巴州部分地區牦牛黃牛新孢子蟲病循環抗體檢測

吉爾格力 ， 許正茂 ， 劉夢麗 ， 喬格拉森 ， 巴音查汗

(1. 新疆巴音郭楞職業技術學院 ， 新疆 庫爾勒 841000 ； 2. 新疆農業大學動物醫學學院 ， 新疆 烏魯木齊 830052)

巴州部分地區牦牛黃牛新孢子蟲病循環抗體檢測

吉爾格力1， 許正茂2， 劉夢麗2， 喬格拉森1， 巴音查汗2

(1. 新疆巴音郭楞職業技術學院 ， 新疆 庫爾勒 841000 ； 2. 新疆農業大學動物醫學學院 ， 新疆 烏魯木齊 830052)

新孢子蟲病(Neosporiasis)是由犬新孢子蟲(Neosporacaninum)寄生在牛、羊、馬、犬、鹿等多種宿主動物細胞內的一種原蟲病。已知犬、郊狼、狐貍等是犬新孢子蟲的終末宿主兼中間宿主；奶牛、黃牛、牦牛、馬、羊、鹿等多種哺乳動物均是其中間宿主[1]。新孢子蟲病對牛的危害尤為嚴重，主要引起母畜流產、死胎和產弱胎、新生胎兒運動神經障礙等疾病，該病可通過垂直傳播和水平傳播。新孢子蟲病已經在世界范圍內廣泛傳播，美國、澳大利亞、新西蘭、比利時、日本、韓國等70多個國家和地區均有發生，我國內蒙古、新疆、青海、河南、河北、吉林、北京等地區都有報道[1～5]。本病一年四季均可發生，引起的流產呈散發性或地方性流行，患病母畜可反復發生流產[6]。目前，尚無有效藥物和疫苗來防治本病，所以，對該病的快速檢測、監控是防控該病的重要手段。近來地方上發現牦牛、黃牛有流產，故本試驗應用由新疆農業大學寄生蟲實驗室已研制的 “新孢子蟲rELISA抗體檢測試劑盒”，對巴州和靜縣巴音布魯克高山牧場的牦牛血清樣品和庫爾勒舍飼黃牛血清樣品進行新孢子蟲抗體rELISA檢測，以便分析其流產病因，為當地養殖牛業的健康發展提供技術支撐。

1 材料與方法

1.1 抗原與標準血清 新孢子蟲病rELISA抗體檢測試劑盒由新疆農業大學寄生蟲實驗室研發；新孢子蟲標準陰、陽性血清由新孢子蟲病IDEXX試劑盒篩選后保存于寄生蟲實驗室。

1.2 樣品來源 采自新疆巴州庫爾勒舍飼黃牛血清樣品200份，和靜縣巴音布魯克高山牧場的牦牛血清440份，共計640份。

采血時均頸靜脈采血(尾靜脈采血)，置于低溫保存箱送回實驗室，普通管擺成斜面，室溫下自然析出血清后，收集血清，-20 ℃保存待檢。

1.3 主要試劑與儀器 嚴格按照試劑盒說明書保存和使用試劑、新孢子蟲病IDEXX試劑盒，購自北京愛德士元亨生物科技有限公司；KHB ST-36型全自動酶標儀，購自上海三科儀器有限公司；SPX-70 L生化培養箱，購自北京宏信恒測科技有限公司。

1.4 檢測方法 參考陳亮等[7]建立的新孢子蟲病rELISA檢測方法，嚴格按照試劑盒說明書操作，對440份牦牛血清和200份黃牛血清進行檢測。從4 ℃冰箱中取出新孢子蟲試劑盒，置于室溫下恢復至室溫，設置2個陽性孔、2個陰性孔和2個空白對照。最后放入酶標儀讀數，在OD450/630 nm波長處測定光吸收值。

1.5 判定方法 以陽性血清孔OD450/630nm平均值和陰性血清孔OD450/630nm平均值為判斷標準。若待檢血清OD值大于陽性血清平均值則可判定為陽性，若待檢血清OD值小于陰性血清平均值則可判定為陰性，介于兩平均值之間則為疑似陽性，需重新檢測，倘若重新檢測仍為疑似陽性則判定為陽性。

