豬圓環病毒病的診斷分析

趙海忠，李良華，宋忠旭，孫 華，彭先文，梅書棋

（湖北省農業科學院畜牧獸醫研究所/動物胚胎工程及分子育種湖北省重點實驗室，湖北 武漢 430064）

豬圓環病毒病的診斷分析

趙海忠，李良華，宋忠旭，孫 華，彭先文，梅書棋

（湖北省農業科學院畜牧獸醫研究所/動物胚胎工程及分子育種湖北省重點實驗室，湖北 武漢 430064）

為了建立豬圓環病毒病快速有效診斷方法和綜合防控措施，研究通過臨床剖檢、實驗室檢測等方法對湖北某豬場一例疑似豬圓環病毒病進行了病原學診斷，確診為PCV2感染。PCR擴增產物測序，遺傳進化分析顯示基因型為PCV2e。通過免疫接種、對癥治療、生物安全防范、飼養管理進行綜合防控，可實現豬群的整體健康穩定。

豬圓環病毒2型；診斷分析；PCV2e；綜合防控

豬圓環病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV2）是引起豬圓環病毒相關疾病的主要病原，其臨床特征為病豬體質下降、消瘦、皮膚蒼白、黃疸、腹瀉、呼吸困難、衰弱甚至死亡等。PCV2具有免疫抑制性，主要損害豬的免疫系統，在全國范圍內廣泛流行，給養豬業帶來巨大的經濟損失[1-3]。

2016年7月，湖北省某規模化豬場豬群發生疑似豬圓環病毒感染病例，保育豬群中先后有60多頭陸續發病，死亡15頭。針對性采取了綜合防控措施，有效阻止了疾病的暴發與蔓延，為同行PCV2的防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

選取具有典型臨床癥狀、瀕臨死亡大約克保育豬5頭，采集脾臟、淋巴結組織樣品，按豬號進行1#～5#編號，供實驗室檢測。

1.1.1 主要儀器 離心機（德國eppendorf），PCR擴增儀（EDC-810型），凝膠成像系統（Bio-RAD），電泳儀（DYY-8C型）。

1.1.2 引物及試劑 擴增PCV2的ORF2基因引物，上游引物為 5′-CACGGATATTGTAGTCCTGGT-3′，下游引物為 5′-CGCACCTTCGGATATACTGTC-3′[4]，引物由寶生物工程（大連）有限公司合成。TaKaRa Mini BEST Viral DNARNA Extraction Kit Ver.4.0、Premix Taq（Ex Taq Version 2.0）試劑盒、DL 2 000 DNA Marker均購自寶生物工程（大連）有限公司。Taq DNA polymerase（PCR聚合酶）、DNA快速回收試劑盒為上海生工生物工程產品。陽性對照樣品由動物胚胎工程及分子育種湖北省重點實驗室保存。

1.2 檢測方法

1.2.1 臨床觀察及病理剖檢 了解該規模豬場豬群主要發病死亡情況，觀察臨床癥狀并拍照記錄。選取5頭瀕臨死亡癥狀典型的患病保育豬進行解剖，并詳細記錄各個器官的病理變化。采集每頭豬只脾、淋巴結組織樣品，冷藏保存后送實驗室檢測。

1.2.2 病原學檢測 按DNA提取試劑盒操作規程提取基因組DNA，采用PCR方法擴增PCV2的ORF2基因，待反應結束后取產物用1%的瓊脂糖凝膠電泳，用凝膠成像系統觀察結果。

1.2.3 基因測序分析 對PCV2的ORF2基因陽性條帶明顯的PCR擴增產物4#、5#樣本，送武漢擎科生物技術有限公司測序。從GenBank數據庫中搜集PCV2各基因型主要代表毒株的ORF2基因，繪制PCV2的ORF2基因系統進化樹，比對本試驗毒株序列與其他毒株的遺傳進化關系。

2 結果與分析

2.1 臨床癥狀及病理剖檢結果

發病豬為7～10周齡保育豬，初期出現食欲不振、呼吸困難、體溫40.5℃左右，不愛運動，生長不整齊，少數病例腹瀉；后期病豬表現為漸進性消瘦、被毛蓬亂、皮膚蒼白（圖1），厭食、精神沉郁、常呈趴臥姿勢（圖2），部分病豬在后肢和會陰部皮膚可見有暗紅色不規則的斑點丘疹，最后病豬出現全身多系統衰竭而死亡。解剖后主要病變：腹股溝淋巴結明顯腫大（圖3），腎呈暗紅色、表面有大小不一的灰白色的病灶，脾臟腫大表面有出血性梗死灶，肺水腫暗紅色、各葉紅色肝變期（圖4）。

