Cx26在甲狀腺乳頭狀癌中的異常表達(dá)及其臨床意義

萬鋒　呂云霞　徐志韌　余濟(jì)春

【摘要】 目的：探討Cx26在甲狀腺乳頭狀癌（PTC）中的異常表達(dá)與病理分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系。方法：采用免疫組織化學(xué)方法對(duì)116例PTC組織、33例癌旁組織的新鮮標(biāo)本進(jìn)行石蠟包埋，切片染色，檢測(cè)Cx26的表達(dá)，并分析其在PTC中的表達(dá)與臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果：Cx26在PTC組織中的表達(dá)均顯著高于癌旁組織（P<0.05），其表達(dá)與腫瘤大小、臨床分期、病理分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等因素相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論：Cx26的表達(dá)可有效地預(yù)測(cè)PTC的發(fā)生、早期轉(zhuǎn)移以及預(yù)后。

【關(guān)鍵詞】 Cx26； 甲狀腺乳頭狀癌； 轉(zhuǎn)移

Abnormal Expression of Cx26 in Papillary Thyroid Carcinoma and Its Clinical Significance/WAN Feng，LYU Yun-xia，XU Zhi-ren，et al.//Medical Innovation of China，2017，14（16）：122-124

【Abstract】 Objective：To investigate the relationship between the abnormal expression of Cx26 in thyroid papillary carcinoma（PTC） and pathological staging and lymph node metastasis.Method：A total of 116 cases of fresh specimens of PTC tissues and 33 cases of adjacent tissues were embedded in paraffin sections to stain and detect the expression of Cx26.All those were used to analyze the relationship between its expression in PTC and clinicopathological parameters.Result：The expression of Cx26 in PTC tissues was significantly higher than that in adjacent tissues（P<0.05）.The expression was correlated with tumor size，clinical stage，pathological grade and lymph node metastasis（P<0.05）.Conclusion：The expression of Cx26 can effectively predict the occurrence，early metastasis and prognosis of PTC.

【Key words】 Cx26； Papillary thyroid carcinoma； Metastasis

First-authors address：Hospital of Armed Police Corps in Jiangxi Province，Nanchang 330009，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.16.035

甲狀腺癌是內(nèi)分泌系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，占頭頸部腫瘤首位，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)[1]。其中甲狀腺乳頭狀癌最常見[2]，約占甲狀腺癌的85%，目前絕大多數(shù)甲狀腺乳頭狀癌（PTC）的療效尚可，但10%～20%的患者因其發(fā)生失分化，從而導(dǎo)致甲狀腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移[3]，一旦出現(xiàn)頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和/或遠(yuǎn)期轉(zhuǎn)移，患者的生存質(zhì)量將大大降低。因此，進(jìn)一步探索研究新的基因功能改變與PTC惡性特征的關(guān)系，闡明其發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制并采取有效的干預(yù)措施控制其轉(zhuǎn)移及判斷預(yù)后具有重要意義。

縫隙連接是指相鄰的細(xì)胞間存在的一種特殊的由蛋白質(zhì)構(gòu)成的結(jié)構(gòu)，目前大約有20余種縫隙連接蛋白被發(fā)現(xiàn)，其根據(jù)分子量的不同而命名，如Cx26分子量為26KDa[4]。Loewenstein等[5]于1966年提出由縫隙連接介導(dǎo)的細(xì)胞間通訊活動(dòng)與細(xì)胞的生長(zhǎng)控制及腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。至今已有大量文獻(xiàn)報(bào)道縫隙連接與惡性腫瘤的發(fā)生及侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)[6]。其中縫隙連接蛋白Cx26扮演著十分重要的角色，Cx26不同于其他連接蛋白，研究認(rèn)為其能夠影響腫瘤惡性表型，如侵襲性和轉(zhuǎn)移性等。然而Cx26在PTC中所起的作用及其活性如何？國(guó)內(nèi)外尚未見明確報(bào)道。本研究擬初步探討Cx26在PTC中的表達(dá)以及與病理分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院2014年4月-2015年1月間手術(shù)切除PTC組織116例，旁組織33例，其中男32例，女84例；年齡16～76歲。每一例組織離體后迅速用生理鹽水沖洗掉血跡，用無菌手術(shù)刀在腫瘤中心部位切取癌組織；在腫瘤安全切緣外1.0 cm以上切取甲狀腺組織作為癌旁組織，所有組織經(jīng)10%多聚甲醛固定，病理科醫(yī)生脫水、透明，石蠟包埋并制成切片。所有病例均經(jīng)病理學(xué)檢查確診，臨床資料完整，術(shù)前均未進(jìn)行化療和放療。

