前列腺大組織切片技術在生物樣本庫中的應用

王麗萍，顧學文，丁雪飛，肖芹，關乃富，黃天寶，徐嘉男，金鑫，潘云龍

?

前列腺大組織切片技術在生物樣本庫中的應用

王麗萍，顧學文，丁雪飛，肖芹，關乃富，黃天寶，徐嘉男，金鑫，潘云龍

225001 揚州大學臨床醫學院/江蘇省蘇北人民醫院生物樣本庫（王麗萍、金鑫、潘云龍），病理科（顧學文、肖芹），泌尿外科（丁雪飛、黃天寶、徐嘉男）；213000 常州市第二人民醫院病理科（關乃富）

生物樣本庫主要是指標準化收集、處理、儲存和應用健康和疾病生物體的生物大分子、細胞、組織和器官等樣本[5]，包括人體器官組織、全血、血漿、血清、生物體液或經處理過的生物樣本（DNA、RNA、蛋白等）以及與這些生物樣本相關的臨床、病理、治療、隨訪、知情同意等資料及其質量控制、信息管理與應用的系統。江蘇省蘇北人民醫院生物樣本庫目前存儲設備可滿足大規?？蒲袠颖敬鎯π枨螅軌驗榍傲邢侔┑木珳手委熖峁娪辛Φ闹С諿6]。

1 材料與方法

1.1 設施設備

江蘇省蘇北人民醫院生物樣本庫占地面積約 400 m2，設有標本取材室、體液處理室、組織處理室、核酸提取室、資料室及低溫存儲室。主要設備–196 ℃液氮罐購自美國 Taylor-wharton 公司；Forma 907 型–86 ℃超低溫冰箱購自美國Thermo 公司；VIP6-E2 型全自動組織脫水機和全自動封片染片機購自日本 Sakura 公司；REM-71 型大組織切片機購自日本 Yamato 公司；NDP20 型數字病理掃描儀購自日本 NanoZoomer 公司；U-COOL 24 h 溫控系統購自青島海爾公司；TFA 型室溫石蠟切片柜購自南京優賽斯生物技術有限公司。

1.2 標本來源

收集江蘇省蘇北人民醫院泌尿外科 2016 – 2017 年間行前列腺癌手術根治性切除術及根治性膀胱切除術后的完整前列腺樣本，進行大組織切片的制作及留存。樣本采集已通過江蘇省蘇北人民醫院倫理委員會審核，每日可采集病例由臨床醫生確定并簽署知情同意書。知情同意書直接在原有手術知情同意書加入“我授權醫生對手術切除的病變器官、組織或其他標本進行處置，包括病理學檢查、細胞學檢查、流行病學檢查、醫療廢物處理和科學研究”，一式三份，由臨床科室、生物樣本庫、患者各執一份留存。

1.3 信息系統

我院采用上海唐頤生物樣本庫智能信息管理系統，可根據臨床資料個性化設置需求模塊。能夠與院內 HIS、LIS、PACS 接口對接，實時獲取臨床資料。二維碼掃描可顯示樣本編碼、采集日期、類型、存儲方式以及存儲位置等。例如，PR-1700720-T-P-01，代表前列腺癌組織，2017 年第 720 號入庫，癌組織，蠟塊存儲，第一復份。

1.4 臨床資料

我院前列腺癌入庫樣本臨床資料已達到標準化、規范化，其中包括：基本信息（姓名、性別、年齡、身份證號、家庭住址、聯系方式等），現病史（尿頻、尿痛、尿急、血尿、血精、排尿無力、尿等待、尿線中斷、排尿困難、腰酸、腰脹、體重減輕），既往史（高血壓病、糖尿病、冠心病、長期服用藥物、其他前列腺疾病等），個人史（吸煙史、飲酒史、職業接觸史、腫瘤家族史等），必備檢驗檢查（慢性病容、淺表淋巴結腫大、雙下肢水腫、腹軟、腹部移動性濁音、腎區叩擊痛、膀胱區壓痛、直腸指診等），確診手段（前列腺穿刺活檢術），輔助檢查（CT、彩超、術中彩超、MRI、骨掃描）等。

1.5 血液標本采集處理流程

符合納入標準的患者均采集血液標本，血液樣本于術前及術后第 1、3、7 天以 8 ml EDTA 抗凝和 5 ml 非抗凝真空采血管采集。詳細填寫樣本采集登記表，室溫靜置 30 min 后，4 ℃低溫離心 10 min，分離血清、血漿，按照每管 300 μl 分裝成 5 份，400 ×低溫離心 30 min，于白膜層部提取白細胞，按照每管 300 μl 分裝成 3 份，所有流程在2 h 內分裝完畢，置于–80 ℃保存。

