HPLC法測定注射用乳糖酸阿奇霉素的含量

王雷

摘 要：本文采用高校液相測定了注射用乳糖酸阿奇霉素中阿奇霉素的含量，固定相為：安捷倫Cl8（4.6mm×250mm，5um），0.045mol/L磷酸二氫銨-乙腈9∶4（pH=7.1）為流動相，檢測波長為210nm，流速1.0mL·min-1，柱溫：30℃。阿奇霉素在0.5～5.0mg·mL-1范圍內呈良好的線性關系。阿奇霉素的平均回收率為99.3%，RSD為0.81%（n=6）；此方法簡便、準確、重現性好，可用于注射用乳糖酸阿奇霉素中阿奇霉素的含量測定。

關鍵詞：注射用乳糖酸阿奇霉素；阿奇霉素；含量

阿奇霉素（Azithromycin）是一種屬于大環內酯的抗生素，是一種在臨床上使用非常普遍的抗生素。注射用乳糖酸阿奇霉素適應于由沙眼衣原體、淋病雙球菌、人型支原體引起的需首先采取靜脈給藥治療的盆腔炎或由肺炎衣原體、金黃色葡萄球菌、流感嗜血桿菌、卡他摩拉菌、嗜肺軍團菌或肺炎鏈球菌引起的需要首先采取靜脈給藥治療的社區獲得性肺炎。本文采用高校液相測定了注射用乳糖酸阿奇霉素中阿奇霉素的含量。

1 儀器與試藥

FR224CN奧豪斯電子天平（上海書培實驗設備有限公司）；HH-601超級恒溫水浴（江蘇金壇市億通電子有限公司）；屹譜儀器U-1810準雙光束紫外可見分光光度計（屹譜儀器制造（上海）有限公司）；Aurora-F1實驗室自動洗瓶機（杭州喜瓶者生物技術有限公司）；1810-B石英自動雙重蒸餾水器（上海康路儀器設備有限公司）；LC-5520高效液相色譜儀（北京東西分析儀器有限公司）；SCQ-7201E雙頻加熱型超聲波清洗機（上海聲彥超聲波儀器有限公司）；HYYTH-10小型實驗室污水處理設備（濰坊浩宇環保有限公司）；UV2800雙光束紫外可見分光光度計（四川匯巨儀器設備有限公司）。阿奇霉素對照品由中國藥品生物制品檢定所提供。磷酸二氫銨（德州潤昕實驗儀器有限公司）、乙腈（德州潤昕實驗儀器有限公司）、磷酸二氫鉀（德州潤昕實驗儀器有限公司）、磷酸（德州潤昕實驗儀器有限公司）、三乙胺（德州潤昕實驗儀器有限公司）、磷酸（廊坊鵬彩精細化工有限公司）、甲醇（廊坊鵬彩精細化工有限公司）、醋酸（廊坊鵬彩精細化工有限公司）、醋酸銨（廊坊鵬彩精細化工有限公司）。

2 含量測定

2.1 色譜條件

依據查閱文獻及考查的結果，確定色譜條件如下[3-5]。色譜柱為安捷倫Cl8規格為（4.6mm×250mm，5um）；0.045mol/L磷酸二氫銨-乙腈9∶4（pH=7.1）為流動相；檢測波長為210nm。理論板數按阿奇霉素峰計算應不得低于2000。

2.2 供試品溶液的制備

取注射用乳糖酸阿奇霉素，精密稱取，加60毫升流動相超聲處理10分鐘，放冷，濾過，濾液置100ml量瓶中，用流動相分次洗滌容器和殘渣，洗液濾人同一量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.3 對照品溶液的制備

精密稱取阿奇霉素對照品約20mg，用流動相溶解并稀釋成每1ml中含2mg的溶液，作為對照溶液。

2.4 陰性溶液的制備

依照處方取除阿奇霉素外等的輔料及阿奇霉素合成過程中原輔料，按樣品制備工藝制成陰性對照樣品，照供試品溶液的制備方法制成陰性液，依上述方法測定，結果在阿奇霉素出峰處陰性液無色譜峰，結果陰性試驗沒有干擾，表明本方法專屬性良好。