1.2 方法 用生物素-卵白素-辣根或氧化酶法對(duì)石蠟切片中的Cx26進(jìn)行免疫組化染色。將石蠟切片放入3%的過氧化氫溶液溫育20 min，萃取內(nèi)生過氧化物酶。后將樣本放入濃度為10 mmol/L的檸檬酸鹽緩沖劑中加入至95 ℃，40 min，恢復(fù)抗原活性，室溫下進(jìn)行封閉30 min。用鼠單克隆抗Cx26抗體，4 ℃溫育過夜，生物素-卵白素-辣根或氧化酶復(fù)合物加強(qiáng)染色，重點(diǎn)觀察腫瘤邊緣的細(xì)胞，因?yàn)檫吘壖?xì)胞比腫瘤中心的細(xì)胞更有可能出現(xiàn)Cx26染色陽性。隨機(jī)計(jì)算1000個(gè)腫瘤，超過10%的細(xì)胞出現(xiàn)清晰的Cx26染色陽性則可認(rèn)為此腫瘤Cx26陽性。Cx26的免疫組織化學(xué)信號(hào)均為棕黃色顆粒，主要定位于細(xì)胞漿內(nèi)。信號(hào)強(qiáng)度均用累積光密度值（IOD值）表示。應(yīng)用MIAS醫(yī)學(xué)圖象分析系統(tǒng)測(cè)定DTC組織與癌旁正常組織的IOD值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PTC中Cx26表達(dá)免疫組化實(shí)驗(yàn) 116例PTC中有55例Cx26表達(dá)陽性，陽性率47.4%，33例癌旁組織均為陰性。圖1為Cx26陽性的甲狀腺癌組織免疫組化實(shí)驗(yàn)的典型結(jié)果，圖1A為Cx26免疫染色陽性的PTC切片，幾乎所有的細(xì)胞質(zhì)均可見陽性染色；圖1B為10%腫瘤細(xì)胞陽性染色的PTC組織，在弱陽性腫瘤中，染色陽性的腫瘤細(xì)胞幾乎均見于腫瘤邊緣（圖1C）而不見于腫瘤中央（圖1D）。

2.2 Cx26表達(dá)與甲狀腺乳頭狀癌臨床病理特征 在PTC中Cx26的表達(dá)與腫瘤大小（直徑

2 cm）（P=0.036）、是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P=0.018）有關(guān)，與組織學(xué)亞型和組織侵襲性無關(guān)。用anti-D2-40和anti-CD34抗體可以顯現(xiàn)淋巴管和血管，從而對(duì)腫瘤細(xì)胞侵犯淋巴管和血管進(jìn)行免疫組化評(píng)估。淋巴管和血管內(nèi)均能見到Cx26陽性的腫瘤細(xì)胞，但兩者比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表1。PTC組織Cx26 IOD值為（136.62±2.59），癌旁組織Cx26 IOD值為（89.41±3.18），PTC組織Cx26明顯高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

