IGF-1、PLGF水平與早發型子癇前期的關系研究

楊麗萍 侯俊德 馮海芹 劉彩茹 張麗娜

IGF-1、PLGF水平與早發型子癇前期的關系研究

楊麗萍 侯俊德 馮海芹 劉彩茹 張麗娜

目的探討早發型子癇前期孕婦血清及胎盤組織胰島素樣生長因子-1（IGF-1）和胎盤生長因子（PLGF）水平與早發型子癇前期的關系及臨床意義。方法 選取早發型子癇前期孕婦50例（觀察組），按子癇前期的病情程度診斷標準分為重度組（27例）和輕度組（23例）。選取同期行規范產前檢查并住院分娩的正常晚期孕婦25例作為對照組。采用ELISA法檢測孕婦血清IGF-1、PLGF水平，采用免疫組化SP法檢測胎盤組織IGF-1、PLGF水平。比較觀察組與對照組孕婦IGF-1、PLGF水平，并分析觀察組孕婦IGF-1水平與PLGF水平相關性。結果 觀察組孕婦血清及胎盤組織IGF-1、PLGF水平均低于對照組（均P＜0.05），且重度組孕婦血清及胎盤組織IGF-1、PLGF水平均低于輕度組（均P＜0.05）。觀察組孕婦血清、胎盤組織IGF-1水平與相應的PLGF水平均呈正相關 （r=0.639、0.576,均P＜0.05）。結論 孕婦血清及胎盤組織IGF-1、PLGF水平可作為預測早發型子癇前期發病和疾病嚴重程度的指標。

胰島素樣生長因子-1 胎盤生長因子 早發型子癇前期

子癇前期是妊娠期高血壓疾病發展的嚴重階段，是妊娠期特有的并發癥，依據孕周可分為早發型和晚發型。早發型子癇前期指孕34周前發病[1]，其危害性遠大于晚發型，可引起全身多臟器的損害，是導致孕產婦及圍生兒病死率升高的主要疾病之一[2-3]。早發型子癇前期病因和發病機制迄今尚未明確，故有效預測早發型子癇前期的發病風險并及早干預成為婦產科臨床研究的重點。目前研究認為，胎盤淺著床和血管重鑄障礙是其發生的中心環節[4]，同時妊娠過程中滋養細胞的生物學行為也受細胞因子影響，具有促進血管生成及增加血管通透性作用。現已發現，胰島素樣生長因子-1（IGF-1）與胎盤生長因子（PLGF）能促進胎盤滋養細胞的侵入及遷移，降低血管重鑄障礙，維持血管內皮細胞功能，改善血管通透性及胎盤缺血缺氧狀態。基于此，本研究通過檢測孕婦血清及胎盤組織中IGF-1、PLGF水平，探討兩者與早發型子癇前期的關系及臨床意義，現報道如下。

1 對象和方法

1.1 對象 選取2014年3月至2015年4月在本院產科行規范產前檢查并住院分娩的早發型子癇前期孕婦50例（觀察組），按子癇前期的病情程度診斷標準分為重度組（27例）和輕度組（23例）。選取同期在本院行規范產前檢查并住院分娩的正常晚期孕婦25例作為對照組。3組孕婦均為單胎初產婦，3組孕婦年齡、孕周比較差異均無統計學意義（均P＞0.05），見表1。

表1 3組孕婦年齡、孕周比較

1.2 標本采集及處理 3組孕婦均在清晨空腹抽取肘正中靜脈血5ml，于4℃下以3 000r/min離心15min，分離血漿，取上清液，置于EP管，-20℃低溫冰箱保存待用。3組孕婦均在胎盤娩出后，即刻在無菌狀態下取母面中央近臍帶處避開鈣化區的胎盤組織2份，大小約1.5cm×1.5cm×1.5cm，漂洗干凈后，置入10%中性甲醛溶液固定24h以上，隨后常規石蠟包埋，制成蠟塊切成4μm切片備用。

1.3 血清IGF-1、PLGF水平檢測 采用ELISA法檢測，檢測試劑盒均購自深圳晶美生物公司，先將試劑盒室溫復溫平衡30min；用蒸餾水稀釋成原倍的洗滌液；加入標準品和待測樣本：設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置，在標準品孔中加入標準品50μl；待測樣本孔中先加入待測樣本10μl，再加樣本稀釋液40μl；37℃恒溫箱溫育30min；反復洗板5次；每孔加入酶標工作液50μl；37℃恒溫箱溫育30min；重復洗板5次；每孔加入顯色劑 A液50μl，再加入顯色劑B液50μl，平板混勻器混勻 30s，37℃ 避光顯色 15min；每孔加終止液50μl，終止反應；在終止后 15min內，用450nm波長測量各孔的吸光度值（OD值）；以OD值為縱坐標，相應的標準品濃度為橫坐標，作相應的曲線，樣本的相應濃度可根據其OD值由標準曲線換算出。

