HPLC法測定民族藥材天仙子中金絲桃苷的含量初探

【摘 要】HPLC是目前醫學、化學、工業和農學領域十分重要的技術手段，在分離分析技術領域具有十分廣泛的應用。其技術手段主要選用高壓輸液系統，通過對混合溶劑或單一溶劑的不同極性進行檢查，從而分析出固定相的色譜柱。本文在對民族藥材天仙子進行測試的過程中，為了探究天仙子中含有金絲桃苷的含量，選用了HPLC法進行測定，通過嚴格的實驗步驟，對天仙子花、葉、莖三部分中金絲桃苷的含量分別進行了測算并得出結論。

【關鍵詞】高壓輸液；固定相色譜柱；分離分析技術；高效液相色譜

在中醫領域，針對胃脘攣痛、喘咳等癥狀，通過辯證，一般會選擇天仙子作為主要的藥材。經過現代醫學分析，天仙子作為茄科植物，其內部含有的莨菪堿、阿托品等成分，具有抑制腺體分泌的作用，能夠使痙攣狀態平滑肌得到遲緩。不過由于含阿托品藥物在臨床當中存在對心臟的抑制作用，因此被定位為有毒。因此需要對天仙子中金絲桃苷的含量進行測定，從而使其作為藥材質量的評價標準。

一、實驗器材選擇

在HPLC高效液相色譜法的實驗當中需要具備高效液相色譜儀、色譜分析平臺、對照樣品、色譜純等器材和用具。為了保證實驗的準確性。原料本文選用了內蒙古地區生長的野生天仙子藥材。高效液相色譜儀則選用由美國著名儀器生產廠家安捷倫公司生產的1100型高效液相色譜儀，該廠家生產的設備儀器在目前市場當中占有率較高，以其系統性能指標卓越、組合方式靈活多變著稱。色譜分析平臺則選用了目前市面上常見的由北京北分天普儀器生產的GC-8600型氣相色譜分析儀，該儀器具有獨創的圖形化中文界面，同時通過大屏幕液晶進行數據顯示，人機互動模式更加先進，在實驗分析過程中，效果突出。對照樣品金絲桃苷由中國藥品生物制品檢定所提供，保證實驗數據準確。色譜純選用甲醇，分析純試劑包含有三乙胺溶液、磷酸等，水選用純化水。

二、實驗方法和過程

（一）實驗條件設定和實驗制備

在實驗開始之前，首先要對色譜條件進行設定。根據試驗需要，設定甲醇-三乙胺溶液-磷酸和水的比例為225：1：1：300，同時色譜條件為5μm的C18柱，規格為4.6mm*20mm。溶液配比流速設定為1mL/min，溫度控制在28℃-32℃之間，進樣量為10-15μL。利用精密稱對金絲桃苷對照樣品進行適量稱取，將稱取樣品加入到容量為0.058mg/mL的甲醇制成溶液當中，成為對照樣品溶液。將原料天仙子進行粉碎，使用百目篩進行過濾，過濾完成之后通過精密稱進行稱取，稱取含量根據溶劑量適當增減，本文為0.1g，將稱取后的天仙子粉末放置到預先準備的具塞錐形瓶當中，并將10mL甲醇倒入，使用超聲儀器進行處理，約一個小時后，停止超聲處理，進行冷卻濾過，并使用量瓶加入甲醇，使其搖勻，獲得原料試品溶劑。

（二）關系考察

關系考察實驗分為專屬性關系實驗考察和線性關系實驗考察。其中，專屬性關系實驗考察首先要使用精密儀器對甲醇金絲桃苷溶液進行吸取，以及甲醇金絲桃苷陰性溶劑、原料試品溶劑等溶劑，各10μL，將其注入到液相色譜儀當中。通過色譜儀進行測試，并由氣相色譜分析儀對分析結果進行顯示。顯示過程中發現，金絲桃苷對照品試劑的色譜峰峰純度極佳，而原料試品溶劑的色譜峰峰值的保留時間與金絲桃苷對照品試劑的時間相同，表明純度優秀。與此同時，甲醇陰性溶劑并未出現吸收現象，證明該方法專屬性較強，不會受到陰性溶劑的干擾。

線性關系實驗中，首先要選用10mL量瓶，通過精密儀器對金絲桃苷對照品溶劑進行1mL的吸取，將其放置入量瓶當中，并通過甲醇進行稀釋，稀釋至量瓶刻度后，將其命名為甲溶液。在甲溶液中進行三次不同量的吸取，分別為1μL、2μL、4μL，同時在原金絲桃苷對照品溶劑中進行四次不同量的吸取，前三次與甲溶液吸取量相同，最后一次吸取8μL，并將溶液注入到高效液相色譜儀中，對峰面積進行測定。并將峰面積和進樣量作為變量進行線性回歸坐標分析，通過線性回歸方程的分析和計算，可以發現，金絲桃苷在0.46μg以內具有十分良好的線性關系。

（三）重復性和回收率實驗

在原料天仙子溶劑的制備過程中，依照本文的實驗目的要求，需要根據天仙子的不同部位分別進行含量測定。因此在制備過程之處，本文就優先將制備粉末分為葉粉末溶劑、花粉末溶劑和莖粉末溶劑等不同溶劑。在實驗過程中，優先選用葉粉末溶劑進行實驗，其他部分實驗步驟與之相同。重復性實驗要將同一批次的原料溶劑制備多份樣品溶劑，利用前文中的線性回歸方法進行含量分析。經測算，在葉粉末溶劑當中，金絲桃苷平均含量約為0.172%。而回收率實驗則需要在多份樣品制備的溶劑當中，分別取用50mg，并利用線性關系實驗相同的方法進行甲溶液制備，通過高效液相色譜儀進行含量測算，同時計算平均回收律。

三、實驗結果分析

本文在對葉粉末溶劑進行實驗測量，結果顯示，多份試劑樣品的回收率平均為103.51%，RSD約為1.71%。在使用同樣的實驗方法對天仙子原料溶劑進行分別測試后可以得出數據結論。其中，天仙子花中金絲桃苷含量約為0.193%，天仙子葉中金絲桃苷含量約為0.172%，天仙子莖中金絲桃苷含量約為0.057%，平均含量約為0.129%。鑒于金絲桃苷屬于黃酮類化合物，是多種生物活性的代表，金絲桃苷在天仙子中不同部位的富集，可以作為藥材質量評判的主要依據。

四、結論

綜上所述，本文通過HPLC法對天仙子藥材中的金絲桃苷含量進行檢測，檢測結果表明，金絲桃苷主要富集于天仙子的花葉莖部，而根部和種子當中，金絲桃苷含量極低，這表明天仙子是一種具有深度開發價值的天然藥材，而其是否具有毒性則主要取決于生物堿的含量和富集部位。

作者簡介：張羽歐（1997-），女，黑龍江省佳木斯市人，本科，研究方向：制藥方向。

參考文獻：

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].一部.北京：中國醫藥科技出版社，2010：41.endprint