免疫透射比濁法與散射比濁法檢測血清胱抑素C的方法學比較

劉雯　　龔玲　　曹偉　　俞瑩　　應筱雯　　鮑彩麗　　杜山青

[摘要] 目的 對免疫透射比濁法測定血清胱抑素C的方法學性能行初步評價，并與免疫散射比濁法進行比較。 方法 應用Rohe Modular P全自動生化分析儀與SIEMENS BN ProSpec特定蛋白儀分別對血清胱抑素C進行初步的方法學評價，包括精密度、線性回歸試驗、回收試驗、干擾試驗。 結果 免疫透射比濁法和免疫散射比濁法無論是批內還是批間精密度均符合要求，CV均<4.5%；2種方法從低檢測范圍到高檢測范圍，均有著良好的線性回歸，斜率均接近于1，截距均接近于0，R2均>0.95；免疫透射比濁法與免疫散射比濁法的回收率均>96%；干擾物試驗結果顯示血紅蛋白、三酰甘油及膽紅素均對測定無明顯影響。 結論 免疫透射檢驗的靈敏度較高，檢測范圍廣，與免疫散射試驗的結果基本一致，系統誤差小、抗干擾能力強，且更加快速、實用和便利。

[關鍵詞] 免疫透射比濁法；免疫散射比濁法；血清胱抑素C；方法學；檢驗

[中圖分類號] R446.6 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2017）21-0096-03

Methodological comparison of transmitted immunoturbidimetric assay and scatter turbidimetric assay in the determination of serum cystatin C

LIU Wen GONG Ling CAO Wei YU Ying YING Xiaowen BAO Caili DU Shanqing

Clinical Laboratory， Yangpu Hospital Affiliated to Tongji University， Shanghai 200093， China

[Abstract] Objective To initially evaluate the methodological properties of serum cystatin C by transmitted immunoturbidimetric assay and compare it with scatter turbidimetric assay. Methods Methodological evaluation was carried out for the serum cystatin C by Rohe Modular P automatic biochemical analyzer and SIEMENS BN ProSpec specific protein instrument， including precision， linear regression test， recovery test and interference test. Results Transmitted immunoturbidimetric assay and scatter turbidimetric assay both conformed to the requirements of intra-or inter-batch precision， and CV was <4.5%； the two methods had good linear regression from the low detection range to the high detection range， the slope was both close to 1， the intercept was both close to 0， and R2 was both>0.95； the recovery rates of transmitted immunoturbidimetric assay and scatter turbidimetric assay were both>96%； interferent test results showed that hemoglobin， triglyceride and bilirubin had no significant effects on the determination. Conclusion The sensitivity of immune transmission test is high， the detection range is wide， which is consistent with the result of scatter turbidimetric assay. The system error is small， the anti-interference ability is strong， and it is more rapid， practical and convenient.

[Key words] Transmitted immunoturbidimetric assay； Scatter turbidimetric assay； Serum cystatin C； Methodology； Test

胱抑素C（CysC）又稱為半胱氨酸蛋白酶抑制劑C。近年來，由于高血壓、糖尿病發病率的上升，其作為理想的反映腎小球濾過率的靈敏指標日益受到臨床重視，國外對CysC的臨床應用報道較多，認為其血濃度能夠較準確地反映GFR[1-3]。目前已建立的多種測定方法，包括免疫熒光測定（FIA）、酶聯免疫吸附法（ELISA）、免疫透射比濁法（PETIA）與免疫散射比濁法（PENIA），我們應用Rohe Modular P全自動生化分析儀與SIEMENS BN ProSpec特定蛋白儀對CysC進行了初步的方法學比較[4-5]，現將結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器

免疫透射比濁法使用Rohe Modular P全自動生化分析儀、免疫散射比濁法使用SIEMENS BN ProSpec特定蛋白儀。

1.2 試劑

均為儀器配套試劑，其中BN-P的質控品來源于配套試劑盒；Modular P的質控品來源于上海市臨床檢驗中心。羅氏與西門子的CysC校準品值可溯源至ERM-DA472。

1.3 標本來源

標本均來自2016年1～10月的我院住院患者標本。

1.4 方法

1.4.1 兩種方法的批內精密度測定 將Modular P生化分析儀上的CysC低值、高值質控品及BN ProSpec特定蛋白儀上的CysC低值、高值質控品連續測定20次用于計算批內精密度。