2 試驗結果

2.1 天然牧場牦牛新孢子蟲感染情況 天然牧場牦牛新孢子蟲血清抗體陽性率為4.09%(18/440)，0～2歲牦牛抗體陽性率為3.47%；3～6歲牦牛抗體陽性率為4.69%；大于6歲牦牛抗體陽性率為3.61%。各個年齡段新孢子蟲抗體陽性率無顯著差異(P>0.05)。

表1 天然牧場牦牛血清新孢子蟲抗體陽性情況

2.2 舍飼黃牛新孢子蟲感染情況 舍飼黃牛新孢子蟲血清抗體陽性率為13.50%(27/200)，0～2歲黃牛抗體陽性率為14.29%；3～6歲黃牛抗體陽性率為12.32%；大于6歲黃牛抗體陽性率為13.50%。各個年齡段新孢子蟲抗體陽性率無顯著差異(P>0.05)。

表2 地方舍飼黃牛血清新孢子蟲抗體陽性情況

3 討論

巴音布魯克草原海拔約2 500m，典型的高山草原，這里所養殖的草食家畜主要以放牧為主；庫爾勒屬暖溫帶大陸性干旱氣候，海拔約950 m，是周圍圈養了高產奶牛、土種黃牛等。由表1和表2可知，庫爾勒舍飼黃牛新孢子蟲血清抗體陽性率(13.50%)高于和靜縣巴音布魯克鎮牦牛(4.09%)，原因可能是天然牧場放牧牦牛密度低、較分散，不易于本病的傳播；而舍飼黃牛密度高，接觸犬(城里養犬越來越多)等宿主動物的幾率大，犬排出的糞便污染飼草和水源，造成感染率較高。此次感染率明顯高于閆雙等[8]檢測的292份牦牛血清新孢子蟲抗體7.00%(19/292)的陽性率。世界上已有30多個國家報道了新孢子蟲病的流行，但在不同國家和地區以及同一國家和地區的不同牛場新孢子蟲抗體陽性率存在很大差異，同一牛場在不同時間的檢測結果也不同[9]。因此，為了減少母畜流產所導致的損失，要加強該病的檢測、監控，還需進行綜合防治。

[1] 劉群，李博，齊長明，等． 奶牛新孢子蟲病血清學檢測初報[J]. 中國獸醫雜志，2003，39(2)：8-9．

[2] 沈莉萍，劉佩紅，徐鋒，等．上海地區奶牛犬新孢子蟲病血清學抗體檢測[J]．中國獸醫寄生蟲病，2006，14(2)：14-16．

[3] 晁萬鼎，馬利青，李文昌，等．青海省格爾木市乳牛新孢子蟲病的血清學調查[J]．中國獸醫科技，2005，35(12)：1 012-1 014．

[4] 鄒世穎，何倩妮，王小蕾，等．我國北方六省市牛新孢子蟲病血清學調查[J]．中國獸醫雜志，2012，47(2)：54-55．

[5] 李男禮，張守發，李積旭，等．吉林省白山地區牛新孢子蟲病流行病學調查[J．畜牧與獸醫，2015，47(5)：117-118．

[6] 皮泉，陳善忠，洪尼寧．貴州省牛傳染性鼻氣管炎、副結核病和新孢子蟲病血清學調查[J]．動物醫學進展，2014，35(10)：129-132．

[7] 陳亮，閆雙，劉啟生，等．新孢子蟲和弓形蟲ELISA及western blot檢測方法的建立及應用[J]．中國預防獸醫學報，2012，34(7)：558-562．

[8] 閆雙，陳千林，郭慶勇，等．用重組抗原與商品化試劑盒對比檢測牦牛的新孢子蟲與弓形蟲感染[J]．中國動物傳染病學報，2013，21(1)：71-74．

[9] 于晉海，劉群，夏兆飛. 牛新孢子蟲病和弓形蟲病的流行病學調查[J]．中國獸醫科學，2006，36(3)：247-251．

S852.7

B

0529-6005(2017)08-0040-02

2016-09-14

自治區科技成果轉化專項資金項目(201454129)；巴州科學技術研究(星火)計劃項目(201403)

吉爾格力(1967-)，男(蒙古族)，副教授，本科，從事獸醫臨床教學工作，E-mail：448418620@qq.com

巴音查汗，E-mail：bynch@hotmail.com