漢族人HLA-G基因多態性與胃癌相關性研究

劉洪福, 張 蕾, 陽書華, 章新華, 謝榮臻, 鄧龍穎, 鄧 偉

(贛南醫學院第一附屬醫院, 江西 贛州, 341000)

漢族人HLA-G基因多態性與胃癌相關性研究

劉洪福, 張 蕾, 陽書華, 章新華, 謝榮臻, 鄧龍穎, 鄧 偉

(贛南醫學院第一附屬醫院, 江西 贛州, 341000)

目的探討漢族人HLA-G基因多態性與胃癌相關性方法將123例胃癌患者作為研究對象(經過病理學確診為胃癌的患者)，同時選取同期健康體檢患者150例作為對照組。采用聚合酶鏈反應序列特異性引物方法(PCR SSP)對以上患者的HLA-G和HLA-DRB1等位基因亞型進行檢測，觀察2組患者HLA-G和HLA-DRB1等位基因亞型分布頻率。結果與對照組比較，觀察組中HLA-DRB1*03和HLA-DRB1*15檢出率顯著高于對照組(P<0.05), 且RR分別為1.427和2.209; 2組HLA-G*01012分布存在顯著差異(P<0.05), 且RR值為1.75。結論胃癌發生可能與HLA-G*01012、HLA-DRB1-03和HLA-DRB1-15等位基因頻率有較強的相關性，且均為保護性基因。

HLA-G; 基因多態性; 胃癌; 相關性

人類白細胞抗原(HLA)是人類的主要組織相容性復合體(MHC), 位于6號染色體上(6p21.31), 包括一系列緊密連鎖的基因座，與人類的免疫系統功能密切相關。其中部分基因編碼細胞表面抗原，成為每個人的細胞不可混淆的“特征”，是免疫系統區分本身和異體物質的基礎[1]。研究[2]報道, HLA基因多態性與人類腫瘤的發生具有重要的聯系，其中報道最多的是與胃部相關腫瘤。本研究觀察不同亞型的HLA等位基因分布情況，來探討I型(主要是HLA-G基因)和Ⅱ型(DRB1基因)多態性與胃癌的相關性，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將2013年3月—2016年4月在本院就診的123例胃癌患者(經過消化道內鏡和病理學診斷確診)作為觀察組，同時選取同期在本院行健康體檢患者150例作為對照組。觀察組年齡35～52歲，平均年齡(43.2±12.2)歲，男、女分別為72、51例; 對照組年齡28～56歲，平均年齡(44.1±11.9)歲，男、女分別為84、66例。以上研究對象均為漢族，均無血緣關系。2組研究對象在年齡和性別上均無顯著差異(P>0.05)。

1.2 方法

對所有研究對象采用(PCR SSP)方法進行基因多態性分布測定，主要包括DNA提取(采用QIAGEN Immobilon-p濾膜吸附法)、HLA亞型測定和等位基因計算, DNA提取嚴格按照說明書操作步驟進行，提取DNA放到22 ℃恒溫冰箱進行備用。HLA亞型檢測: 將提取制備好的DNA、引物板和D-MIX管在22 ℃～24 ℃進行溶解，將DNA樣本混勻。在D-MIX管中加入3.0 μL TaP酶進行混勻處理，取出15 μL注入陰性對照孔內，在D-MIX加入40 μL DNA樣本，進行混勻處理，在除陰性對照孔外，其他板孔均加入以上混勻液10 μL, 完成后密封試劑板。在輸入PCR程序后采用PE9800型擴增儀進行擴增，將擴增產物轉載到微量瓊脂糖凝膠孔內，恒壓140～150 V, 電泳5 min后在UV下進行電泳結果觀察，進行工作單記錄和分析。通過紫外分析儀對擴增產物進行觀察，記錄陽性區帶，分析檢測基因位點，對于每個座位的基因記錄等位基因個數，其中檢出一個按照純合子記錄[3]。

1.3 統計學方法

采用SPSS 20.0軟件對本次研究涉及到的數據進行整理和統計分析，進行危險指數(RR)計算。計數資料采用[n(%)]進行表示，采用卡方檢驗進行差異性統計,P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 不同HLA-DRB1亞型分布情況

與對照組比較，觀察組中HLA-DRB1*03和HLA-DRB1*15檢出率顯著高于對照組 (P<0.05), 且RR分別為(1.427和2.209), 2個HLA-DRB1亞型對于胃癌的發生有保護性的作用。見表1。

2.2 不同HLA-G亞型分布情況

2組HLA-G*01012分布存在顯著差異(P<0.05), 且RR=1.75為保護性基因。見表2。

表1 不同HLA-DRB1亞型分布情況[n(%)]

與對照組比較, *P<0.05。

表2 不同HLA-DQB1亞型分布情況[n(%)]