眾說紛紜之際，稅務部門開始出手。6月3日，國家稅務總局發布公告說，針對近日網上反映有關影視從業人員簽訂“陰陽合同”中的涉稅問題，國家稅務總局高度重視，已責成江蘇等地稅務機關依法開展調查核實。如發現違反稅收法律法規的行為，將嚴格依法處理。

1.6 前列腺穿刺標本采集處理流程

符合納入標準的患者均進行前列腺穿刺標本采集，術中穿刺前列腺左側、右側各一條約 1.5 cm，詳細填寫樣本采集登記表，福爾馬林固定 24 h，石蠟包埋切片染色，室溫保存。

1.7 前列腺大組織標本采集處理流程

標本具體采集計劃由臨床科室、病理科、樣本庫工作人員共同制定并確定一名臨床協調人員。手術前一天臨床醫生確認可采集病例，標本離體后由高年資病理醫生常規切取四周切緣、輸尿管、精囊等組織，并在臨床醫生的指導下根據穿刺位置進行取材。在滿足病理科診斷條件下，樣本庫人員按照冠狀位將組織切片，厚度為 0.4 cm 左右，依次編號置于福爾馬林固定。48 h 后，進行大組織脫水，流程分別為 75% 乙醇，90% 乙醇，95% 乙醇，無水乙醇，二甲苯，石蠟。采用二次包埋法使大組織充分浸蠟（石蠟熔點 60 ~62 ℃為宜），冰凍后切片。切片厚度為 3 μm，充分烤片后進行 HE 染色。

2 結果

截至 2017 年 5 月 20 日，我院成功收集百余例前列腺癌血液樣本（血清、血漿、白細胞）、穿刺樣本（左側、右側）及數十例前列腺癌大組織樣本。前列腺癌大組織切片 HE 染色結果見圖 1。生物樣本庫工作人員定期隨機抽檢進行樣本質量控制，根據樣本核酸提取鑒定結果顯示，DNA 完整性、RNA 純度及總量完全滿足科研需求。

圖 1 隨機抽取前列腺癌大組織切片 HE 染色（A：PR-1700335-N-P-01；B：PR-1700254-T-P-02）

3 討論

前列腺大組織切片技術在前列腺癌的病理診斷和形態學研究方面具有獨特的優勢[7]。前列腺癌的病灶多呈現多病性分布[2]，相比于傳統病理學檢查而言前列腺病理大切片技術可以對前列腺標本進行系統、全面的觀察，能夠直觀地判斷癌灶的數量、分化程度、局部及手術切緣的侵襲情況等[8]，進而更加精確地指導進一步的隨訪和治療。同時，通過大組織切片技術可以研究癌灶的空間分布情況，進而為前列腺癌的局部精準治療提供理論依據[9]。

標準化的生物樣本庫是醫院最大的科研優勢和競爭力體現，是科學研究的重要基礎條件[10]，歐美等發達國家均已建立較為完善的各類組織標本庫，我國是一個多民族的人口大國，我們要充分利用生物樣本資源，結合臨床難題促進其發病機制、分子診斷標記物與藥物靶點的發現等轉化醫學的研究，形成信息化、網絡化管理并有效提升臨床診療水平。生物樣本庫主要作用：①可提供標準化、規范化樣本采集服務[11]。每一例前列腺樣本需臨床醫生、病理醫生和樣本庫人員共同采集，如出現漏診，樣本庫第一時間將標本返還病理科。②可提供標準化、規范化樣本處理服務[12]。樣本庫由專職人員分別負責血液樣本、穿刺樣本及大組織樣本處理。③可提供獨立、封閉的樣本存儲服務。樣本庫人員將前列腺樣本按照樣本類型統一編碼入庫，按序存儲。臨床人員可根據科研計劃向樣本庫提交樣本使用申請，審核通過后樣本庫人員統一安排出庫。④可提供標準化、規范化質量控制服務[13]。樣本庫人員定期對庫內樣本進行質控，保證庫內樣本質量。⑤可提供標準化、規范化臨床信息資料及隨訪資料[14]。所有入庫樣本具有完整的臨床信息及隨訪信息?；颊哔Y源是醫院最重要的戰略資源，對患者進行定期隨訪管理，使患者得到持續的觀察和合理后續治療，在提高醫院服務的同時可以掌握患者第一手資料進行統計分析、積累經驗，有利于科研工作的開展和業務水平的提高，能夠更好地為病人提供服務。

[1] Hodson R. Small organ, big reach. Nature, 2015, 528(7582):S118- S119.

