口腔鱗癌組織中PDCD5、Smac的表達及與患者臨床病理參數的關系

潘福勤，劉建輝，蔡春意，王靜，周靜，劉孟媛

(1滄州醫學高等專科學校，河北滄州061001；2滄州市人民醫院)

口腔鱗癌組織中PDCD5、Smac的表達及與患者臨床病理參數的關系

潘福勤1，劉建輝1，蔡春意2，王靜1，周靜1，劉孟媛1

(1滄州醫學高等專科學校，河北滄州061001；2滄州市人民醫院)

目的 觀察口腔鱗癌組織中程序性細胞死亡蛋白5(PDCD5)、第二線粒體源性激活半胱天冬酶(Smac)的表達變化，并探討其與患者臨床病理參數的關系。方法 口腔鱗癌患者55例，取其癌組織及癌旁組織(距癌組織2 cm)55例份。應用免疫組化SP法檢測患者口腔鱗癌組織、癌旁組織 PDCD5、Smac蛋白表達，分析PDCD5、Smac蛋白表達與口腔鱗癌患者臨床病理參數的關系。結果 口腔鱗癌組織中PDCD5、Smac蛋白表達陽性率低于癌旁組織(P均<0.05)。口腔鱗癌組織中PDCD5、Smac蛋白表達陽性率與腫瘤的TNM分期以及淋巴結轉移有關(P均<0.05)，與腫瘤的分化程度無關(P均>0.05);PDCD5與Smac蛋白表達呈正相關(rs=0.542，P<0.05)。結論 口腔鱗癌組織中PDCD5、Smac蛋白表達降低，其二者低表達協同參與口腔鱗癌的發生發展。

口腔鱗癌；程序性細胞死亡蛋白5；第二線粒體源性激活半胱天冬酶；病理參數

鱗癌是我國口腔部常見惡性腫瘤，約占全部口腔部惡性腫瘤的80%以上[1，2]。研究表明，口腔鱗癌的發生是一個從正常黏膜上皮到黏膜白斑再到惡變的復雜過程，期間涉及到多種基因、蛋白和信號通路的異常改變[3]。程序性細胞死亡蛋白5(PDCD5)是我國北京大學人類疾病研究所發現的新型凋亡基因[4]。目前已有研究顯示,PDCD5與多種疾病的發生有關，尤其與惡性腫瘤的發生和發展有密切關系[5]。第二線粒體源性激活半胱天冬酶(Smac)是近年新發現的一種促凋亡基因，主要參與細胞凋亡的相關反應。研究[6，7]發現，在食管癌、鼻咽癌中存在Smac的高表達。為探討口腔鱗癌組織中PDCD5、Smac的表達變化及其與臨床病理參數的關系，筆者進行了相關探討。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇滄州市人民醫院2013年10月～2016年10月收治的口腔鱗癌患者55例，其中男35例、女20例，年齡20～68(41.2±3.4)歲。納入標準：原發于口腔，排除其他部位的轉移或者是復發型腫瘤；入院前未進行相關治療，無其他重要臟器受損現象；臨床資料完善。分化程度：高分化11例、中分化19例、低分化25例；根據國際抗癌聯盟口腔鱗癌TNM分期標準：Ⅰ期8例、Ⅱ期17例、Ⅲ期19例、Ⅳ期11例；存在淋巴結轉移20例、無淋巴結轉移35例。患者均于手術時留取癌組織及距癌組織2 cm的癌旁組織標本，進行石蠟包埋處理，并進行0.5 mm連續切片。

1.2 組織PDCD5、Smac蛋白的檢測 采用免疫組化SP法。將組織進行梯度乙醇脫水，蒸餾水沖洗，高溫高壓抗原修復，PBS緩沖液沖洗，加入生物素一抗，恒溫孵育過夜，加入山羊血清和生物素二抗，PBS緩沖液沖洗，DAB顯色，蘇木精復染，中性樹膠封片。具體的操作嚴格依照說明書實施。設置相應的陰性對照、陽性對照，前者使用 PBS代替一抗，陽性對照使用已知的陽性切片。鼠抗人 PDCD5 單克隆抗體以及鼠抗人Sam單克隆抗體均購自北京博奧森生物技術有限公司。氫體二氨基聯苯胺顯色的相關系統以及SP法的相關試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.3 結果評價 口腔鱗癌組織中PDCD5蛋白表達于細胞質以及細胞核中，Smac定位于細胞核中，表現出棕黃色顆粒狀。癌細胞染色強度計分：細胞不顯色為0分；淡黃色為1 分；棕黃色為2 分；棕褐色為3 分。根據陽性癌細胞數量所占百分比進行計分：癌細胞陰性為0 分，陽性癌細胞≤10%為1 分，11%～50%為2 分，51%～75%為3 分，﹥75%為4分。相應的染色強度和陽性細胞所占百分比乘積大于3 則是免疫反應陽性。

