冠心病合并糖尿病患者循環血微小RNA指標及血管內皮功能指標的檢測

江 瓊, 吳佳易, 郭永喆, 胡 榕, 鄭行春

?

冠心病合并糖尿病患者循環血微小RNA指標及血管內皮功能指標的檢測

江 瓊, 吳佳易, 郭永喆, 胡 榕, 鄭行春

目的 探討冠心病合并糖尿病患者循環血微小RNA(miRNA)指標及血管內皮功能指標的檢測價值。 方法 選取70例冠心病合并糖尿病患者為A組、70例單純冠心病患者為B組、70例單純糖尿病患者為C組及70名健康人員為D組，檢測4組研究對象的循環血miRNA指標及血管內皮功能指標，同時比較A及B組中不同分型者的檢測結果，A及C組中不同糖化血紅蛋白水平者的檢測結果。 結果 A組的循環血miRNA-20a及miRNA-133均低于其他3組，B及C組則低于D組。A組的循環血miRNA-126及miRNA-19a高于其他3組，B及C組則均高于D組。A組血管內皮功能相關指標均高于其他3組，B組及C組則均高于D組，且A與B組中不同分型者、A與C組中不同糖化血紅蛋白水平者的檢測結果也存在顯著性差異(P均<0.05)。 結論 冠心病合并糖尿病患者的循環血miRNA指標及血管內皮功能指標均明顯異常，其對于冠心病和糖尿病的診治均有一定的指導意義。

冠心病； 糖尿病； 內皮, 血管； 血液循環

冠心病與糖尿病均是臨床高發病，在我國的發病率呈現持續升高的狀態，對患者的血管功能狀態造成一定的損傷，因此對于此類患者進行血管內皮功能狀態的變化研究價值較高[1]。臨床中的血管內皮功能指標較多，其中較多血液中的檢測指標對于血管的損傷機制具有直接或間接的反應作用，如血管性血友病因子(von Willebrand factor，vWF)、內皮素-1(endothelin-1,ET-1)及一氧化氮(nitrogen monoxide，NO)等均是常見的血管內皮功能反應指標[2]，微小RNA(miRNA)中的較多指標是與心腦血管及組織細胞損傷密切相關的指標，與損傷機制有關，而部分指標則在損傷的過程中起到保護作用機制[3-4]，因此掌握這些指標有助于了解疾病的狀態，對于疾病的診治也有較高的臨床指導意義。本研究擬探討檢測冠心病合并糖尿病患者循環血miRNA指標及血管內皮功能指標的臨床價值。

1 對象與方法

1.1 對象 選取2015年12月-2016年7月就診筆者醫院的70例冠心病合并糖尿病患者為A組，70例單純冠心病患者為B組，70例單純糖尿病患者為C組，70名健康人員為D組。A組中，男性39例，女性31例，年齡(60.71±5.73)歲(44～77歲)，冠心病分型：心絞痛型42例，心肌梗死型28例；糖化血紅蛋白水平：<8.0%者22例，8.0%～9.0%者30例，>9.0%者18例。B組中，男性40例，女性30例，年齡(61.10±5.32)歲(43～78歲)，冠心病分型：心絞痛型41例，心肌梗死型29例。C組中，男性40例，女性30例，年齡(61.29±5.52)歲(41～78歲)，糖化血紅蛋白水平：<8.0%者21例，8.0%～9.0%者31例，>9.0%者18例。D組中，男性38名，女性32名，年齡(61.19±5.47)歲(42～79歲)。4組研究對象的男女比例與年齡均無顯著性差異，A組與B組的冠心病分型構成無顯著性差異，A組與C組的糖化血紅蛋白水平無顯著性差異(P均>0.05)，且4組研究對象均對本研究知情及同意。

1.2 方法 空腹狀態下采集研究對象外周靜脈血5.0 mL，分2份將血標本于采集后30 min內送檢。其中1份血標本采用醫用離心機進行離心處理，取血清部分進行血管內皮功能指標進行檢測，檢測指標為血清vWF、ET-1、血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)及可溶性血管細胞黏附分子-1(soluble vascular adhesion molecule 1，sVCAM-1)。另1份血標本進行循環血miRNA指標的檢測，檢測指標為miRNA-20a，miRNA-133，miRNA-126及miRNA-19a。上述指標分別以酶聯免疫法和實時定量PCR法進行檢測。比較4組研究對象的循環血miRNA指標及血管內皮功能指標，同時比較A組與B組中不同分型者的檢測結果，并比較A組與C組中不同糖化血紅蛋白水平者的檢測結果。

