葡萄籽活性物質原青花素萃取條件的研究

單衛明++劉冬++胡修偉++余紅++季雅迪++洪素麗

DOI：10.16661/j.cnki.1672-3791.2017.22.250

摘 要：葡萄籽中含抗氧化物質——原花青素，具有防癌、抗衰老、防心血管疾病等作用，考察了溶劑種類、乙醇濃度、提取時間、提取溫度、料液比等因素對原花青素提取量的影響，最終確立最佳提取條件：乙醇為溶劑、提取濃度為70%、提取時間為60 min、提取溫度為50 ℃、料液比1∶7。

關鍵詞：原花青素 提取 葡萄籽

中圖分類號：R285.5 文獻標識碼：A 文章編號：1672-3791（2017）08（a）-0250-02

原花青素結構中具有較多的羥基，具有較大的極性，使其能夠很好的溶解于水、甲醇、丙酮、乙醇等極性溶劑而不溶解于苯、氯 仿、石油醚等非極性物質。較多羥基結構也使其成為良好的氫原子給予體，具有較強的抗氧化性質。

提取原花青素常用的方法有溶劑提取法，微波浸提法，超聲提取法和超臨界CO2萃取[1]法。葡萄籽中的原花青素物質通常以結合態與蛋白質、纖維素結合在一起，一般不易提出，通常選用有機溶劑或水提取，具有斷裂氫鍵的作用。同時由于有機溶劑的滲透性較差，一般不單獨使用，常需要水作為傳質劑。

該研究掌握了葡萄籽中原花青素的溶劑提取工藝，考察了溶劑種類、乙醇濃度、提取時間、提取溫度、料液比等因素對原花青素提取量的影響，最終確立最佳提取條件：乙醇為溶劑、提取濃度為70%、提取時間為60 min、提取溫度為50℃、料液比1∶7。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

葡萄籽粉，化學試劑：甲醇，乙醇，石油醚，丙酮。

1.2 實驗器材

720N紫外分光光度計，分析天平，離心機，水浴鍋。

1.3 試驗方法

（1）提取劑的確定：準確稱取石油醚脫脂后的葡萄籽粉1.0 g四份，分別加入等量（7 mL的相同濃度的甲醇，乙醇，丙酮以及純化水。置于30 ℃水浴鍋中加熱30 min。靜置冷卻至室溫，置于離心機中，4 000 R，20 min，取上清液，用紫外分光光度計測量上清液吸光度（ps：不同的溶劑選用相同的溶劑作為吸光度空白對照）。結果顯示乙醇作為提取劑提取效果最好。

（2）提取濃度的確定：準確稱取石油醚脫脂后的葡萄籽粉1.0 g五份，分別加入等量（7 mL）的40%，50%，60%，70%，80%濃度的乙醇溶液。置于30℃水浴鍋中加熱30 min。靜置冷卻至室溫，置于離心機中，4 000 R，20 min，取上清液，用紫外分光光度計測量上清液吸光度。結果顯示選用70%濃度的乙醇提取效果最好。

（3）提取溫度的確定：準確稱取石油醚脫脂后的葡萄籽粉1.0 g五份，分別加入等量（7 mL）的70%濃度的乙醇溶液。分別置于30℃，40℃，50℃，60℃，70℃水浴鍋中加熱30 min，靜置冷卻至室溫，置于離心機中，4 000R，20 min，取上清液，用紫外分光光度計測量上清液吸光度。結果顯示50℃提取溫度提取效果最好。

（4）提取時間的確定：準確稱取石油醚脫脂后的葡萄籽粉1.0 g五份，分別加入等量（7 mL）的70%濃度的乙醇溶液。置于50℃水浴鍋中分別加熱30 min，40 min，50 min，60 nin，70 min，靜置冷卻至室溫，置于離心機中，4 000 R，20 min，取上清液，用紫外分光光度計測量上清液吸光度。結果顯示60 min提取時間提取效果最好。

（5）料液比的確定：準確稱取石油醚脫脂后的葡萄籽粉1.0 g五份，按1∶5，1∶6，1∶7，1∶8，1∶9的比例與70%濃度的乙醇溶液混合，置于50℃水浴鍋中加熱60 min，靜置冷卻至室溫，置于離心機中，4 000R，20 min，取上清液，用紫外分光光度計測量上清液吸光度（ps：將所有的上清液加70%乙醇稀釋至等體積再測量）。結果顯示1∶7的料液比提取效果最好。

2 實驗結果

2.1 溶劑的確定

原花青素易溶于水，甲醇，乙醇，丙酮，乙酸乙酯等有機溶劑，所以我們選擇了以上五中溶劑，實驗結果見表1。水雖然極性較強，但對細胞的穿透能力較差，故在同等條件下水的提取濃度最低，而甲醇、丙酮雖然也有較高的提取效果，且提取效果優于乙醇，但兩者有毒或沸點較低、易揮發和燃燒等特性不適合作提取劑，最終選取乙醇為最佳提取劑。

2.2 提取濃度的確定

在常用提取溶劑中，乙醇的溶解性及穿透能力較強。在提取原花青素的實驗中原花青素的提取量隨乙醇濃度的增加而增加，當乙醇濃度達到一定程度時，原花青素提取量達到最大值，并呈下降趨勢，見圖1。原因可能是原花青素含有大量羥基，具有一定的極性，根據相似相溶原理，當乙醇濃度增加，溶液極性逐漸接近原花青素極性，原花青素溶解度增加，濃度為70%時最大，選取70%為最佳提取濃度[2]。

2.3 提取溫度的確定

在通常情況下，進行有效成分的提取實驗時，冷提取時產生的雜質少，熱提取時的效率高。根據物理學理論可知，分子運動速度隨提取溫度升高而加快，溶劑在被提取物中的滲透、擴散及有效成分在提取液中的溶解速度隨提取溫度升高而加快，同時細胞膜結構在高溫下遭到破壞，使原花青素更容易從葡萄籽中提取出來。升高溫度會增加原花青素的提取量，繼續增加溫度會使原花青素結構被破壞，提取量降低。圖2可以看出，葡萄籽中原花青素最佳提取溫度為50℃左右，在此溫度后，提取量反而呈現下降趨勢。

2.4 提取時間的確定

根據理論可知，溶劑提取時間越長，提取成分越多，吸光度越大。但根據圖3可知，提取時間不同導致原花青素的提取量不同。原因是在短時間內，原花青素還未有效溶出，所以在一定時間內，其提取量與提取時間成正相關趨勢；時間過長，原花青素受熱結構遭到破壞，所以在最佳提取時間之后兩者成負相關趨勢，見圖3。

2.5 料液比的確定

原花青素的提取量受到料液比的影響，乙醇太少，原花青素未有效提取；乙醇太多，影響下一步的分離提純。由表2可知，最佳料液比為1∶7左右，尤其要注意的是在用紫外分光光度計測量之前要進行稀釋，加70%乙醇稀釋至相同體積，該實驗稀釋到9 mL。

3 結論

該課題研究了原花青素在葡萄籽中的溶劑提取方法，綜合研究了溶劑種類、濃度、溫度、時間、料液比與原花青素提取量的關系，初步得出結論：70%乙醇在料液比1∶7、溫度50℃時提取60 min為最佳提取條件。

參考文獻

[1] 肖湘，俞麗君，邱玉瑩，等.油柑多糖的提取與清除氫自由基的作用研究[J].中國藥學雜志，1998（5）：25-27.

[2] 洪新，唐克.葡萄籽中原花青素提取研究[J].河北化工，2009（4）：24-26.endprint