炭疽芽胞桿菌A16D2株BA2380基因缺失突變株的構建

賈書驊，陳楠，王東澍，王甜甜，馮爾玲，朱力，王恒樑，彭清忠，劉先凱

1. 吉首大學，吉首 416000； 2. 軍事醫學科學院生物工程研究所，北京 100071； 3. 沈陽師范大學化學與生命科學學院，沈陽 110034

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·論著·

炭疽芽胞桿菌A16D2株BA2380基因缺失突變株的構建

賈書驊1,2,*，陳楠2,3,*，王東澍2，王甜甜2，馮爾玲2，朱力2，王恒樑2，彭清忠1，劉先凱2

1. 吉首大學，吉首 416000； 2. 軍事醫學科學院生物工程研究所，北京 100071； 3. 沈陽師范大學化學與生命科學學院，沈陽 110034

本課題組早期研究結果表明，炭疽芽胞桿菌BA2380蛋白可能與炭疽芽胞桿菌毒力有關，因而有必要對其功能進行深入研究。選取炭疽芽胞桿菌A16D2株為出發菌株，以其BA2380基因為目的缺失基因，參照A16D2株基因組序列及質粒pSET4s序列，利用軟件設計上下游同源臂及抗性基因引物，用本實驗室改造的“Golden Gate”克隆方法將3個片段同時連入溫敏型穿梭載體pKMBK中(本實驗室構建的受體質粒)，從而構建基因打靶質粒。將該基因打靶質粒導入炭疽芽胞桿菌A16D2感受態細胞中，利用同源重組原理，篩選獲得炭疽芽胞桿菌A16D2BA2380基因缺失突變株，并對其進行驗證。結果驗證了本課題組構建的“Golden Gate”克隆體系進行多片段克隆的高效性，也為后續探索其基因功能奠定了基礎。

炭疽芽胞桿菌；Golden Gate克隆；基因替換；同源重組

炭疽芽胞桿菌(Bacillusanthracis，B.anthracis)是炭疽的病原體。其無鞭毛，有莢膜，屬革蘭陽性菌。炭疽是由炭疽芽胞桿菌引起的人畜共患病，危害性極強，對人類健康及畜牧業構成嚴重威脅。芽胞是炭疽芽胞桿菌傳播和感染的主要形式，其接觸皮膚傷口、消化道或呼吸道上皮后，引起感染并導致皮膚炭疽、腸道炭疽、肺炭疽等疾病[1-4]。……