1.4 胎盤組織IGF-1、PLGF水平檢測 采用免疫組化法SP檢測，免疫組化染色步驟嚴格按照兔SP檢測試劑盒（北京中杉生物技術公司）說明書進行。將石蠟切片置入60℃烤片機中烘烤20min，PBS充分洗滌后，二甲苯脫蠟，不同濃度乙醇（100%、95%、90%、85%、70%）水化，浸于枸鹽酸鈉緩沖液（pH值為6.0）中，置于沸水（100℃）中孵育20min，室溫20min，3%過氧化氫溶液中室溫下孵育20min，封閉20min，PBS洗滌，分別滴加兔抗人IGF-1多克隆抗體（美國Proteintech公司，批號：10924-2-AP；）和兔抗人PLGF多克隆抗體（美國Proteintech公司，批號：10424-1-AP），濕盒 4℃過夜。PBS 清洗，滴加辣根過氧化物酶標記的羊抗兔IgG抗體（北京中杉生物技術公司，批號：ZDR-5401）室溫孵育30min，DAB試劑盒（北京中杉生物技術公司，批號：PV-9000-D）顯色。以PBS液代替一抗作為陰性對照。蘇木素復染、脫水、透明、封片，鏡下觀察。結果判定：IGF-1及PLGF陽性細胞表現為細胞質內有棕黃色顆粒，每張切片隨機選取5個不重復的高倍視野（×400），用Powersite顯微圖像分析系統計算每高倍視野滋養細胞的平均光密度值，以光密度值作為反映IGF-1、PLGF水平的指標。

1.5 統計學處理 應用SPSS17.0統計軟件；計量資料以表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗；IGF-1水平與相應部位PLGF水平進行直線相關分析；P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3組孕婦血清IGF-1、PLGF水平比較 見表2。

表2 3組孕婦血清IGF-1、PLGF水平比較（μg/L）

由表2可見，3組孕婦血清IGF-1、PLGF水平比較差異均有統計學意義（P＜0.05），觀察組孕婦血清IGF-1、PLGF水平均低于對照組（均P＜0.05），且重度組孕婦血清IGF-1、PLGF水平均低于輕度組（均P＜0.05）。

2.2 3組孕婦胎盤組織IGF-1、PLGF水平比較 見表3。

表3 3組孕婦胎盤組織IGF-1、PLGF水平比較（光密度值）

由表3可見，3組孕婦胎盤組織IGF-1、PLGF水平比較差異均有統計學意義（P＜0.05），觀察組孕婦胎盤組織IGF-1、PLGF水平均低于對照組（均P＜0.05），且重度組孕婦胎盤組織IGF-1、PLGF水平均低于輕度組（均 P＜0.05）。

2.3 觀察組孕婦IGF-1水平與PLGF水平相關性分析觀察組孕婦血清、胎盤組織IGF-1水平與相應的PLGF水平均呈正相關（r=0.639、0.576，均 P＜0.05）。

3 討論

早發型子癇前期是孕產婦及圍生兒死亡最常見的原因之一，也是導致醫源性早產最常見的原因，因母兒雙方的利益難以平衡，臨床處理非常棘手。早發型子癇前期病因與發病機制十分復雜，多系統功能參與其中，至今具體情況不甚明了。

IGF-1是近年來發現的一種調節內皮細胞生長因子，由70個氨基酸組成，由胎盤組織中的合體滋養細胞、細胞滋養細胞及胎膜的平滑絨毛層細胞合成，可調節滋養細胞的侵入、遷移及舒張胎盤血管的作用，與滋養細胞的浸潤密切相關[5]。IGF-1可以使血管平滑肌細胞合成NO增加并增加Na+/K+ATPase活性，從而發揮舒張血管作用，參與血壓的調節[6]。本研究結果顯示，早發型子癇前期輕、重度孕婦血清及胎盤組織IGF-1水平均明顯低于正常孕婦，且伴隨疾病的嚴重程度加重而逐漸降低。這說明血清及胎盤組織IGF-1水平的異常與早發型子癇前期的發病相關，并在一定程度上反映了病情的輕重。母體血清IGF-1水平降低，導致其舒張血管作用下降，血管舒縮障礙，胎盤供血不足、缺血缺氧，導致胎盤局部IGF-1表達減少，使滋養細胞浸潤能力下降，進而引起子宮螺旋小動脈重鑄障礙，促進早發型子癇前期的發生和發展。本研究結果與Rohra等[7]及張海芬等[8]研究結論一致。

PLGF是一種血管內皮生長因子，由合體滋養細胞和細胞滋養細胞分泌，通過與特異性血管內皮生長因子受體相結合而發揮其生物功能，可促進滋養細胞增殖、遷移及誘導血管生成的作用，并參與血管重鑄過程[9]。本研究結果顯示，早發型子癇前期輕、重度孕婦血清及胎盤組織PLGF水平均明顯低于正常孕婦，且隨著病情加重有逐漸下降趨勢。推測早發型子癇前期孕婦可能由于胎盤缺血缺氧，滋養細胞合成分泌PLGF下降，而PLGF生成減少后，使早發型子癇前期孕婦滋養細胞增殖和浸潤能力受到限制，血管生成和形成受阻，導致胎盤淺著床和血管重鑄障礙，使胎盤缺血缺氧進一步加重，引起惡性循環[10-11]，最終導致早發型子癇前期發生和發展。由此說果PLGF與早發型子癇前期的發生、發展密切相關，且其水平的變化對于預測早發型子癇前期的預后也具有重要意義。但也有學者得出的PLGF水平與本研究結果有差異，可能與不同條件下子癇前期的診斷、吸煙、藥物治療、不同公司的檢測試劑盒、孕齡及患者的種族起源等諸多因素有關[12]。

本研究還發現，早發型子癇前期孕婦血清及胎盤組織IGF-1水平與相應的PLGF水平呈正相關。這提示可能是由于IGF-1水平降低而引起胎盤血管舒張功能障礙，導致胎盤組織缺血、缺氧，而胎盤缺血缺氧又進一步抑制合體滋養細胞和細胞滋養細胞PLGF的表達；PLGF釋放的減少又加重了胎盤缺血缺氧，形成惡性循環，最終誘發或加重早發型子癇前期的發生。因此，及時監測孕婦血清及胎盤組織IGF-1、PLGF水平的變化，對早發型子癇前期的早期預防及病情的評估具有重要的臨床意義。

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