2 結 果

2.1 臨床資料比較 4組資料間基線水平比較，差別無統計學意義(P>0.05)，具有可比性(表1)。

2.2 循環血miRNA指標及血管內皮功能指標比較 A組的循環血miRNA-20a及miRNA-133均低于B，C及D組(P<0.05)，B組及C組則低于D組(P<0.05)；A組的循環血miRNA-126及miRNA-19a高于B，C及D組(P<0.05)，B組及C組則均高于D組(P<0.05)；A組的血管內皮功能相關指標均高于B，C組及D組(P<0.05)，B組及C組則均高于D組(P<0.05，表2)。

表1 4組研究對象一般臨床資料比較

BMI：體質量指數；TG：甘油三酯；TC：總膽固醇；LDL-C：低密度脂蛋白膽固醇；BUN：尿素氮；Cr：肌酐. A組：冠心病合并糖尿病； B組：單純冠心病；C組：單純糖尿病；D組：健康人員.

2.3 A，B組中不同分型冠心病患者的循環血miRNA指標及血管內皮功能指標比較 A，B組中心肌梗死型患者的循環血miRNA-20a及miRNA-133均低于心絞痛型患者(P<0.05)，循環血miRNA-126及miRNA-19a高于心絞痛型患者(P<0.05)，血管內皮功能相關指標均高于心絞痛型患者(P<0.05)，且A組的檢測結果均異于B組患者(P<0.05，表3)。

表2 4組研究對象循環血miRNA指標及血管內皮功能指標比較

vWF：血管性血友病因子； ET-1：內皮素-1； NO：一氧化氮; VEGF：血管內皮生長因子； sVCAM-1：可溶性血管細胞黏附分子-1; miRNA:微小RNA. A組：冠心病合并糖尿病；B組：單純冠心病；C組：單純糖尿病；D組：健康人員. 與B，C組及D組比較，☆：P<0.05；與D組比較，#：P<0.05.

2.4 A，C組中不同糖化血紅蛋白水平患者的循環血miRNA指標及血管內皮功能指標比較 A，C組中糖化血紅蛋白較高患者的循環血miRNA-20a及miRNA-133均低于糖化血紅蛋白較低患者(P<0.05)，循環血miRNA-126及miRNA-19a高于糖化血紅蛋白較低患者(P<0.05)，血管內皮功能相關指標均高于糖化血紅蛋白較低患者(P<0.05)，且A組的檢測結果均異于C組患者(P<0.05，表4)。

表3 A,B組中不同分型冠心病患者的循環血miRNA指標及血管內皮功能指標比較

Tab 3 Comparison of circulating blood microRNA levels and vascular endothelial function indicators in different types of patients with coronary heart disease in Group A and Group B

指 標 A組心肌梗死型 心絞痛型B組心肌梗死型心絞痛型循環血miRNA miRNA-20a0.23±0.02☆#0.40±0.05#0.39±0.06☆0.56±0.09 miRNA-1331.42±0.10☆#2.25±0.22#2.19±0.21☆3.25±0.30 miRNA-1260.36±0.09☆#0.14±0.04#0.19±0.05☆0.07±0.02 miRNA-19a4.63±0.50☆#3.16±0.27#3.45±0.32☆2.50±0.26血管內皮功能指標 vWF/%196.96±20.38☆#147.97±14.53#159.98±16.24☆133.35±14.50 ρET-1/(ng·L-1)96.96±8.20☆#73.23±6.12#81.35±6.56☆66.76±5.35 ρVEGF/(pg·mL-1)210.72±24.63☆#143.23±15.11#153.63±16.72☆124.65±14.20 ρsVCAM-1/(μg·L-1)727.75±67.25☆#473.28±46.78#515.46±55.35☆396.24±36.78

vWF：血管性血友病因子； ET-1：內皮素-1； NO：一氧化氮; VEGF：血管內皮生長因子； sVCAM-1：可溶性血管細胞黏附分子-1. A組：冠心病合并糖尿病；B組：單純冠心病. 與心絞痛型患者比較，☆：P<0.05；與B組比較，#：P<0.05.