[2] Center MM, Jemal A, Lortet-Tieulent J, et al. International variation in prostate cancer incidence and mortality rates. Eur Urol, 2012, 61(6): 1079-1092.

[3] Dell'Oglio P, Zaffuto E, Boehm K, et al. Long-term survival of patients aged 80 years or older treated with radical prostatectomy for prostate cancer. Eur J Surg Oncol, 2017, 43(8):1581-1588.

[4] Yang J, Zheng AH, Wang J. The technique of large slice slices of radical resection of prostate cancer. Chin J Pathol, 2015, 44(6):408- 409. (in Chinese)

楊珺, 鄭愛華, 王堅. 前列腺癌根治切除標本大切片的制片技術. 中華病理學雜志, 2015, 44(6):408-409.

[5] Aibaidula A, Lu JF, Wu JS, et al. Establishment and maintenance of a standardized glioma tissue bank: Huashan experience. Cell Tissue Bank, 2015, 16(2):271-281.

[6] Wang LP, Zhang XM, Lv F, et al. Construction and management of a biobank of polycystic ovary syndrome. Chin Med Biotechnol, 2016, 11(6):556-558. (in Chinese)

王麗萍, 張曉梅, 呂芳, 等. 多囊卵巢綜合征生物樣本庫建設及管理. 中國醫藥生物技術, 2016, 11(6):556-558.

[7] Chang K, Yang XQ, Wang CF. et al. Comparative analysis of whole mount processing and conventional sampling of radical prostatectomy specimens. China Oncol, 2014, 24(11):824-829. (in Chinese)

常坤, 楊曉群, 王朝夫, 等. 根治性前列腺切除術后病理大切片與常規切片的對比分析. 中國癌癥雜志, 2014, 24(11):824-829.

[8] Bloch BN, Furman-Haran E, Helbich TH, et al. Prostate cancer: accurate determination of extracapsular extension with high-spatial-resolution dynamic contrast-enhanced and T2-weighted MR imaging--initial results. Radiology, 2007, 245(1):176-185.

[9] Luan Y, Liu BD, Ding XF. Research progress of spatial distribution of prostate cancer. J Clin Urol, 2015, 30(12):1154-1156. (in Chinese)

欒陽, 劉彼得, 丁雪飛. 前列腺癌空間分布的研究進展. 臨床泌尿外科雜志, 2015, 30(12):1154-1156.

[10] Zhu S, Shen M, Qiu X, et al. Ethical management guidelines for the Shanghai disease-based biobank Network. Biopreserv Biobank, 2015, 13(1):8-12.

[11] Zhao XH, Qian YM. Biobank--the foundation of personalized medicine. Translational Med J, 2014, 3(2):69-73, 83. (in Chinese)

趙曉航, 錢陽明. 生物樣本庫——個體化醫學的基礎. 轉化醫學雜志, 2014, 3(2):69-73, 83.

[12] Yan J, Cheng SJ, Yu LX, et al. Establishment, maintenance and management of liver tumor biobank. J Hepatopancreatobiliary Surg, 2016, 28(2):113-116. (in Chinese)

嚴錦, 程思杰, 余靈祥, 等. 肝臟腫瘤標本資源庫的建立、維護及管理. 肝膽胰外科雜志, 2016, 28(2):113-116.

[13] Fu L, Zhao H, Zhang XY. Standardized construction of geriatric disease sample database. Chin J Gerontol, 2016, 36(6):1433-1435. (in Chinese)

傅蕾, 趙虎, 張新顏. 老年病樣本庫規范化建設. 中國老年學雜志, 2016, 36(6):1433-1435.

[14] Ji JF. Standardization of cancer biobank in precision medicine era.J Zhejiang Univ (Med Sci), 2016, 45(4):331-334. (in Chinese)

季加孚. 精準醫學時代腫瘤樣本庫的規范化建設. 浙江大學學報(醫學版), 2016, 45(4):331-334.

10.3969/j.issn.1673-713X.2017.05.015

江蘇省衛計委面上科研課題（H201550）；揚州市科技計劃項目（YZ2015068）；江蘇省蘇北人民醫院院基金（yzycms201425）

潘云龍，Email：NJPHWLP@163.com

2017-06-12