2.5 準曲線的制備

制備濃度為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0mg·mL-1的對照品溶液，分別精密吸取10μL注入HPLC，記錄色譜圖。以峰面積積分值A（μg）為橫坐標，進樣量為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程。試驗表明，阿奇霉素對照品在0.5～5.0mg·mL-1范圍內線性關系良好。

2.6 精密度試驗

依照2.3項下制備對照品溶液，精密吸取阿奇霉素對照品溶液10μL重復進樣6次，測定峰面積積分值，對照品峰面積積分值的RSD為0.67%。結果表明，本實驗精密度良好。

2.7 重現性試驗

稱取同一批的注射用乳糖酸阿奇霉素樣品6份，按測定方法項下的方法制備供試品溶液，測定含量，并計算樣品的RSD值，結果RSD為0.63%，結果表明此方法的重現性良好。

2.8 穩定性試驗

依照2.2項下供試品制備方法制備供試品溶液，分別在0，2，4小時精密吸取供試品溶液注入液相色譜儀，進樣測定，供試品阿奇霉素峰面積積分值的RSD為0.66%。結果表明阿奇霉素至少在4小時內穩定。

2.9 回收率試驗

采用加樣回收試驗，取已知含量的同一批供試品各6份，精密稱定，分精密添加一定量的阿奇霉素對照品，按供試品制備所述方法制備供試品溶液，測定含量（同時測定樣品含量），計算回收率。6次測定的平均回收率為99.3%，RSD為0.81%。

2.10 樣品含量測定

依照上述含量測定方法，測定注射用乳糖酸阿奇霉素三批樣品中阿奇霉素的含量，含量為標示量的100.1%、100.3%、99.8%。

3 討論

分別考察0.045mol/L磷酸二氫銨-乙腈9∶4（pH=7.1），0.02moloL-1磷酸二氫銨溶液-乙腈（90∶10），1%醋酸0.025mol.L-1醋酸銨溶液-乙腈（75∶25），乙腈-0.05mol.L-1磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調節pH值至2.0）（30∶70），乙腈-0.08%磷酸溶液（20：80），0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液-乙腈（95：5），乙腈-0.05mol·L-1磷酸二氫鉀緩沖液（含三乙胺0.5%，磷酸調pH至3.0）（40：60），磷酸鹽緩沖液一甲醇（70：30），0.05mol/L磷酸二氫鈉溶液∶甲醇（95∶5）不同比例的流動相，結果以0.045mol/L磷酸二氫銨-乙腈9∶4（pH=7.1）為流動相，供試品各峰分離效果最好，故選用0.045mol/L磷酸二氫銨-乙腈9∶4（pH=7.1）為流動相。此方法簡便、準確、重現性好，可用于注射用乳糖酸阿奇霉素中阿奇霉素的含量測定。注射用乳糖酸阿奇霉素中阿奇霉素的含量應為標示量的95-105%。

參考文獻

[1]潘熠斌，陳醒言，胡國新.高效液相色譜-電化學檢測法測定人血漿中阿奇霉素的濃度[J].中國臨床藥學雜志，2010（02）.

[2]余劍英，饒均明，陳本美，劉劭剛，鄧富良.高效液相色譜電化學檢測法測定阿奇霉素及相關組分[J].理化檢驗（化學分冊），2009（06）.

[3]李海英，陳悅.高效液相色譜電化學檢測法在硫酸阿奇霉素含量測定和有關物質概況分析上的應用[J].西北藥學雜志，2003（04）.

[4]劉葆林.微生物法和高效液相色譜法測定注射用阿奇霉素含量的比較[J].安徽醫科大學學報，2000（05）.

[5]劉紅梅，李欣，方光娟.反相高效液相色譜法測定乳糖酸阿齊霉素注射劑的含量[J].哈爾濱醫科大學學報，2000（03）.