與對照組比較, *P<0.05。

3 討 論

胃癌發病率逐年增高，死亡率較高，預后較差，對患者的生活質量造成了嚴重的影響，其主要的臨床診斷方法是通過對血清學的篩查和病理學的活檢確診。有研究[4]顯示人類白細胞抗原(HLA-G)多態性與胃癌的發生具有相關性。HLA復合體作為迄今人類多態性最復雜的遺傳系統，主要是作為疾病易感性的最主要的免疫學遺傳組成部分[5]。對于T細胞的提呈和激活均有重要的作用，參與整個免疫應答的重要的遺傳調控[6]。從分子生物學角度來看，大量等位基因的存在，造就HLA是一個人體多態性的基因復合體, HLA可分為Ⅰ型(HLA-A、HLA-B、HLA-C和HLA-G)和Ⅱ型(DRB1、DQA1、DQB1、DQB1和DPB1)。由于基因的多態性，導致了形成抗原的構想和結合部位不同，免疫應答過程中的提呈效率不同，導致了人類對某些疾病的易感性的不同。人類相關抗原G(HLA-G)作為I型HLA的重要成員之一，最早特異性表達在胎兒的滋養層細胞，在母體免疫耐受中起到重要的作用[7]。同時有報道[8]HLA-G所表達蛋白可與CD94/PKG2A受體結合，抑制細胞毒性溶解作用，在抑制T細胞的激活和腫瘤-宿主過程中都有較大的作用，主要有4種亞型(HLA-G*01012、HLA-G*01011、HLA-G*01013、HLA-G*0103)。HLA的Ⅱ型基因中關于DRB1與疾病關系的報道有DRB1亞型中12型與IgA腎病、類天皰瘡具有較好疾病相關性。岡比亞地區關于HLA的研究[9]顯示, DRB1*13能夠顯著降低肝部感染的發生, DRB1*1與慢性乙肝患者預后較差具有重要的聯系。

本研究結果顯示, DRB1*3和DRB1*15兩種亞型在胃癌患者體內的檢出率和健康對照組的檢出率存在顯著差異(P<0.05), 在危險度計算后認為該兩種亞型為保護作用基因; HLA-G*01012在2組中也有顯著差異(P<0.05), 亞型為保護性基因。有研究表明DRB1*15和幽門螺旋桿菌的感染發生率具有負相關性，幽門螺旋感染的發生是胃炎、胃潰瘍發生的重要原因，同時兩種疾病的進一步發展也是以胃癌為終點。研究[10-13]顯示HLA-G基因在腫瘤細胞免疫逃逸過程中發揮了重要的作用，主要與其能夠調節NK細胞的細胞毒性溶解作用有關，同時有報道HLA-G與細胞因子IL-10具有相關性，同時腫瘤細胞也能夠分泌可溶性的HLA-G, 而該物質具有免疫抑制作用。部分研究[14-16]指出HLA-G在腫瘤細胞的臨床轉移消化道鱗癌的發生具有重要聯系。在腫瘤的發生和發展過程中，免疫因子的存在具有重要作用。免疫狀態的異常存在和對幽門螺旋桿菌感染抑制可能是HLA與胃癌發生的相關性的重要的中間環節。

綜上所述，本研究發現HLA-G的01012亞型和DRB1型的03和15亞型可能與胃癌的發生具有相關性，且均為保護性因素。

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CorrelationbetweenHLA-GgenepolymorphismandgastriccancerinHannationality

LIUHongfu,ZHANGLei,YANGShuhua,ZHANGXinhua,XIERongzhen,DENGLongying,DENGWei

(FirstAffiliatedHospitalofGannanMedicalCollege,Ganzhou,Jiangxi, 341000)

ObjectiveTo explore the correlation between HLA-G gene polymorphism and gastric cancer in Han nationality.MethodsA total of 123 gastric cancer patients in our hospital as the research objects (confirmed as gastric carcinoma by pathological diagnosis). At the same time, a total of 150 healthy controls were selected in our hospital, HLA-G and HLA-DRB1 allele subtypes were detected by polymerase chain reaction sequence specific primers (PCR SSP) detection method, and the allele distribution frequencies of subtypes of HLA-G and HLA-DRB1 were observed and analyzed.ResultsCompared with the control group, the observation group had higher detection rate in HLA-DRB1*03 and HLA-DRB1*15 (P<0.05), and RR were 1.427 and 2.209, respectively. And there were significant differences in HLA-G*01012 distribution in two groups (P<0.05).ConclusionThe incidence of gastric cancer may possibly correlated with HLA-G*01012, HLA-DRB1-03 and HLA-DRB1-15 frequencies, and they are all protective genes.

HLA-G; gene polymorphism; gastric cancer; correlation

R 735.2

A

1672-2353(2017)19-070-03

10.7619/jcmp.201719020

2017-05-12

江西省贛州市指導性科技計劃項目(GZ2015ZSF068)

鄧偉