1.4 統計學方法 采用SPSS20.0統計軟件。計數資料以頻次或百分比表示，比較行χ2檢驗。采用Spearman相關分析兩蛋白的關系。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 PDCD5、Smac蛋白在口腔鱗癌組織以及癌旁組織中的表達 口腔鱗癌組織中PDCD5蛋白、Smac蛋白表達陽性率分別為29.09%(16/55)、12.73%(7/55)，低于癌旁組織的表達陽性率[78.18%(43/55)、30.91%17/55)](χ2分別為26.650、5.581，P均<0.05)。

2.2 口腔鱗癌組織PDCD5、Smac蛋白表達與患者臨床病理特征之間的關系 見表1。口腔鱗癌組織中PDCD5、Smac蛋白表達陽性率與腫瘤TNM分期以及淋巴結轉移有關(P均<0.05)。

表1 口腔鱗癌組織PDCD5、Smac蛋白表達與患者臨床病理特征之間的關系(例)

2.3 口腔鱗癌組織中PDCD5、Smac蛋白之間的關系 口腔鱗癌組織組織中PDCD5與Smac蛋白表達存在正相關(rs=0.542，P<0.05)。

3 討論

人體口腔黏膜的上皮從正常狀態發展為鱗癌是一個涉及到多因素、多步驟的復雜過程。已有研究表明，在惡性腫瘤的發生、發展中，細胞凋亡扮演重要角色。細胞凋亡受到抑制將導致細胞生存期延長、細胞惡變[8]。目前研究認為，細胞凋亡主要有三條通路：死亡受體通路、內質網通路和線粒體通路，三條通路可以相互關聯，共同發揮功能[9,10]。PDCD5定位于19q12～q13.1染色體上，最初在白血病細胞中發現[4]。近年研究證實，PDCD5和多種病癥的發生以及發展相關聯，特別是在腫瘤組織中PDCD5水平下降。然而在口腔鱗癌組織中PDCD5的表達情況并無過多文獻報道[11]。Smac是近年發現的一種促凋亡基因，它主要參與凋亡過程中的下游反應，較高表達的Smac能夠加速腫瘤細胞凋亡[12]。作為一種正常的線粒體型蛋白質，一旦人體的細胞發生凋亡，此蛋白就會釋放到胞質中，與Caspase-9相互爭奪凋亡抑制因子的BIR3區域；與此同時，聯合X-連鎖凋亡抑制蛋白的BIR2的相關基序[13]。有研究發現，腎細胞癌中Smac低水平表達能夠加速順鉑介導的細胞凋亡現象[14]。

本研究通過對口腔鱗癌和癌旁組織PDCD5蛋白和Smac蛋白表達情況進行對比，發現口腔鱗癌組織中PDCD5、Smac蛋白表達陽性率低于癌旁組織，表明口腔鱗癌組織中存在PDCD5、Smac蛋白的低表達。PDCD5、Smac蛋白可能通過促進細胞凋亡抑制細胞惡變，而當其表達水平降低時，細胞凋亡受抑，細胞發生惡變的概率增高。進一步分析發現，口腔鱗癌組織中PDCD5、Smac蛋白表達陽性率與腫瘤的TNM分期以及淋巴結轉移有關，與腫瘤的分化程度無關。對兩種蛋白的相關性進行分析發現，PDCD5與Smac蛋白之間存在正相關。提示二者低表達共同參與口腔鱗癌的發生發展。

綜上所述，口腔鱗癌組織中PDCD5、Smac蛋白表達降低，且其表達與腫瘤TNM分期以及淋巴結轉移有關，二者低表達可能共同參與口腔鱗癌的發生與發展。

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河北省科技計劃項目(162777266)。

劉建輝(E-mail: czliujianhui@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.29.020

R739.8

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1002-266X(2017)29-0060-03

2017-05-14)