表4 A,C組中不同糖化血紅蛋白水平患者的循環血miRNA指標及血管內皮功能指標比較

Tab 4 Comparison of circulating blood microRNA levels and vascular endothelial function indicators in different glycosylated hemoglobin levels of patients in Group A and Group C

指 標 A組>9.0%8.0%～9.0%<8.0%C組>9.0%8.0%～9.0%<8.0%循環血miRNA miRNA-20a0.19±0.02☆&0.33±0.04#&0.49±0.06&0.32±0.05☆0.46±0.08#0.60±0.11 miRNA-1331.28±0.08☆&1.73±0.18#&2.30±0.24&1.76±0.17☆2.60±0.27#3.31±0.32 miRNA-1260.40±0.11☆&0.28±0.06#&0.12±0.03&0.24±0.05☆0.11±0.03#0.05±0.01 miRNA-19a4.82±0.53☆&3.46±0.29#&2.99±0.27&3.81±0.35☆2.69±0.25#2.04±0.22血管內皮功能指標 vWF/%205.45±22.02☆&161.21±15.72#&139.46±13.20&169.89±17.33☆142.65±15.46#126.03±12.65 ρET-1/(ng·L-1)102.57±9.32☆&86.32±7.58#&68.98±5.43&88.46±7.20☆73.13±5.51#60.25±4.98 ρVEGF/(pg·mL-1)223.53±26.45☆&165.75±17.24#&132.53±14.28&166.72±18.72☆135.25±15.17#119.84±12.95 ρsVCAM-1/(μg·L-1)805.95±71.35☆&599.64±52.80#&432.53±43.16&546.73±57.28☆415.65±43.43#340.28±31.70

vWF：血管性血友病因子； ET-1：內皮素-1； NO：一氧化氮; VEGF：血管內皮生長因子； sVCAM-1：可溶性血管細胞黏附分子-1. A組：冠心病合并糖尿病； C組：單純糖尿病. 與糖化血紅蛋白<8.0%及8.0%～9.0%者比較，☆：P<0.05；與糖化血紅蛋白<8.0%者比較，#：P<0.05；與C組比較，&：P<0.05.

3 討 論

近年來,臨床中關于各類基礎疾病的研究持續增多，而冠心病與糖尿病作為常見的慢性基礎疾病，對患者造成的危害極大[5]。隨著生活水平的提高和生活方式的改變，糖尿病的發病率逐年增高，第20屆國際糖尿病聯盟會議指出,2011年全球糖尿病患者已達3.66億，估計到2030年將上升到5.52億[6]。目前臨床上已明確視糖尿病為冠心病的等危癥，甚至認為糖尿病是進一步誘發心血管疾病的關鍵因子。

miRNA是一類由內源性基因編碼的單鏈小RNA分子，結構上高度保守，不編碼蛋白質，參與了轉錄后水平的基因調節。miRNA具有明顯的組織特異性，在一些疾病中，miRNA的表達譜改變具有明顯的特征，使miRNA可能成為疾病診斷的生物學標記物或是藥物治療的靶點。miRNA與心血管系統的生長發育關系密切，同時在內皮功能障礙、動脈粥樣硬化、心功能衰竭、心肌肥厚、心肌纖維化以及心律失常等疾病的病理生理過程中發揮重要作用[7-9]。miRNA作為與多類心腦血管疾病密切相關的指標，其在冠心病中的變化研究雖可見，但是細致程度欠缺的同時，與此方面的研究差異也不同程度存在[10-11]。miRNA-20a是血管病變過程中的調控因子，對于新生血管的生成及側枝循環的建立發揮積極的臨床意義，因此對于冠心病有積極的臨床反應價值，而糖尿病對于血管尤其是血管內皮狀態等的影響也極為不良，因此此類miRNA指標的檢測意義也較高[12-13]。miRNA-133作為心肌及骨骼肌組成的重要指標，其對于血管增殖等方面均有調節作用，當其表達水平降低時，說明心臟功能下降，因此在冠心病等心臟疾病患者中的檢測意義較高。miRNA-126則對于心腦血管系統的細胞凋亡有積極的臨床意義，且對于凋亡相關蛋白的表達有較大影響[14-17]。miRNA-19a則對于血管增殖疾病有積極的臨床檢測價值，對于血管的平滑肌細胞也有一定的反應意義[18-19]。

