雙氯芬酸鈉注射液對仔豬腹腔注射內毒素(LPS)的臨床解熱藥效試驗

尹洪習 ， 孫傳熙 ， 劉哲林 ， 呂淑榮 ， 萬仁忠

(1.山東農業大學動物科技學院，山東泰安271018; 2. 煙臺綠葉動物保健品有限公司, 山東煙臺264003)

雙氯芬酸鈉注射液對仔豬腹腔注射內毒素(LPS)的臨床解熱藥效試驗

尹洪習1,2， 孫傳熙1， 劉哲林2， 呂淑榮2， 萬仁忠1

(1.山東農業大學動物科技學院，山東泰安271018; 2. 煙臺綠葉動物保健品有限公司, 山東煙臺264003)

雙氯芬酸鈉注射液在人藥領域應用廣泛，在臨床上有很好的解熱、鎮痛效果。本試驗目的是驗證雙氯芬酸鈉注射液在靶動物豬上的解熱效果。結果表明：(1)雙氯芬酸鈉注射液低劑量組在治療豬發熱方面具有一定的臨床效果，但其效果稍差于對乙酰氨基酚組；(2)雙氯芬酸鈉注射液中、高劑量組的臨床解熱綜合效果優于對乙酰氨基酚組；(3)從臨床使用及經濟角度考慮，選用中劑量作為解熱的推薦劑量，即雙氯芬酸鈉臨床肌肉注射給藥劑量為0.05 mL/kg體重。

雙氯芬酸鈉注射液;腹腔;內毒素;解熱;仔豬

獸醫臨床實踐證明，體溫反常是豬生理機能被擾亂的重要癥狀之一，引起體溫升高的因素很多[1]，臨床上分為感染性與非感染性發熱，以感染性發熱最為常見，在豬的許多疾病中，尤其是患某些傳染疾病時，體溫升高比其他癥狀出現得早，合理有效地控制發熱癥狀，是治療某些疾病的重要手段之一。

雙氯芬酸鈉注射液在人藥領域應用廣泛，在臨床上有很好的解熱、鎮痛效果，二十世紀八十年代起就有應用，目前國內有20多家人用藥廠商有正規批準文號。本試驗目的是驗證雙氯芬酸鈉注射液在靶動物豬上的解熱效果。

經查閱相關文獻資料[2-3]，以及前期預試驗，我們采用對2月齡仔豬腹腔注射內毒素(LPS)1μg/kg體重后的發熱模型為研究對象，測定機體內致熱中樞介質PGE2等指標的變化，測定發熱豬體溫及觀察臨床癥狀變化，評價雙氯芬酸鈉注射液對內毒素誘導豬發熱的臨床解熱藥效。

1 試驗材料

1.1 試驗藥品 雙氯芬酸鈉注射液，規格：100 mL: 5 g，批號：121012，由煙臺綠葉動物保健品有限公司提供；對乙酰氨基酚注射液，規格：10 mL, 1 g，批號：130114，江西金康佳生化藥業有限公司。

1.2 試驗試劑 精制大腸桿菌內毒素(LPS)，批號:L2880，美國Sigma公司；豬前列腺素E2(PGE2)酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒，批號：201309，上海邦奕生物科技有限公司；依諾肝素鈉，批號:130506，煙臺東誠生化股份有限公司。

1.3 試驗儀器 WAT-101獸用體溫計；酶標儀，美國Molecular Devices(MD)公司，型號：SpectraMaxplus384等。

1.4 試驗動物 60頭健康長白豬，雌雄各半，2月齡，體重16～18 kg，按常規喂養，自由飲水。

2 試驗方法

2.1 劑量設計 雙氯芬酸鈉注射液臨床藥效試驗中劑量擬定為0.05 mL/kg體重，對照藥物對乙酰氨基酚注射液劑量擬定為0.05 mL/kg體重。

2.2 試驗設計 60頭2月齡仔豬，雌雄各半，稱重、按日齡和體重相近的原則隨機分為6組，以耳號標記，每組10頭，試驗分組及處理情況見表1。

表1 試驗仔豬分組及處理

注：發熱模型的建立：用滅菌生理鹽水將精制大腸桿菌內毒素稀釋成10 μg/mL，仔豬腹腔注射內毒素1 μg/kg體重，攻毒后4 h，攻毒組的平均體溫高于陰性對照組0.5 ℃，即為造模成功[2-3]

