GPR119調控脂質代謝平衡的研究

陳志平　王嵐楓　胡蓉

摘要：目的 探討GPR119調控脂質代謝平衡。方法 通過過表達或抑制表達GPR119載體分組，構建過表達GPR119載體（增強表達GPR119慢病毒載體），觀察過表達GPR119與SR-B1表達變化、過表達GPR119后APOE表達變化。結果 NC組的SR-B1表達數值為（2.65±0.02）低于GPR119（H）組的SR-B1表達數值為（8.65±0.06）（P<0.05）；NC組的APOE表達數值為（1.26±0.01）低于GPR119（H）組的APOE表達數值為（29.75±1.05）（P<0.05）。結論 GPR119在調節脂質代謝中發揮重要作用，參與對肝臟膽固醇的逆向轉運，對抗動脈粥樣硬化起一定作用。

關鍵詞：GPR119；脂質代謝平衡；調控

中圖分類號：R446.1 文獻標識碼：A 文章編號：1006-1959（2017）20-0187-02

GPR119是一個新的可能參與調節體內脂質平衡的膜受體。GPR119屬于G蛋白偶聯受體A家族，有7個跨膜區，在胞漿內與三個亞單位（α、β、γ）所組成的G蛋白偶聯，主要表達在胰島和胃腸道細胞[1-2]。人源性GPR119的基因定位于Xq26.1，該基因的開放閱讀框架僅有一個外顯子，不含內含子，編碼335個氨基酸。GPR119在治療2型糖尿病及肥胖的作用有了比較深入的研究，并有研究表明GPR119參與脂質代謝。最近研究表明，GPR119與激動劑結合后，通過cAMP信號轉導途徑，促進葡萄糖依賴性胰島素和腸肽激素的分泌[1]，是新一代的治療2型糖尿病和肥胖癥的藥物靶點。基于這一作用，大量文獻報道了GPR119激動劑的研究，并有部分GPR119激動劑應用于臨床。本項目擬在文獻分析和已有的研究工作基礎上，結合國內外研究進展，探討GPR119對膽固醇吸收、轉運、和代謝相關基因和蛋白表達的影響及作用機制，為確立GPR119作為調控脂質平衡和動脈粥樣硬化的防治提供新的治療靶點，提供科學依據，如下文所示。

1資料與方法

1.1一般資料

基于細胞水平觀察GPR119對脂質吸收、轉運和代謝的影響，具體分組如下所示：①空載體轉染THP-1+正常培養基48 h；②空載體轉染THP-1+Dil-oxLDL（50 μg/ml）48 h；③過表達GPR119載體轉染THP-1+Dil-oxLDL（50 μg/ml）48 h；④抑制表達GPR119載體轉染THP-1+Dil-oxLDL（50 μg/ml）48 h。

1.2方法

儀器與試劑：CO2培養箱，超凈工作臺， 7500 Fast熒光定量儀，胎牛血清，Lipofectamine 2000，PrimeScriptRRT Enzyme MixI和SYBRRPremix Ex TaqTMII等基因檢測試劑。通過公司購買過表達GPR119載體，構建過表達GPR119載體（增強表達GPR119慢病毒載體）；THP-1細胞用佛波酯（160 nmol/L，48 h）分化成巨噬細胞，采用構建的GPR119載體、抑制GPR119表達載體分別轉染THP-1巨噬細胞，按公司構建載體轉染說明書進行轉染；檢測轉染后THP-1巨噬細胞中SR-B1、APOE等基因和蛋白的表達。

1.3觀察指標

觀察過表達GPR119后SR-B1、APOE表達變化。

1.4統計學處理

所有數據均以SPSS18.0系統分析，計量資料以 （x±s）表示，計數資料以%表示，P<0.05顯示差異有統計學意義。

2結果

以PCR試驗，定時定量測定過表達GPR119后THP-1巨噬細胞中的SR-B1表達，每個試驗重復三次，將結果以均數標準差表示。通過PCR試驗，定時定量測定過表達GPR119后THP-1巨噬細胞中的APOE表達，每個實驗重復進行三次。NC組、GPR119（H）組的APOE表達、SR-B1表達數值均存在明顯差異（P<0.05），見表1。

