制作漿膜腔積液標本液基細胞學病理涂片相關技術探討

李孜孜　朱淑琴

【摘要】 漿膜腔積液液基薄層細胞涂片制作是一項需要謹慎的態度和高超技巧的工作， 在實際工作中采用不同的制片方式， 制作出優質的漿膜腔液基細胞學涂片， 可為病理診斷提供支持。

【關鍵詞】 漿膜腔積液；液基薄層細胞制片術；病理

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.23.117

Investigation of related production techniques of serous effusion specimens liquid-based cytology pathology smear LI Zi-zi， ZHU Shu-qin. Fifth Affiliated Hospital of Sun Yat - sen University， Zhuhai 519000， China

【Abstract】 Serous fluid-based thin-layer cell smear production needs careful attitude and superb skills. Different production methods should be adopted in practical work to produce high-quality serous liquid-based cytology smear and provide support for pathological diagnosis.

【Key words】 Serous effusion； Liquid based thin-layer cell preparation； Pathology

液基薄層細胞制片術是一種較先進的細胞學檢查（病理學檢查）， 通過分離提取和細胞的自然沉降， 克服了傳統制片技術存在的材料太厚、細胞重疊、背景模糊和染色不佳等問題[1-4]。而細胞學檢查以標本容易獲得、無創在臨床廣泛的應用。

1 標本采集

從患者中抽取約120 ml標本至細胞保存瓶， 擰緊瓶蓋， 并適當搖晃， 以便保存瓶中的抗凝劑與標本混勻。在瓶壁上備注患者姓名、年齡、取樣日期， 填寫好申請單并及時送檢。

2 方法

2. 1 機器法 ①在50 ml離心管、12 ml離心管及申請單上注上相應編號， 搖勻標本后轉移50 ml樣本至50 ml離心管。②第一次離心600 g、10 min。③棄上清液， 置漩渦混合器上震蕩約30 s， 往50 ml離心管中加入3～4 ml細胞保存液（對細胞起固定作用）， 用軟吸管將標本混勻后轉移至12 ml離心管。④第二次離心600 g、5 min。⑤棄上清液， 置漩渦混合器上震蕩約30 s。⑥將處理好的載玻片放置染色板上并扣上制片染色艙， 在載玻片上注上相應編號。使用LBP SYSTEM液基細胞沉降式自動制片染色系統進行制片及染色， 采用巴氏染色法：染色時間與婦科不同， 一般建議蘇木素染色8～15 s， EA-OG染色35～55 s[5]。⑦拆除制片染色艙， 將完成制片染色的樣片插入無水乙醇缸中的玻片架上進行脫水約30 s。放入透明劑透明約5 min以上， 中性樹膠濕式封片（透明劑有二甲苯、環保脫蠟透明劑TO等）。

備注：血性標本處理方法（第一次離心并棄上清液后血紅細胞≥1 ml）：第一次離心后用軟吸管棄上清液（注意傾倒力度）， 用軟吸管將50 ml離心管中的中間細胞層（即血紅細胞與上清液的交界處， 約1～2 mm高）轉移至12 ml離心管， 往12 ml離心管中加入3～4 ml細胞保存液（對細胞起固定作用）。

2. 2 手工法 ①收集標本：震蕩>30 s（目的：使宮頸刷上的細胞震落到保存液當中；打散黏液和血液）。②編號：把保存瓶中上的編號信息轉移到12 ml離心管上。③用自動樣本轉移機轉移標本：12 ml離心管加入4 ml細胞分離提取液， 把離心管、移液器、保存瓶放到樣本轉移機相對應的位置。設置相關參數， 運行。④第一次離心：程序一， 離心力200 g， 時間2 min（目的：去除雜質）[6， 7]。⑤用真空廢液裝置洗掉上層雜質。⑥第二次離心：程序二， 離心力800 g， 時間10 min（目的：富集細胞）。⑦倒掉上清液， 觀察細胞量的多少。較多者加1～2滴緩沖液， 較少者做標記。⑧在震蕩器上震散細胞團。⑨手工染色操作：a.在手工染色板上放好載玻片， 套上制片染色倉， 寫好編號；b.往制片染色倉中加入少量緩沖液（目的：為了在后面沉降過程中， 使細胞平鋪均勻）；c.用移液槍轉移標本置于制片染色倉當中（轉移量視標本中的細胞量而定）；d. 自然沉降（10 min）——無水乙醇（固定作用）——緩沖液沖洗（2次）——蘇木素染色（60～80 s， 染細胞核）——緩沖液洗（2次）——無水乙醇洗（2次）——EA-OG染色（120～180 s， 染胞漿）——無水乙醇洗（2次）[8]；e.取片， 浸泡在無水乙醇中進行脫水， 浸泡在透明劑中進行透明[常用透明劑：二甲苯（5 min）、TO生物透明劑（10 min）]， 封片晾干。

3 討論

天氣較為炎熱時， 待檢測漿膜腔積液的保存瓶存放時間≤6 h， 如果需要過夜需在冷藏（4℃）。血性標本應先用緩沖液稀釋， 第一次離心并棄上清液后血紅細胞≥1 ml， 第一次離心后用軟吸管棄上清液（注意傾倒力度）， 用軟吸管將50 ml離心管中的中間細胞層（即血紅細胞與上清液的交界處， 約1～2 mm

高）轉移至12 ml離心管， 往12 ml離心管中加入3～4 ml細胞保存液（對細胞起固定作用）[9-11]。

總之， 制作漿膜腔積液液基薄層細胞涂片制作是一項需要謹慎的態度和高超技巧的工作， 需要病理技術人員長期的練習和摸索， 并在實際工作中針對不同送檢采用不同的制片方式， 不斷總結經驗發現問題及解決問題。這不僅體現了醫務者精益求精的態度， 更體現了醫務工作者的責任心。只有通過這樣不斷的努力和鉆研才能制作出精良的病理切片， 為病理診斷提供保障。

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[收稿日期：2017-05-02]endprint