柯薩奇病毒B3型3D蛋白抗體的制備

王玉，徐維禎，穆宇松，王天楹，閆碧瑩，顏學勤，趙文然，鐘照華

1. 哈爾濱醫科大學微生物學教研室及伍連德研究所，哈爾濱 150081； 2. 哈爾濱醫科大學細胞生物學教研室，哈爾濱 150081

?

·論著·

柯薩奇病毒B3型3D蛋白抗體的制備

王玉1，徐維禎1，穆宇松1，王天楹1，閆碧瑩1，顏學勤1，趙文然2，鐘照華1

1. 哈爾濱醫科大學微生物學教研室及伍連德研究所，哈爾濱 150081； 2. 哈爾濱醫科大學細胞生物學教研室，哈爾濱 150081

腸道病毒3D蛋白是其RNA聚合酶。柯薩奇病毒B3型(coxsackievirus B3，CVB3)主要感染心臟，其3D蛋白在心肌表達中的時序和分布尚不清楚。本研究將通過聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction，PCR)獲得的CVB 3D片段插入pET28a(+)的表達框，獲得pET28a(+)-3D重組質粒。異丙基 β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside，IPTG)誘導pET28a(+)-3D表達3D-His蛋白，十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE)后，切膠，獲得3D-His蛋白。3D-His蛋白加佐劑免疫新西蘭大白兔制備3D蛋白多克隆抗體，蛋白免疫印跡法檢測抗體效價及特異性。結果顯示，本研究獲得了高效價且特異性好的抗CVB3 3D蛋白抗體，可用于CVB3 3D蛋白功能的后續研究。

柯薩奇病毒B3型；3D聚合酶；抗體；原核表達

柯薩奇病毒B組(coxsackievirus B，CVB)屬小RNA病毒科腸病毒屬，目前已鑒定出6種血清型(CVB1～CVB6)。CVB是人類病毒性心肌炎(viral myocarditis，VMC)的主要病原[1-2]。我國長春地區對近10年來疑似病毒性心肌炎患者的研究[3]顯示，成人患者CVB感染陽性率為63.4%，血清型以B3、B4、B5為主；兒童患者CVB感染陽性率為65.8%，血清型以B3、B4為主。在約50%擴張型心肌病患者中發現CVB反應性抗體，而在多達70%的患者中檢測到該病毒的基因組成分[4-5]。

CVB顆粒是無包膜20面體結構，直徑約30 nm[6]。病毒基因組是一條單……