3討論

雖然GPR119近年來在脂質代謝中的作用得到重視，但GPR119是否參與調控巨噬細胞膽固醇的攝取、代謝、轉運和流出及相關機制尚不完全清楚。GPR119是否通過一些新的途徑參與調節機體對外源性膽固醇吸收，內源性膽固醇合成，膽固醇逆向轉運等從而影響動脈粥樣硬化形成還未見報道。因此，從細胞水平觀察GPR119對巨噬細胞膽固醇吸收、膽固醇合成、膽固醇水解和膽固醇流出的影響，以及GPR119對脂質代謝相關基因表達的影響成為目前研究重點。清道夫B1（SR-B1）是一個多配體受體，能在HDL與細胞間介導雙向脂質轉運，可以在動脈粥樣硬化斑塊的巨噬細胞中表達，對肝臟膽固醇的逆向轉運和抗動脈粥樣硬化都是必須的。SR-B1敲除鼠可導致快速的冠狀動脈閉塞、心肌梗死、心功能降低和死亡，提示SR-B1對于脂質調節和抗動脈粥樣硬化起重要作用[3]。載脂蛋白E（APOE）是血漿中脂蛋白的重要組成成分，在脂質代謝中起著重要作用。APOE通過不同機制對動脈粥樣硬化起一定抑制作用。卵磷脂膽固醇酰基轉移酶（LCAT）是一種血漿中起催化作用的酶，其作用是將HDL的卵磷脂的C2位不飽和脂肪酸轉移給游離膽固醇，生產溶血卵磷脂和膽固醇酯，在脂質代謝中發揮重要作用[4]。

GPR119是一個新的可能參與調節體內脂質平衡的膜受體，脂質在巨噬細胞源性泡沫細胞聚積是形成動脈粥樣硬化的重要事件，保持體內脂質平衡為動脈粥樣硬化的防治提供新的治療靶點。通過研究GPR119在巨噬細胞脂質代謝平衡中的作用，為動脈粥樣硬化的防治提供新的治療靶點，是本項目的特色與創新之處。通過增強或抑制GPR119的表達，探討GPR119調節體內脂質代謝平衡的新途徑，為GPR119在調節體內脂質代謝過程中重要作用提供新的實驗證據，為脂質代謝紊亂相關性疾病尤其是動脈粥樣硬化的防治提供新的藥物篩選指標。在研究過程中，需要解決兩個方面的問題，一是對能夠有效表達GPR119的質粒進行構建，增強慢病毒的包裝，二是針對特異性GPR119 siRNA干擾片段的構建及轉染[5]。

通過研究可知，過表達GPR119后THP-1巨噬細胞中SR-B1、APOE表達顯著上調[6]。其中，SR-B1是一個多配體受體，能在HDL與細胞間介導雙向脂質轉運，可以在動脈粥樣硬化斑塊的巨噬細胞中表達，對于脂質調節和抗動脈粥樣硬化起重要作用；APOE是血漿中脂蛋白的重要組成成分，在脂質代謝中起著重要作用。APOE通過不同機制對動脈粥樣硬化起一定抑制作用。由此可知，GPR119在調節脂質代謝中發揮重要作用，參與對肝臟膽固醇的逆向轉運，對抗動脈粥樣硬化起一定作用。

參考文獻：

[1]高偉.GPR119受體激動劑GSK1292263對糖尿病的作用及機制探討[J].現代儀器與醫療，2016，22（1）：64-66.

[2]趙立霞，于洋，王志強，等.基于GPR119靶點的抗糖尿病藥物研究進展[J].中國藥物化學雜志，2012（5）：393-402.

[3]張書永.新型GPR119和TGR5激動劑的發現及其對糖尿病作用的研究[D].同濟大學，2014.

[4]李瑩，黃思羅，劉劍鋒.脂筏在G蛋白偶聯受體信號轉導中的調控作用[J].現代生物醫學進展，2009，9（18）：3536-3539.

[5]蔣坤，江程，宋麗君，等.G蛋白偶聯受體119激動劑的研究進展[J].中國新藥雜志，2012（20）：2388-2393.

[6]姜思屹，于萍，李強.G蛋白偶聯受體119激動劑在2型糖尿病治療中的應用[J].中國醫藥，2015，10（10）：77-82.

編輯/李樺endprint