慢性心衰患者血清致傷血管內皮細胞及黃芪注射液的干預作用

鐘偉+區少蘭+韓蕊+劉裔軍

【摘要】 目的 探討慢性心力衰竭（CHF）患者血清致傷血管內皮細胞（VEC）損傷的病理狀態及黃芪注射液的保護干預機制。方法 32例CHF患者作為CHF組， 同期在本院體檢健康者40例作為正常對照組， 取對數生長期人臍靜脈內皮細胞， 培養接種后分為A、B、C、D、E組五組， 繼續培養24 h

后A～D組加入含15%CHF患者血清的培養基進行損傷造模， E組加入含15%健康人血清的培養基培養， 分別檢測各細胞、因子水平。結果 A～D組經凝膠電泳處理后可得到典型頭尾分布彗星圖像， 尾長、彗星長、尾距與E組比較， 差異均具有統計學意義 （t=6.650、8.332、15.765， P<0.05） ， 表明DNA有損傷。E組處理后所得到的彗星圖像無典型頭尾分布特點， 表明DNA無損傷。A～D組光密度（OD）值低于E組， 循環內皮細胞（CEC）、血管內假血友病因子（vWF）及可溶性血栓調節蛋白（sTM）值均高于E組， 差異均具有統計學意義 （t=33.828、8.040、8.978、6.640， P<0.05）。B、C組OD值高于A組， CEC、vWF及sTM值均低于A組， 差異均具有統計學意義 （P<0.05）。結論 CHF患者血清可致傷血管內皮細胞， 造成DNA損傷， 黃芪注射液對致傷血管內皮細胞有保護和改善作用。

【關鍵詞】 慢性心力衰竭；血管內皮細胞；黃芪注射液；DNA損傷

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.24.117

本次研究選取2013年12月～2016年12月在黃埔中醫院心血管內科病房住院的32例CHF患者， 利用其血清及血管內皮細胞株建立血管內皮細胞損傷的體外模型， 現將結果報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2013年12月～2016年12月在黃埔中醫院心血管內科病房住院的32例CHF患者， 將其歸為CHF組， 其中男18例， 女14例， 平均年齡（69.08±3.22）歲， 平均病程（6.23±2.10）個月。選取同期在本院體檢健康者40例作為正常對照組。

1. 2 方法

1. 2. 1 實驗準備 ①收集兩組血清。②配制條件培養基。③制備黃芪注射液。④內皮細胞傳代培養。

1. 2. 2 實驗操作 取對數生長期人臍靜脈內皮細胞， 培養接種后分為A、B、C、D、E組五組， 繼續培養24 h后A～D組加入含15%CHF患者血清的培養基進行損傷造模， E組加入含15%健康人血清的培養基培養。以上條件培養基作用24 h后， A～C組分別加入10、20、40 ?g/ml的黃芪注射液， D、E組各自加入等量的DMEM培養基， 培養24 h后進行指標的檢測。將條件培養基干預后的A～E組細胞用PBS液洗滌3次， 用培養基制成細胞懸液進行離心處理5 min， 取上清液， 以瓊脂糖PBS凝膠固化處理后浸入細胞裂解液， 高pH電泳緩沖液浸泡30 min， <15℃下電泳30 min， 熒光顯微鏡下觀察DNA損傷情況。以上過程需注意動作輕、細以免造成人為細胞DNA損傷， 此外細胞處理及電泳過程需在暗室內進行避免造成實驗以外損傷。

1. 3 觀察指標 觀察各組血管內皮細胞DNA損傷情況（尾長、彗星長、尾距）， 并在黃芪注射液干預前后分別進行以下檢測：①MTT法檢測細胞活性， 檢測結果用OD值表示；②等密度梯度離心法檢測CEC數；③lurell火箭電泳法測定血管內vWF濃度；④酶聯免疫吸附實驗（ELISA） 法測定sTM濃度。

1. 4 統計學方法 采用SPSS19.0統計學軟件進行統計分析。計量資料以均數±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2. 1 A～D組和E組血管內皮細胞DNA損傷情況 A～D組經凝膠電泳處理后可得到典型頭尾分布彗星圖像， 尾長、彗星長、尾距與E組比較， 差異均具有統計學意義 （t=6.650、8.332、15.765， P<0.05） ， 表明DNA有損傷。E組處理后所得到的彗星圖像無典型頭尾分布特點， 表明DNA無損傷。見表1。

2. 2 A～D組和E組在黃芪注射液干預前相關指標檢測結果比較 A～D組 OD值低于E組， CEC、vWF及sTM值均高于E組， 差異均具有統計學意義 （t=33.828、8.040、8.978、6.640， P<0.05）。見表2。

2. 3 A～C組在黃芪注射液干預后相關指標檢測結果比較 B、C組OD值高于A組， CEC、vWF及sTM值均低于A組， 差異均具有統計學意義 （P<0.05）。見表3。

3 討論

血管內皮細胞損害以內皮依賴性舒縮反應平衡破壞為主要特征， 機體血流動力學受此影響逐漸惡化[1， 2]， 最近研究公認， 評價血管內皮細胞損傷程度的代表性指標有CEC、vWF和sTM。現有藥物在治療CHF方面均存在較大的局限性， 尋找新的高效藥物勢在必行， 西藥研發周期長毒副作用大， 因此研究者將目光轉向中藥， 雖然人們已經意識到黃芪的驚人療效， 但是現有研究多集中在黃芪注射液對分泌功能的影響方面， 有關細胞內部結構變化研究相對較少[3-7]， 因此本次研究通過制作體外血管內皮細胞損傷模型來深入研究黃芪注射液的干預作用。表明CHF患者血清可致傷血管內皮細胞， 造成DNA損傷， 而且黃芪注射液對致傷血管內皮細胞有保護和改善作用， 該項研究必將帶來血管內皮細胞藥物研制的突破和創新發展。

參考文獻

[1] 曹雪梅， 付曉榮， 陳俊芬， 等. 黃芪甲苷對自發性高血壓大鼠血管內皮功能的保護作用. 醫學臨床研究， 2016， 33（6）：1075-1077.

[2] 周春剛， 陸曙， 王書樂， 等. 黃芪與當歸不同配比水提液對ANGⅡ誘導大鼠動脈內皮細胞凋亡的實驗觀察. 中成藥， 2013， 35（10）：2253-2256.

[3] 羅映松， 羅慶昌. 慢性心力衰竭患者合并睡眠呼吸紊亂的發生情況及胰島素、內皮素水平變化. 心血管病防治知識（下半月）， 2013， 5（11）：75-77.

[4] 鐘偉， 韓蕊， 區少蘭， 等. 慢性心衰患者血管內皮細胞體外損傷模型的研究. 中西醫結合心血管病電子雜志， 2014， 2（8）：11.

[5] 彭環慶， 彭志允， 謝維寧， 等. 基于血管內皮細胞損傷模型的丹參酮ⅡA治療慢性心力衰竭的機制研究. 浙江臨床醫學， 2015（3）：349-351.

[6] 于亮， 段紹斌， 居來提， 等. 黃芪注射液對兩次打擊大鼠致多器官功能障礙綜合征中心肌和血管內皮細胞損傷的影響. 中國全科醫學， 2010， 13（9）：967-970.

[7] 段紹斌， 于亮， 劉郁， 等. 黃芪注射液對多臟器功能障礙綜合征模型大鼠血管內皮細胞損傷的影響. 中國現代醫學雜志， 2012， 22（1）：5-8.

[收稿日期：2017-04-18]endprint