3 討論

本研究結(jié)果顯示甲狀腺乳頭狀癌Cx26的免疫組化陽性表達(dá)率為47.4%。Cx26的表達(dá)與腫瘤的大小﹑淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及生物學(xué)侵襲性之間密切相關(guān)，Cx26在甲狀腺癌的發(fā)病機(jī)理中發(fā)揮了重要作用。近年來關(guān)于Cx26的相關(guān)報(bào)道很多，例如：肺鱗狀細(xì)胞癌Cx26表達(dá)陽性與肺癌的高復(fù)發(fā)率相關(guān)[7]。Cx26表達(dá)陽性，增加了BL6鼠黑色素瘤細(xì)胞的惡性程度[8]，Cx26與乳腺癌淋巴管侵犯、腫瘤的大小、組織學(xué)高分化和不良預(yù)后有關(guān)[9-10]。Cx26在多種腫瘤類型中定性為抑癌基因，表達(dá)與生物侵襲性密切相關(guān)是腫瘤發(fā)展過程中的普遍現(xiàn)象[11-12]。因此有必要對(duì)Cx26在腫瘤發(fā)生的機(jī)理中的作用進(jìn)行再評(píng)估，同時(shí)對(duì)于評(píng)估甲狀腺乳頭狀癌（PTC）病情的惡性程度及預(yù)后具有積極的意義。

本研究結(jié)果顯示Cx26的染色主要存在于腫瘤細(xì)胞的胞質(zhì)中，在Cx26表達(dá)免疫組化實(shí)驗(yàn)中，Cx26在PTC中的陽性率明顯高于癌旁組織，累積光密度值（IOD值）結(jié)果與此相一致。同時(shí)，Cx26表達(dá)與淋巴管侵犯無明顯相關(guān)性，而與腺瘤內(nèi)轉(zhuǎn)染、腫瘤的大小和淋巴結(jié)侵犯密切相關(guān)。以往對(duì)乳腺癌、肺癌和直腸癌的研究認(rèn)為：細(xì)胞質(zhì)中Cx26的持續(xù)表達(dá)，間接的證明癌細(xì)胞之間連接通道能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的局部侵襲性，Cx26陽性的腫瘤淋巴管侵犯率要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于Cx26陰性的腫瘤[13]。甲狀腺癌細(xì)胞存在侵犯淋巴管的傾向，最終導(dǎo)致淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，腫瘤細(xì)胞侵犯淋巴管可能為一種具有相同傾向的干細(xì)胞導(dǎo)致，這種干細(xì)胞來自于一種存在于Cx26表達(dá)陽性的腫瘤細(xì)胞和Cx43表達(dá)陽性的脈管內(nèi)皮細(xì)胞之間的異種間隙連接[14]。當(dāng)免疫組化Cx26為弱陽性時(shí)，Cx26陽性的腫瘤細(xì)胞主要位于甲狀腺乳頭狀癌腫瘤邊緣。Cx26陽性腫瘤細(xì)胞主要位于腫瘤邊緣的現(xiàn)象同樣存在于乳腺癌[15-16]，可以推測(cè)：Cx26陽性的腫瘤細(xì)胞位于侵襲的最邊緣，雖然數(shù)量很少，但是這些細(xì)胞極有可能侵犯鄰近的淋巴管。此外，Cx26還存在增加癌周淋巴管密度的趨勢(shì)，使得陽性的甲狀腺癌細(xì)胞表現(xiàn)出高度的淋巴管侵襲性，主要是因?yàn)槿狈JIC、淋巴管裂隙連接蛋白的特殊結(jié)構(gòu)，增加腫瘤邊緣淋巴管的親和性[17-18]。對(duì)比甲狀腺乳頭狀癌原發(fā)腫瘤和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中Cx26的表達(dá)情況，沒有明確發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)有更高的Cx26表達(dá)，但是Cx26在乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的過程中發(fā)揮的作用要強(qiáng)于甲狀腺癌，乳腺癌的轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)后，淋巴結(jié)中Cx26的表達(dá)高于原發(fā)腫瘤，證明Cx26陽性的腫瘤細(xì)胞比陰性腫瘤細(xì)胞具有更強(qiáng)的淋巴管侵犯和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移能力[7，19]，但目前其機(jī)制仍未闡明。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明Cx26是惡性腫瘤重要的發(fā)病原因，它與生物侵襲性密切相關(guān)，與PTC腫瘤大小和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。在這些腫瘤中Cx26表現(xiàn)的更像是原癌基因而非抑癌基因。檢測(cè)Cx26的表達(dá)可有效地預(yù)測(cè)PTC的發(fā)生、早期轉(zhuǎn)移以及預(yù)后，并可能為PTC轉(zhuǎn)移機(jī)制研究提供新的線索。

參考文獻(xiàn)

[1]鈕雁文.甲狀腺癌82例臨床分析[J].江西醫(yī)藥，2003，38（3）：198-199.