2.3 檢測指標樣品采集、處理和測定方法 攻毒前7 d，記錄各試驗仔豬每天的臨床癥狀，攻毒前3 d，每天早、中、晚測定仔豬體溫，取平均值作為仔豬的基礎體溫，除陰性對照組外，各組均1次性腹腔注射內毒素1 μg/kg體重攻毒，建立試驗豬發熱模型[4-6]，4 h后各組體溫均高于陰性對照組0.5 ℃，即造模成功，各組均按劑量肌肉注射給藥，采集攻毒后0、2.5、4.0、4.5、5.0、6.0、12.0、24.0 h時間點的血樣1 mL，采用肝素鈉抗凝劑抗凝，4 500 r/min離心10 min，取上清液，-20 ℃保存備用，采用豬前列腺素PGE2 ELISA試劑盒檢測血漿中的PGE2濃度，并同步測定仔豬體溫，觀察臨床癥狀以此來評價受試藥物的臨床解熱藥效。

2.4 臨床觀察指標 觀察并記錄各組試驗仔豬給藥后的精神狀態，活動情況，以及嘔吐、腹瀉情況，按照表2評分標準綜合打分；記錄每組的采食情況，統計各組間的差異。

2.5 數據處理 數據用Excel軟件進行處理后，采用SPSS17.0統計分析軟件對數據進行One-Way ANOVA分析及LSD法多重比較。

3 結果與分析

3.1 各組動物血漿PGE2的變化 本試驗各組仔豬攻毒后血漿中PGE2的含量見表3，PGE2含量柱形圖見圖1。

表2 臨床癥狀綜合評分標準

圖1 各組仔豬攻毒后血漿中PGE2含量柱形圖

組別時間點/h025445561224陰性對照組510±245082±275067±215102±19a5095±23a5126±27a5105±22a509±17a陽性對照組5123±316895±278678±237825±17b770±21b7422±35b5506±27b510±21a對乙酰氨基酚對照組5076±226904±138617±255306±21c4701±14c4316±22c485±25c495±15a雙氯芬酸鈉低劑量組5083±216835±188595±245895±23d543±27d490±18d501±23d510±19a雙氯芬酸鈉中劑量組5103±146897±228701±195235±23c461±25c428±14c480±23c495±22a雙氯芬酸鈉高劑量組5126±176837±238657±185206±27c4596±15c4268±23c475±17c498±15a

注：每一個時間點內，標著不同字母的兩組數據差異顯著，標著相同字母的兩組數據差異不顯著,下表同

從表3及圖1可以看出：(1)陰性對照組仔豬血漿中PGE2的含量變化基本維持穩定，在腹腔攻毒后12 h內與其余各組均存在顯著性差異(P<0.05)；陽性對照組仔豬血漿中PGE2的含量在攻毒后顯著增高；(2)各給藥組仔豬血漿中PGE2的含量與陽性對照組經統計學分析均存在顯著性差異(P<0.05)；(3)腹腔攻毒4 h后，雙氯芬酸鈉低劑量組血漿中PGE2的含量比對乙酰氨基酚對照組高，二者存在顯著性差異(P<0.05)；(4)腹腔攻毒4 h后，雙氯芬酸鈉中、高劑量組血漿中PGE2的含量與對乙酰氨基酚對照組無顯著性差異(P>0.05)；(5)各給藥組血漿中PGE2的含量在24 h時趨于穩定，與陰性對照組無顯著性差異(P>0.05)。

結果表明，仔豬給藥后對PGE2均具有抑制作用，中、高劑量雙氯芬酸鈉對PGE2的抑制效果與對乙酰氨基酚相當。

3.2 各組仔豬直腸溫度的變化 本試驗各組仔豬攻毒后直腸溫度變化見表4，直腸溫度變化趨勢見圖2。

圖2 各組試驗仔豬攻毒后直腸溫度變化趨勢圖

表4 各組試驗仔豬攻毒后直腸溫度變化 ℃

從表4及圖2可以看出：(1)陰性對照組體溫較為平穩，其余各組體溫均有不同程度的波動，攻毒后陽性對照組體溫波動最大；(2)腹腔注射內毒素后12 h內，各給藥組與陽性對照組體溫經統計學分析有顯著性差異(P<0.05)；(3)雙氯芬酸鈉低劑量組體溫下降較對乙酰氨基酚對照組慢，在攻毒4.5 h前者的平均體溫顯著高于后者(P<0.05)，攻毒5 h后則無顯著性差異；(4)雙氯芬酸鈉中、高劑量組體溫下降較對乙酰氨基酚對照組快，在攻毒 5～6 h，二者存在顯著性差異(P<0.05)，在攻毒5 h(即給藥后1 h)體溫就已經回復到正常基礎體溫；