圖1 漸進性消瘦、被毛蓬亂、皮膚蒼白

圖2 厭食、精神沉郁、呈趴臥姿勢

圖3 腹股溝淋巴結明顯腫大

圖4 肺水腫暗紅色、各葉紅色肝變期

2.2 病原學檢測結果

樣品PCV2病原檢測，擴增PCV2的ORF2基因產物結果見圖5。結果顯示，全部樣品擴增到ORF2基因494 bp的片段，檢出PCV2陽性比例為100%，確診感染PCV2。

圖5 PCV2 PCR擴增產物

2.3 PCV2的ORF2基因測序結果

取4#、5#陽性條帶明顯PCR擴增產物進行測序，分別得到序列92 HBWH.3-2016.7、93 HBWH.4-2016.7，PCV2的ORF2基因系統進化樹分析結果見圖6，樣品中檢測到的圓環病毒2型與圓環病毒2e基因型代表毒株在同一分支，同源性高，證明本場豬感染PCV2e。

圖6 PCV2的ORF2基因系統進化樹

3 討論與小結

3.1 病因分析

了解豬場PCV2原免疫程序：基礎公母豬群每4個月普免1頭份，仔豬14日齡免疫1頭份。豬場嚴格按照免疫程序免疫接種圓環滅活疫苗，但部分保育豬仍感染PCV2引起死亡，分析其原因有三：一是免疫程序不合理，仔豬14日齡時自身免疫系統還未完善，同時母源抗體干擾，抑制了免疫反應[5]；二是PCV2a疫苗免疫效果不理想，本場免疫PCV2a疫苗為全病毒疫苗，增殖滴度較低[6]，但本場以PCV2e基因型為主，盡管PCV2a疫苗株能夠為PCV2e毒株提供有效的交叉保護，但PCV2a與PCV2e毒株之間的抗原性存在一定差異，免疫針對性不強；三是消毒防疫不完善，消毒藥品太單一，消毒方法、程序不科學，消毒不徹底留有死角，未能阻止PCV2在豬場傳播。新疆、廣東、山西等地先后報道PCV2e毒株[7-9]，但湖北該毒株很少見報道。本研究確診檢測到PCV2e毒株，為湖北PCV2的分子流行病學、遺傳變異及防控奠定了基礎。

3.2 綜合防控

3.2.1 免疫接種 PCV2e基因型山西SXJZ分離株與疫苗株LG株（黑龍江）全基因組核苷酸序列同源性較高，為96.7%[9]，選LG株疫苗進行PCV2免疫。PCV2母源抗體干擾仔豬免疫應答，當母源抗體效價達到3log10左右時，幾乎不影響仔豬免疫應答[5]；仔豬免疫后35 d即可獲得較高水平的抗體，加強免疫時可以誘導機體產生更高水平的抗體，能夠有效抵御PCV2的感染。豬場加強PCV2母源抗體監測，制訂科學免疫程序，仔豬首免21日齡1頭份，間隔21 d加強免疫1頭份。

3.2.2 對癥治療 可選擇黃芪多糖注射液（0.2 mL/kg）+頭孢噻呋鈉或氨芐西林鈉（0.025～0.05 g/kg），混合肌注，2次/d，連用3～5 d；同時對機體嚴重脫水、極度虛弱的豬只，靜脈注射氨基酸、葡萄糖等，以補充體能，并配合飲水電解質多維等，以補充體液和調節體內代謝平衡[10]。做好妊娠母豬藥物保健工作，可在產前、產后7 d，每噸飼料分別添加80%支原凈125 g+10%鹽酸多西環素1 000 g+50%復方黃芪多糖250 g+電解質多維1 000 g。

3.2.3 生物安全措施 豬場封閉式管理，嚴格控制外來和本場人員進出；搞好豬舍清潔衛生，發現可疑病豬及時隔離，糞尿和病死豬進行無害化處理；選擇廣譜消毒劑，如過硫酸氫鉀復合物粉、癸甲溴銨、碘制劑，輪換使用，科學徹底消毒，切斷病毒在豬場內的傳播，降低豬場病毒載量。規范種豬引種，隔離觀察1個月，健康豬方可進場[11]。

3.2.4 飼養管理 實施全進全出的飼養方式，降低飼養密度[12]；加強豬群護理，提供優質飼料，豬舍溫度適宜控制在23～25℃，減少環境應激；仔豬斷奶時在原產床上多停留3～5 d，添加藥物保健，盡量避免大小不一仔豬混群，轉群時注射抗應激藥物，例如肌注長效土霉素1 mL，以減輕應激反應和增強抵抗力。

[1] 顧紹鋒，李生飛，曾國仟，等.云南富源縣豬圓環病毒2型免疫抗體水平檢測與分析[J] .養豬，2017（1）：121-122.