1.4.2 兩種方法的批間精密度測定 將Modular P生化分析儀上的CysC低值、高值質控品以及BN ProSpec特定蛋白儀上的CysC低值、高值質控品每天測定5次，每次間隔>1 h，連續測定4 d用于計算批間精密度。

1.4.3 兩種方法的線性分析 取2種不同方法的低濃度（接近于檢測下限）和高濃度標本，按5/5 L+0/5 H、4/5 L+1/5 H、3/5 L+2/5 H、2/5 L+1/5 H、1/5 L+4/5 H、0/5 L+5/5 H的比例配置樣本，對樣本進行檢測，每個樣本檢測3次，取均值作為最終結果。根據配置關系計算預期樣本量，并以之為橫軸，實際平均值為縱軸制作回歸分析模型。

1.4.4 兩種方法的回收試驗 取混合血清樣本加入等體積、不同濃度的CysC標準液，加入標準液濃度分別為1/2原標準液濃度，計算回收率。

1.4.5 兩種方法的干擾試驗 采用新鮮全血配置成干擾物，分為5.0 g/L、10.0 g/L兩種血紅蛋白濃度；膽紅素干擾物直接使用羅氏Cfas凍干標準品；三酰甘油酯干擾物直接使用脂肪注射液，用0.9%NACL直接配制成濃度為4.7 mmol/L和9.5 mmol/L干擾物，分別用免疫透射比濁法和免疫散射比濁法進行干擾試驗。

1.5 統計學分析

使用SPSS13.0統計軟件包進行數據處理，采用描述性分析，偏態分布計量資料用中位數表示，計數資料用%表示，兩種檢驗方案分別采用CysC線性試驗分析并繪制線形圖，檢驗值α=0.05。

2 結果

2.1 免疫透射比濁法和免疫散射比濁法的批內精密度評價

批內對比顯示，散射比濁法的低值質控品和高值質控品的CV值均略高于透射比濁法，但兩組對比差異無統計學意義（P>0.05）。

2.2 免疫透射比濁法和免疫散射比濁法的批間精密度比較

批間對比顯示，散射比濁法的低值質控品和高值質控品的CV值均略高于透射比濁法，但兩組對比差異無統計學意義（P>0.05）。

2.3 免疫散射比濁法檢測CysC線性試驗分析

散射比濁法的CysC線性試驗R2=0.99197，透射比濁法的CysC線性試驗R2=0.99231

2.4 回收試驗（免疫散射比濁法）

取混合血清標本（CysC濃度為1.12 mg/L）加入0.176 mg/L、0.885 mg/L、1.764 mg/L、濃度的標準液，并加入50%濃度的標準液，平均回收率為97.0%。

2.5 回收試驗（免疫透射比濁法）

取混合血清標本（CysC濃度為0.966 mg/L）加入0.377 mg/L、1.510 mg/L、3.525 mg/L濃度的標準液，并加入50%濃度的標準液，平均回收率為98.2%。

2.6 干擾試驗

3 討論

散射比濁法和透射比濁法的原理有所差異，前者是利用光線被液體粒子折射后的偏轉角度來判斷相關成分的含量，而后者則主要是檢測復合物成分對光線的吸收率來分析成分[6-7]。以往認為免疫透射檢驗雖然具有一定優勢，但存在檢驗范圍狹窄、靈敏度較低的缺陷，主要是由于檢驗復合物并不能完全阻擋光線的通過或復合物過少導致濁度變化難以體現。近年來，隨著檢驗醫學的日趨發展，全自動生化儀目前的技術已非常成熟[8-9]。

以往普遍認為免疫透射比濁法的靈敏度不夠理想，檢測范圍不夠寬，原因是免疫復合物顆粒太小阻擋不了光線的通過；或是免疫復合物的數量太少，其濁度變化對光通量的透過影響不大，特別是在低濃度時更加明顯[10-11]。而在抗原過量情況下，透射比濁法易出現鉤狀效應而導致結果偏低。而在速率散射比濁法檢測時，儀器設計有抗原過量檢測系統，抗原過量時會提示樣本稀釋，從而達到檢測結果的準確性和精密度[12-13]。由此，在比較實驗中，速率散射比濁法在低濃度和高濃度測定中可以得到較為準確的結果。但是，在基層醫療單位，常常沒有條件滿足使用散射比濁法測定特定蛋白，應用免疫透射比濁法檢測就顯得更加重要。其次，隨著檢驗醫學的日趨發展，檢驗質量管理已規范化，實驗室應重視不同檢測方法之間檢測結果是否存在一致性的問題[14]。從本文數據來看，可以看出免疫透射比濁法與免疫散射比濁法的相關性好，R2>0.95。其回歸方程，斜率均接近于1，截距均接近于0；免疫透射比濁法無論是批內精密度還是批間精密度都非常好，CV均<5%。