由此可見，雙氯芬酸鈉中、高劑量組解熱效果優于對乙酰氨基酚組，具有起效快，解熱持續時間長的特點。

3.3 臨床觀察結果 本試驗仔豬臨床綜合癥狀見表5。

表5 各組試驗仔豬攻毒后臨床癥狀綜合評分 ±SD, n=10)

從表5可以看出： (1)除陰性對照組外，其余各組在腹腔注射內毒素后均出現精神低迷、嗜睡、嘔吐、腹瀉等臨床癥狀，耳朵均發紅，產生明顯發熱癥狀，給藥后均有好轉，陽性對照組則持續發熱；(2)各給藥組與陽性對照組綜合評分經統計學分析存在顯著性差異(P<0.05)；(3)雙氯芬酸鈉低劑量組評分高于對乙酰氨基酚對照組，存在顯著性差異(P<0.05)；(4)雙氯芬酸鈉中、高劑量組評分低于對乙酰氨基酚對照組，存在顯著性差異(P<0.05)，從臨床表現來看，雙氯芬酸鈉注射液中、高劑量組要優于對乙酰氨基酚對照組。

4 結論

由豬血漿中PGE2濃度的變化顯示，雙氯芬酸鈉對靶動物豬PGE2濃度的影響與對乙酰氨基酚無顯著性差異，查閱相關國內外文獻[7]，非甾體抗炎藥對豬內毒素(LPS)致熱血漿中PGE2濃度的影響靈敏度不高，但溫度變化與前期進行的家兔致熱藥效試驗一致，雙氯芬酸鈉解熱效果優于對乙酰氨基酚，結合體溫及臨床觀測結果，我們得出以下結論：

(1) 雙氯芬酸鈉注射液低劑量組在治療豬發熱方面具有一定的臨床效果，但其效果稍差于對乙酰氨基酚組；(2) 雙氯芬酸鈉注射液中、高劑量組的臨床解熱綜合效果優于對乙酰氨基酚組，并且雙氯芬酸鈉注射液中、高劑量組的臨床藥效無顯著性差異；(3) 從臨床使用及經濟角度考慮，選用中劑量作為解熱的推薦劑量，即雙氯芬酸鈉臨床肌肉注射給藥劑量為0.05 mL/kg體重。

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Diclofenac Sodium Injection on Piglet Intraperitoneal Injection of Endotoxin (LPS) Clinical Efficacy of Antipyretic Test

YIN Hong-xi1,2, SUN Chuan-xi1, LIU Zhe-lin1, LV Shu-rong1, WAN Ren-zhong1

(1.College of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Agricultural University, Taian 271018, China; 2.Yantai LUYE Animal Health Products Co., Ltd.,Yantai 264003, China)

Diclofenac Sodium Injection is widely used in medicine, and has good antipyretic analgesic effect in clinic. The purpose of this study was to verify the effect of antipyretic in the target animal pigs on Diclofenac Sodium Injection. The results showed that: 1. Diclofenac Sodium Injection low dose group had a clinical effect in the treatment of swine fever, but the effect was slightly worse than the acetaminophen group; 2. Diclofenac Sodium Injection in the high dose group of comprehensive clinical effect of antipyretic was better than that of the acetaminophen group; 3. Considering the clinical use and from the economic point of view, the selection of the recommended dose as antipyretic, namely diclofenac sodium clinical dosage for intramuscular injection was 0.05 ml/kg body weight.

diclofenac sodium injection; intraperitoneal; endotoxin; antipyretic; piglets

WAN Ren-zhong

2017-03-15

煙臺市科技發展計劃(2014NC150)

尹洪習(1972-)，男，碩士，工程師，從事新獸藥研發工作，E-mail: yinhongxi@luye.cn

孫傳熙(1992-)，男，碩士生，研究方向為獸醫藥理毒理學，E-mail: yinhongxi@luye.cn

萬仁忠，E-mail:wrzh63@163.com

S859.79

A

0529-6005(2017)07-0097-04

注：孫傳熙與尹洪習對本文具有同等貢獻