2013-2014年佳木斯市手足口病實驗室檢測結果分析

劉 莉，張維娜，馬永娟，寧楠楠，周 迪，劉 丹

（佳木斯市疾病預防控制中心，黑龍江 佳木斯 154007）

手足口病（Hand-foot-mouth disease,HFMD）是由一組腸道病毒引起的常見傳染病，引起手足口病的病毒屬于小RNA病毒科，其中柯薩奇病毒A16型和腸道病毒EV71型最常見。臨床表現以發熱和手、足、口腔等部位的皮疹為主要臨床特征的一種急性傳染病。手足口病全年均可發病，有明顯的季節特點，以夏秋季多見，病毒在4℃可存活1年，在-20℃可長期保存，在外環境中病毒可長期存活[1]?，F將2013-2014年佳木斯市手足口病實驗室檢測結果分析如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源

選取佳木斯市市區及周邊外市縣的疑似手足口病的患者，用于病毒分離的標本包括糞便、咽拭子、皰疹液或腦脊液標本，樣本在運輸過程中要避免反復凍融，采集樣本后應該在0～4℃條件下保存，運送到實驗室后如果不能立即檢測，則應存放到-20℃或-70℃冰箱保存樣本，樣本編號、發病日期和采集日期要標記好并作好原始記錄。

1.2 方法

手足口病的實驗室診斷一般是通過采集適當的臨床標本后進行病毒分離和病毒鑒定，用于腸道病毒分離的細胞系為RD細胞（對CA16和EV71敏感），CPE陽性的標本在進行熒光定量PCR檢測進行型別鑒定。

1.3 病毒分離培養

運送到實驗室的樣本，10 000 rpm離心30min，充分混勻后，每份標本接種RD細胞前，均用濾器過濾除菌。每份標本同時接種兩瓶細胞，接種后放在33～35℃二氧化碳培養箱培養。每天觀察CPE的變化，每份標本盲傳兩代，盲傳2代后，仍然沒有出現CPE的，則判定為陰性，CPE陽性標本放置-20℃的冰箱保存備用。

1.4 統計學方法

采用Excel 2003和SPSS19.0軟件進行統計分析。計數資料組間比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2013-2014年佳木斯市共采集疑似手足口病例133份，熒光定量PCR檢測陽性68份，RD細胞培養法分離陽性毒株24份。病毒分離陽性率為18.05%。其中EV71毒株9株，CA16毒株13株，其他HEV毒株2株。

2.1 年齡分布

2013-2014年，佳木斯市手足口病病毒分離陽性率各年齡組間差異無統計學意義（χ2=7.026，P＞0.05）。見表1。

表1 2013-2014年佳木斯市手足口病年齡分布

2.2 不同年份毒株分型情況

2013年手足口病病毒分離毒株分型以CA16為主，2014年毒株分型以EV71為主，兩年病毒分離陽性率無顯著差異（χ2=0.032，P ＞ 0.05)。見表2。

表2 2013-2014年佳木斯市手足口病病毒分離情況

2.3 性別分布

2013年手足口病PCR檢測和病毒分離檢測男性陽性人數高于女性陽性人數，2014年女性陽性人數高于男性陽性人數。見表3。

表3 2013-2014年佳木斯市手足口病性別分布情況 例

2.4 各地區分布情況

2013年手足口病病毒分離中，佳木斯市傳染病醫院10人，富錦CDC2人。2014年手足口病病毒分離中，富錦CDC4人，向陽區CDC3人，撫遠CDC1人，郊區CDC2人，東風區CDC2人。

2.5 手足口病病毒感染RD細胞情況

圖1為生長24h健康的單層RD細胞，形態呈梭型和大的多核細胞，貼壁生長。圖2為感染病毒72h的RD細胞，圖2中CPE變化明顯，細胞圓縮聚集，折光度增強，胞漿顆?；?，核圓縮、最后細胞皺縮破裂，由局部變化到出現80%CPE時進行收毒。CA16和EV71在RD細胞中的生長速度不同，EV71的生長速度要快于CA16，表現為EV71感染RD細胞后出現CPE的時間比CA16早。

圖1 未染毒的RD細胞

圖2 感染EV71病毒的RD細胞

3 討論

手足口病是嬰幼兒中流行的急性腸道病毒 (Enterovirus,EV)感染，主要病因為柯薩奇病毒 (Coxsackievirus)A組16型 (Cox.A16)[2]或EV71型[3]。我國于1981年上海首次報道本病，此后，北京、河北、天津、福建、吉林、山東、湖北、青海和廣東等十幾個省份均有本病報道[4]。

佳木斯市手足口病發病呈現波浪式趨勢。一般表現為每隔1～2年出現一次高發或連續兩年存在高發的情況，2013年發病率為7.37/10萬[4]。從這兩年的病毒分離結果來看，每年的手足口病病毒毒株的型別不同，2013年手足口病病毒分離毒株分型以CA16為主，2014年毒株分型以EV71為主。從患者的年齡上看，各年齡組之間差異無統計學意義 (P＞0.05)，從兩年的病毒分離陽性率差異無統計學意義 (P＞0.05)，可以推測佳木斯市這兩年手足口病疫情比較穩定。佳木斯市各地區均有手足口病的發病病例，并且沒有明顯的地域性差別，這與此前報道一致[4]。RD細胞支持HFMD的主要病原體——CA16和EV71的復制，CA16和EV71均能在RD細胞培養中引起特殊的腸道病毒致細胞病變效應（CPE），表現為細胞圓縮、分散、胞漿內顆粒增加，最后細胞自管壁脫落[1]。從本次的試驗分析中可以看出，佳木斯市手足口病的防控工作還是應該以預防為主，因為手足口病傳播途徑多，嬰幼兒和兒童普遍易感，所以做好兒童個人、家庭和托幼機構的衛生是預防本病感染的關鍵。

[1]中華人民共和國衛生部.手足口病實驗室檢測方案 (試行).手足口病預防控制指南（2008年）[S].

[2]于長水，肖明華，張之倫，等.天津市由COX.A16腸道病毒引起的手足口病[J].中華流行病學雜志，1985,6（2）:66-69.

[3]何雅青，楊帆，李良成，等.我國深圳地區手足口病患者腸道病毒71型的分離與鑒定[J].中華實驗和臨床病毒學雜志，1999，13（1）:83-84.

[4]趙繼民，路子春.2008-2013年佳木斯地區手足口病發病調查[J].黑龍江科學，2015（6）:136-137.