以往認為，由于免疫透射比濁法所采用的全自動生化分析儀，可聯合應用雙波長檢測、樣本自動稀釋，與樣本空白對照檢測，有助于最小化干擾因素對檢測的影響，并且本研究選擇的試劑廠商，提供了全面詳細的技術參數設置，在使用以上特定蛋白檢測參數時，已經充分運用儀器的各項技術條件，使臨床上常見的干擾物所能引起的干擾降到了最小。而免疫散射比濁法對較大顆粒的CH，嚴重溶血時的Hb干擾等，儀器本身可能就存在不足，在檢測試劑和儀器參數設置等方面，也未充分提高臨床抗干擾物的實踐能力[15]。因此，免疫散射比濁法的抗干擾能力較弱，但還是符合臨床檢測要求。但從本次研究的干擾試驗的結果可知溶血、黃疸、脂血對2種方法的測定干擾均很小。

免疫透射比濁法還有其他一些優點，如儀器投資成本低，不需要另配專用的特定蛋白分析儀；患者收費低；由于可以和生化樣本合并，故可以降低采血管的成本；生化分析儀的檢測速度快，檢驗報告時間短[16]。

因此，與免疫散射比濁法比較，免疫透射比濁法具有優良的精密度，相似的分析靈敏度和檢測范圍，良好的相關性，抗干擾能力小，系統誤差小，且更加實用和方便。

[參考文獻]

[1] Blumentfaal D.Implementation of the federal health Information technology initiative[J]. New England Journal of Medicine，2011，365（25）：2426-2431.

[2] 忻鼎廣，石娟娟，黃亞.血清胱蛋白抑制劑C的初步臨床應用[J].上海醫學檢驗雜志，2001，16：283-284.

[3] 馮仁豐.臨床檢驗質量管理技術基礎[M].第2版.上海：上海科學技術文獻出版社，2007：192.

[4] 王建瓊，牛華，劉莉.透射比濁法和散射比濁法測定血清胱抑素C的方法學評價[J].國際檢驗醫學雜志，2011， 32（3）：340，368.

[5] 彭鳳，應春妹，徐曉萍，等.免疫透射比濁法與免疫散射比濁法檢測特定蛋白的比較研究[J].現代檢驗醫學雜志，2011，26（1）：45-47.

[6] 王治國.臨床檢驗質量控制技術[M].北京：人民衛生出版社，2014.

[7] 費陽，王薇，王治國. 臨床檢驗室內質量控制規則設計新工具-Westgard西格瑪規則[J].現代檢驗醫學雜志，2015，30（1）：149-152.

[8] 肖亞玲，王薇，趙海建，等.用西格瑪性能驗證圖評價中國血糖檢測項目[J].臨床檢驗雜志，2015，33（3）：223-225.

[9] 李紅宇，陶艷兵，汪安武，等. HIV 初篩檢測的室內質控結果分析[J].中國艾滋病性病，2013，19（5）：363-366.

[10] 肖亞玲，王薇，趙海建，等.全國431家臨床實驗室常規生化專業室內質量控制現狀調查與分析[J].臨床檢驗雜志，2015，33（8）：618-621.

[11] 李金明.實時熒光定量PCR 技術[M].北京：人民軍醫出版社，2011：153-156.

[12] Sharma SV，Bell DW，Settleman J，et al.Epidermal growth factor receptor mutations in lung cancer[J].Nat Rev Cancer，2014，14（3）：169-181.

[13] Abdullah MM，Bhat A，Mohamed AK，et al.Gefitinib as first line therapy in Malaysian patients with EGFR mutation-positive non small cell lung cancer： A single center retrospective study[J]. Oncol Lett，2016，11（4）：2757-2762.

[14] Jiang R，Wang X，Li K.Predictive and prognostic value of preoperative serum tumor markers is EGFR mutation specific in resectable non-small-cell lung cancer[J].Oncotraget，2016，182（4）：149-156.

[15] Westgard JO，Westgard SA.Basic quality Management Systems. Chapter 12. Designing SQC procedures[M].Madison WI：Westgard QC，2014.

[16] 沈穎.胱抑素聯合尿微量白蛋白肌酐比值在60例糖尿病早期腎損害中的應用[J].中國醫學創新，2014，11（8）：82-84.

（收稿日期：2017-04-12）