[2]代妮娜，劉燕娜，郭良云，等.超聲對(duì)橋本氏甲狀腺炎合并甲狀腺癌的診斷價(jià)值[J].江西醫(yī)藥，2015，50（1）：78-80.

[3] Chou T L，Lim B H，Kwok S P.Sentinel lymph node dissection in papillary thyroid carcinoma[J].ANZ J Surg，2004，74（1-2）：10-12.

[4] Evans W H，Martin P E M.Gap junctions：structure and function[J].Mol Membr Biol，2002，19（2）：121-136.

[5] Loewenstein W R，Kanno Y.Intercellular communication and the control of tissuegrowth：lack of communication between cancer cells[J].Nature，1966，9（5029）：1248-1249.

[6]王曉紅，劉雨飛，鮑宇濃，等.援甲狀腺乳頭狀癌RET、CK19、TG、Ki-67的表達(dá)[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2006，22（6）：692-695.

[7]賀家勇，付娟娟，楊晨晨.甲狀腺微小乳頭狀癌中Galectin-3、CK19和HBME-1的表達(dá)及其意義[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，38（7）：850-854.

[8]酈秀芳，呂艷婷，張海勇，等.CD56、TPO、p63及CKl9聯(lián)合檢測(cè)與甲狀腺乳頭狀癌臨床病理的相關(guān)性[J].溫州醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，44（3）：205-208.

[9]馬素剛，陳萬軍.ER、PR、HER-2/nue在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)及意義[J].中國(guó)保健營(yíng)養(yǎng)，2012，27（6）：760-766.

[10]胡孟鈞，呂艷婷，酈秀芳，等.CKl9、TPO、CD56及P63標(biāo)記在甲狀腺良惡性乳頭狀增生診斷與鑒別診斷中價(jià)值[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2011，27（5）：544-546.

[11]顏魁，謝瑩，段緒偉，等.甲狀腺乳頭狀癌頸部Ⅱb區(qū)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移特點(diǎn)及相關(guān)因素分析[J].熱帶醫(yī)學(xué)雜志，2013，13（11）：1324-1327，1330.

[12]吳愛嬌，王利宏.Cytokeratin-19、Fibronection-1、HBME-1和Galectin-3在甲狀腺微小乳頭狀癌中的應(yīng)用價(jià)值[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生，2013，51（16）：81-83.

[13]陳穎，李睿，劉源，等.免疫組化和PCR檢測(cè)乳腺癌HER-2、EGFRt和CK5/6過表達(dá)水平用于乳腺癌療效的評(píng)估[J].哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，47（1）：56-59.

[14]湯彪，孫圣榮.甲狀腺乳頭狀癌中TPO、HER-2的表達(dá)及臨床意義[J].熱帶醫(yī)學(xué)雜志，2015，15（9）：1215-1218.

[15]李加美，王強(qiáng)修，張珂，等.甲狀腺乳頭狀癌分子標(biāo)記物研究進(jìn)展[J].中華臨床醫(yī)師雜志：電子版，2012，6（23）：7698-7770.

[16]郭朝焱.王晉芬.CD56、TPO、CKl9、Galectin-3和HBME-1在甲狀腺乳頭樣病變中的表達(dá)及其意義[J].腫瘤研究與臨床，2014，26（7）：481-483.

[17]張青，李小歡，楊真，等.110例乳腺癌患者HER-2基因擴(kuò)增狀況及其與臨床病理特征的關(guān)系[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2013，10（11）：86-88.

[18]鄧敏，葉顧萍，馬建中，等.甲狀腺乳頭狀癌中CK19、Galectin-3、HBME-1和TPO的表達(dá)及意義[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2011，27（8）：843-846.

[19]劉池拽，師天雄，鄧建偉，等.p27蛋白在結(jié)節(jié)性甲狀腺腫和甲狀腺癌中的表達(dá)及意義[J].熱帶醫(yī)學(xué)雜志，2011，11（6）：641-643.

（收稿日期：2017-03-01） （本文編輯：鄧朝陽）