冠心病最重要的病理生理基礎是冠狀動脈粥樣硬化，血管內皮功能損傷是動脈粥樣硬化的始動環節，也是糖尿病血管病變的病理生理基礎。血管內皮不僅是血管壁和血液之間的物理屏障，而且具有重要內分泌及旁分泌功能，通過合成、分泌舒血管和縮血管物質來調節、維持并保護血管結構和功能完整性。如果血管內皮受損，功能失調，將會導致血管舒縮功能障礙，內皮抗凝、抗血小板、抗纖溶功能不能維持，并分泌異常的細胞因子改變內皮通透性、促進血小板聚集、白細胞黏附、炎癥反應、內皮結構性損害及內皮細胞脫落修復等而促發動脈硬化形成。高血糖、高血脂、高血壓及其他多方面因素均可對血管內皮功能造成較大的影響，因此血管內皮功能相關指標的變化研究極為必要[20-21]。

本研究中，筆者就冠心病合并糖尿病患者循環血miRNA指標及血管內皮功能指標的檢測價值進行研究與觀察，結果顯示，冠心病合并糖尿病患者循環血miRNA-20a及miRNA-133相對更低，循環血miRNA-126、miRNA-19a及血管內皮功能指標相對更高，且單純冠心病與單純糖尿病患者則明顯異于健康人員，且兩病并發患者中心肌梗死型及心絞痛型患者的檢測結果明顯異于單純冠心病中同型患者，而兩病并發患者中不同糖化血紅蛋白水平者明顯異于單純糖尿病中同水平糖化血紅蛋白者，說明上述指標對于兩病并發具有積極的指導意義，同時對于冠心病分型和糖尿病嚴重程度也有積極的臨床檢測價值[22-23]。

[1] 蔡新霞,張 濱,王 玲,等. 冠心舒治療冠心病心絞痛及對血管內皮功能影響的研究[J]. 湖北中醫藥大學學報,2014,16(3):29-32.

[2] 周蕓羽,吳 敏,葉張章,等. 丹參酮ⅡA磺酸鈉聯合氯吡格雷治療冠心病心絞痛療效及對血管內皮功能的影響[J]. 現代中西醫結合雜志,2016,25(7):705-707.

[3] 王 慧,溫 晏,閆 麗,等. 微小 RNA-126在糖尿病視網膜病變患者血漿中的表達及作用機制研究[J]. 中國基層醫藥,2016,23(14):2134-2137.

[4] 李 琳,周倩倩,黃 力. 冠心病不同階段患者血清對人臍靜脈血管內皮細胞促增殖作用的實驗研究[J]. 北京中醫藥,2014,33(4):296-298.

[5] Khanaghaei M, Tourkianvalashani F, Hekmatimoghaddam S,etal. Circulating miR-126 and miR-499 reflect progression of cardiovascular disease; correlations with uric acid and ejection fraction[J].HeartInternational,2016,11(1):1-9.

[6] Whiting D R, Guariguata L, Weil C,etal. IDF diabetes atlas: global estimates of the prevalence of diabetes for 2011 and 2030[J].DiabetesResClinPract,2011,94(3):311-321.

[7] van Rooij E, Sutherland L B, Liu N,etal. A signature pattern of stress-responsive microRNAs that can evoke cardiac hypertrophy and heart failure[J].ProcNatlAcadSciUSA,2006,103(48):18255-18260.

[8] Small E M, Olson E N. Pervasive roles of microRNAs in cardiovascular biology[J].Nature,2011,469(7330):336-342.

[9] 寇 恂,曾春雨. 微小RNA在心血管疾病發生中的作用研究進展[J]. 中華高血壓雜志,2011,19(8):773-778.

[10] Zhang Y, Tang W, Peng L,etal. Identification and validation of microRNAs as endogenous controls for quantitative polymerase chain reaction in plasma for stable coronary artery disease[J].CardiologyJ,2016,23(6):694-703.

[11] 方石虎,毛 蓓,李志梁. 冠心病患者全血中miR-126表達的臨床意義[J]. 臨床和實驗醫學雜志,2014(11):869-872.

[12] 潘 亮,邱春光. 血管內皮功能障礙在冠心病發生發展中的作用[J]. 中國分子心臟病學雜志,2014,14(5):1106-1108.

[13] Du Y, Chen J, Chen M H,etal. Relationship of lipid and lipoprotein ratios with coronary severity in patients with new on-set coronary artery disease complicated with type 2 diabetics[J].JGeriatrCardiol,2016,13(8):685-692.

[14] Dutta B. Glycated hemoglobin (HbA1c) correlation with severity of coronary artery disease in non-diabetic patients-A hospital based study from north-eastern India[J].JClinicalAndDiagnosticResearch,2016,10(9):20-23.

