規定當供試品具有抑菌活性時，應采用恰當的方法對樣品進行預處理，以消除抑菌活性。常見的方法有增加稀釋液或培養基體積、加入適宜的中和劑或滅活劑、薄膜過濾法，有的時候還可以視情況將幾種方法聯用，以達到最佳效果。

[1] 李趣嫦,江艷芳.《中國藥典》2010版與2015版微生物限度檢查法對四種藥物檢測結果的比較[J].中國藥品標準,2015,16(2):86-90.

[2] 孫玲蘭.雙黃連口服液微生物限度檢查法驗證[J].中國藥師,2008,11(1):102-103.

[3] 陳志禹,席時東.《中國藥典》2010年版與2015年版大腸埃希菌檢查方法的比較研究[J].中國衛生檢驗雜志,2016,26(6):813-815.

[4] 朱文娟.大腸菌群檢查與膽汁耐受革蘭陰性菌檢查比較研究[J].中國醫藥指南,2012,10(34):110-111.

[5] 景榮先,張國林.2015年版《中國藥典》微生物限度檢查法潔凈環境及計數培養基修訂分析討論[J].中國衛生產業,2015,12(2):184-185.

[6] 歐洲藥典8.0[S].2014年版.一部.2016:185-194.

[7] 易大為,陳野,潘強.薄膜過濾法在局部給藥制劑微生物限度檢查中的應用[J].中國藥事,2008,22(4):342-345.

Method Development of Microbial Limit Test for Taile （Terazosin Hydrochloride Capsules）

ZHOU Rong, CHEN Xiao-yan, YU Xiao-yan, LIU Wei, YE Hong-fang

(Yangtze River Pharmaceutical Group Jiangsu Pharmaceutical co., Ltd, Taizhou 225321, China)

ObjectiveTo establish a method for microbial limit of Taile (Terazosin Hydrochloride Capsules) 1 mg.Methodwith reference to ChP 2015, the recovery rate of 7 kinds of test bacteria were determined by plate method and membrane filtration method (300 mL).Results In validation tests, recoveries of various types of bacteria were between 0.5 and 2.ConclusionThe method is feasible and effective and can be used for microbial limit test of Taile (Terazosin Hydrochloride Capsules) 1 mg.

Taile (Terazosin Hydrochloride Capsules); Method validation; Microbial limit test

R-33

B

1671-8194（2017）28-0033-03