[2] 韓慶功，崔艷紅，張智勇.我國豬圓環病毒2型感染的危害[J] .黑龍江畜牧獸醫，2010（11）：84-85.

[3] 束陳宇，許秋陽，段世鵬，等.豬圓環病毒2型江蘇分離株的遺傳進化分析[J] .中國獸醫學報，2014（7）：1047-1052.

[4] 李明波，宋忠旭，董斌科，等.豬繁殖與呼吸綜合征與豬圓環病毒 2型混合感染的診斷分析[J] .豬業科學，2016，33（12）：58-60.

[5] 張志慧.豬圓環病毒疫苗臨床免疫評價技術的研究[D] .北京：中國農業科學院，2014.

[6] 鄧秋紅，鄭杰，劉延亭，等.國內商品化豬圓環病毒疫苗的現狀及展望[J] .中國獸藥雜志，2014，48（2）：67-69.

[7] 翟少倫，岳城，冉多良，等.豬圓環病毒2型新疆株全基因組的滾環擴增與序列分析 [J] .微生物學通報，2010，37（7）：1005-1009.

[8] 胡俊，程松，翟少倫，等.豬圓環病毒2型廣東分離株的遺傳演化分析[J] .畜牧與獸醫，2015，47（7）：5-9.

[9] 孟帆，吳忻，姚敬明，等.豬圓環病毒2型山西株全基因組序列分析[J] .中國畜牧獸醫，2016，43（12）：3127-3134.

[10] 汲全柱.豬圓環病毒病的防控措施[J] .養殖與飼料，2017（1）：75-76.

[11] 徐樂樂，孟相秋，和彥良，等.豬圓環病毒病及其免疫預防[J] .豬業科學，2016，33（11）：136-137.

[12] 彭濤，古金元，胡東方，等.豬圓環病毒2型感染病例的診斷與防治[J] .養豬，2016（6）：100-101.

（編輯：郭玉翠）

研究稱適度飲酒可激發創造力

【英國《每日電訊報》網站8月8日報道】題：科學家說，找不到靈感？喝杯啤酒來激發創造力吧

縱觀歷史，藝術家們常說，酒能激發創造力，大大提高產出。

現在，一項新研究證實，他們這么說并非異想天開。

研究人員給132名受試者布置了一系列需要創造力的任務。結果顯示，男性受試者飲用一品脫（約合0.57升）啤酒，女性受試者飲用350毫升啤酒，就可以提高成績。

在一項單詞聯想測試中，飲酒讓受試者的成績提高了40%左右。研究人員給受試者3個詞，要求他們想出一個能與這3個詞搭配的詞。

奧地利格拉茨大學的研究人員認為，酒能助飲酒者打破條條框框，跳出既定思維，進行更多創造性思考。

研究發現，一杯紅酒或啤酒也許是釋放思維活力的關鍵，而思維活力是完成填字游戲或撰寫幽默的伴郎致辭所必需的。

不過，酒雖然能提高創造力，但它也可能降低“執行能力”，所以很可能會妨礙需要運動技能的藝術活動，例如繪畫和舞蹈。

研究報告的主要作者、奧地利格拉茨大學心理學系教授馬蒂亞斯·貝內德克說，報道逸事趣聞的新聞將過量飲酒與創造力聯系起來；需要創造性解決問題的任務，往往是靠靈光乍現來完成。

他指出：“酒精會削弱執行能力，但能提高聯想測驗的成績。非常適度的飲酒才可能帶來積極效果，而過度飲酒通常會削弱創造力。”

2015年，一家丹麥釀酒廠推出了一款名為“難題解決者”的啤酒，宣稱這種啤酒能精確地提供激發發散性思維所需的酒精量。

這家釀酒廠依據的是美國伊利諾伊大學的研究成果，即想要創造性地解決問題，理想的血液酒精含量略低于法律規定的駕駛員血液酒精含量的上限。

上述最新研究成果刊登在《意識與認知》雜志上。

（轉自 參考消息[N] ，2017-08-10）

S858.285.3

A

1002-1957(2017)05-0108-03

2017-07-31

農業部國家生豬產業技術體系武漢綜合試驗站項目（CARS-36）；十三五創新團隊項目（2016-620-004-001）；湖北省重大科技創新計劃項目（2015ABA046）

趙海忠（1977-），男，湖北隨州人，助理研究員，碩士，主要從事動物疫病防控工作.E-mail：547609336@qq.com

梅書棋，研究員，研究方向為豬遺傳育種.

E-mail：msqlfe@163.com