[15] 王 朋,楊明會,李紹旦,等. 冠心病心絞痛寒凝血瘀證大鼠血ET-1、NO、TXB_2、6-Keto-PGF_(1α)水平的變化[J]. 遼寧中醫雜志,2014,41(5):1049-1050.

[16] 楊 杰,張邢煒,鄧亞萍,等. 麝香通心滴丸對冠心病患者血管內皮功能改善作用的研究[J]. 中華中醫藥學刊,2016,34(9):2188-2190.

[17] 王曉燕,畢洪春. 血管內皮功能與Hcy對冠心病型別的影響[J]. 國際醫藥衛生導報,2016,22(23):3640-3642, 3646.

[18] 孫衛寧,李海濤,李令娟,等. 3種血管內皮損傷指標血清水平與冠心病病變范圍的關系探討[J]. 現代中西醫結合雜志,2013,22(35):3948-3949.

[19] Lim T, Yun J, Cha S,etal. Elevated lipoprotein(a) levels predict cardiovascular disease in type 2 diabetes mellitus: a 10-year prospective cohort study[J].KoreanJInternalMedicine,2016,31(6):1110-1119.

[20] Bakarev M A, Karpova A A, Pichigin V I,etal. Involvement of the coronary bed in patients with coronary heart disease against the background of primarily coronary and generalized atherosclerosis[J].BulletinofExperimentalBiologyandMedicine,2016,162(2):283-287.

[21] 何文芳,王 喆,蔡 軍,等. 血管內皮生長因子與冠心病患者再發心血管事件的相關性[J]. 中國醫藥導刊,2015，17(7):676-677, 679.

[22] Chi M J, Liang C K, Lee W J,etal. Association of new-onset diabetes mellitus in older people and mortality in Taiwan: A 10-year nationwide population-based study[J].JNutritionHealth&Aging,2017,21(2):1-6.

[23] 談 紅,王 雪,李曉燕,等. 培哚普利對冠心病患者循環血內皮祖細胞及血管內皮功能的影響[J]. 中國循環雜志,2015,30(1):22-25.

(編輯:張慧茹)

Detection of Circulating MicroRNA Levels and Vascular Endothelial Function Indicators in Patients with Coronary Heart Disease Complicated with Diabetes Mellitus

JIANG Qiong, WU Jiayi, GUO Yongzhe, HU Rong, ZHENG Xingchun

Department of Cardiology, Fujian Medical University Union Hospital, Fujian Institute of Coronary Heart Disease, Fuzhou 350001,China

Objective To investigate the value of circulating blood levels of microRNAs and vascular endothelial function indicators in patients with coronary heart disease complicated with diabetes mellitus. Methods A total of 280 patients in our hospital were enrolled in this study, of which 70 patients were with coronary heart disease complicated with diabetes mellitus (group A), 70 patients were with only coronary heart disease (group B), 70 patients were with only diabetes mellitus (group C), and 70 were healthy persons (group D). The circulating blood microRNA levels and vascular endothelial function indicators of four groups were detected, and the results of different types in group A and B were compared. Moreover, the different levels of glycosylated hemoglobin between group A and C were compared. Results The circulating microRNA-20a and microRNA-133 levels in group A were both lower than those in group B, C and D. The circulating microRNAR-20a and microRNA-133 levels in group B and C were all lower than those in group D. In addition, the circulating microRNA-126 and microRNA-19a levels in group A were both higher than those in group B, C and D， and circulating microRNA-126 and microRNA-19a in group B and C were all higher than those in group D. The vascular endothelial function indicators in group A were all higher than those in group B, C and D. Besides, the vascular endothelial function indicators in group B and C were all higher than those in group D. The laboratory results in group A and B of different clinical sub-types as well as patients with different glycosylated hemoglobin levels in group A and C all were significantly different (allP<0.05). Conclusion The circulating microRNA levels and vascular endothelial function indicators in patients with coronary heart disease complicated with diabetes mellitus are significantly abnormal. It is useful and valuable to detect those parameters for the diagnosis and treatment of coronary heart disease complicated with diabetes mellitus.

coronary disease； diabetes mellitus； endothelium, vascular； blood circulation

2017-02-21

福建醫科大學 附屬協和醫院心血管內科，福建省冠心病研究所，福州 350001

江 瓊，女，主管檢驗師

鄭行春. Email：xingchun880047@163.com

R331.3； R541.4； R587.1

A

1672-4194(2017)03-0170-05