血紅蛋白電泳在嬰兒地中海貧血篩查中的應用價值和臨床研究

肖 貞

(中山市小欖人民醫院 兒科，廣東 中山528415)

血紅蛋白電泳在嬰兒地中海貧血篩查中的應用價值和臨床研究

肖 貞

(中山市小欖人民醫院 兒科，廣東 中山528415)

目的 血紅蛋白電泳在嬰兒地中海貧血篩查中的應用價值和臨床研究。方法 選取我院從2012年1月到2015年12月兒科做兒童保健的1255例3月齡嬰兒做為研究對象。應用全自動電泳分析系統對所有嬰兒靜脈血行血紅蛋白電泳測定。對于測定結果地中海貧血陽性病例實施基因分析。結果 1255例3月齡嬰兒靜脈血樣本中，血紅蛋白異常病例共91例，其中疑似α-地中海貧血57例，疑似β-地中海貧血22例，疑似異常血紅蛋白12例。基因測定結果提示α-地中海貧血51例，篩查符合率為89.47%；β-地中海貧血19例，篩查符合率為86.36%；9例異常血紅蛋白，3例HbE型，2例HbQ型，2例HbD型，Hb New York型、Hb J及Hb G型各1例。α-地中海貧血基因構成中--SEA/αα、-α3.7/αα及-α4.2/αα 3種類型占比最多，分別為2.39%、0.56%及0.48%；β-地中海貧血基因構成中βCD41-42/βN、βIVS-Ⅱ-654/βN及βCD17/βN3種類型占比最多，分別為0.64%、0.39%及0.24%。結論 臨床對嬰兒應用血紅蛋白電泳測定其靜脈血中血紅蛋白中各組分的含量，對嬰兒中地中海貧血的進行早期篩查與分類確診，具較高的診斷符合率，值得臨床廣泛推廣應用。

血紅蛋白電泳；嬰兒；地中海貧血；篩查

(ChinJLabDiagn,2017,21:0964)

有報道指出[1]，應用血紅蛋白電泳技術測定血紅蛋白中HbA、HbF及HbA2占比，可對地中海貧血(thalassaemias,TM)早期分類確診提供可靠依據；地中海貧血臨床上屬于單一或多種珠蛋白肽鏈合成功能障礙引發的，珠蛋白肽鏈代謝紊亂引發的一類貧血，又叫珠蛋白合成障礙性貧血，我國該病具顯著地域性特點，南方省份發病率高于北方，做為遺傳性疾病嚴重危害新生兒生存質量[1]。我院從2012年1月開始研究血紅蛋白電泳在嬰兒地中海貧血篩查中的應用價值和臨床研究，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院從2012年1月到2015年12月兒科做兒童保健的1255例3月齡嬰兒做為研究對象。男嬰621例，女嬰634例，年齡均為3月齡。所有嬰兒本次研究前由監護人簽署知情同意書，研究項目報本院倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 臍血采集與檢測 對1255例兒科兒童保健嬰兒常規采集靜脈血2 ml，抗凝處理[2]。應用美國HELENA LABORATORIES INC.公司SPIFE4000型全自動血紅蛋白電泳分析儀，嚴格按照儀器使用說明書進行操作，試劑盒為全自動血紅蛋白電泳分析儀配套試劑盒，點樣電泳20-25 min后，由儀器自動完成分離區帶、染色、脫色、透明及烘干等操作[2]。

1.2.2 臍血血紅蛋白電泳篩查診斷標準 健康嬰兒血紅蛋白電泳結果顯示：無異常Hb區帶；HbA組分占比為30%、HbF組分占比為70%；HbA2組分占比0.1-1%[3]。α-地中海貧血：有異常Hb Bart′s區帶、Hb CS區帶；β-地中海貧血：HbA低于12%且HbF高于88%，另需考慮新生嬰兒家族遺傳基因中是否存在β-地中海貧血基因序列。異常血紅蛋白：檢出異常Hb區帶[4]。

1.3 地中海貧血基因分型測定 應用血紅蛋白電泳技術檢測后陽性樣本實施基因測序分型評估，應用GAP-PCR法對缺失型α-地中海貧血進行基因分型測序，缺失型α-地中海貧血基因構成主要為--SEA/αα、-α3.7/αα及-α4.2/αα三類[5]。其他類型α-地中海貧血及β-地中海貧血基因分型應用PCR聯合反向斑點雜交法測序[6]，所有DNA序列測定由市衛生局指定單位檢測。

1.4 統計方法 數據以均數±標準差表示,采用SPSS18.0統計軟件進行分析。

2 結果

2.1 血紅蛋白電泳篩查結果

本次研究中應用全自動血紅蛋白電泳系統檢測的1255例3月齡嬰兒靜脈血樣本中，血紅蛋白異常病例共91例，占樣本總數的7.25%，疑似α-地中海貧血57例，占樣本總數的4.54%，疑似β-地中海貧血22例，占樣本總數的1.75%，疑似異常血紅蛋白12例,占樣本總數的0.96%。

2.2 篩查疑似樣本基因確診結果 通過對91例電泳檢測陽性病例實施基因測定。結果α-地中海貧血51例，血紅蛋白電泳篩查符合率為89.47%；β-地中海貧血19例，血紅蛋白電泳篩查符合率為86.36%；疑似異常血紅蛋白12例，應用PCR技術聯合反向斑點雜交與DNA序列測定，結果9例異常血紅蛋白，3例HbE型，2例HbQ型，2例HbD型，Hb New York型、Hb J及Hb G型各1例。

2.3 α-地中海貧血與β-地中海貧血基因構成 α-地中海貧血基因構成中--SEA/αα、-α3.7/αα及-α4.2/αα 3種類型占比最多，分別為2.39%、0.56%及0.48%；β-地中海貧血基因構成中βCD41-42/βN、βIVS-Ⅱ-654/βN及βCD17/βN3種類型占比最多，分別為0.64%、0.39%及0.24%，見表1、2。

表1 α-地中海貧血基因分型構成(n,%)

表2 β-地中海貧血基因分型構成

3 討論

有報道稱[7]，地中海貧血臨床上屬于珠蛋白生成障礙性貧血，由于常染色體遺傳缺陷致病，全世界范圍內均有該病患者，在我國兩廣地區成年人中發病率較高，地中海貧血在新生兒嬰兒中患病率亦較高。

有學者實驗結果顯示[8]，我國兩廣地區地中海貧血主要類型中α與β-地中海貧血患者患病率在8-10%；臨床上確診地中海貧血的所選措施中基因診斷是診斷準確度最高的，由于基因檢測技術不易掌握，檢測花費多，無法廣泛在基層醫院開展，目前基層醫院普遍采用的血紅蛋白電泳測定血紅蛋白各成分組成來篩查地中海貧血患者；通過血紅蛋白電泳技術篩查出的地中海貧血疑似病例，通過基因檢測與家族遺傳情況分析來確診是否為地中海貧血[9]。

有報道指出[10]，地中海貧血患者其珠蛋白鏈合成功能障礙，導致貧血性病理表現。地中海貧血主要分為兩大類：即α-地中海貧血與β-地中海貧血；其中α-地中海貧血由于患者α基因合成功能障礙導致珠蛋白生成障礙性貧血，此類患者α鏈合成受抑制或合成減少，患者血紅蛋白中的β鏈集聚產生HbH;若患者血紅蛋白中α鏈處于缺失狀態，則β鏈集聚產生Hb Bart′s，導致血紅蛋白中HbA、H bA2、HbF水平降低。有學者實驗結果提示[10]，α-地中海貧血患者中，HbA及HbA2水平降低，血紅蛋白電泳測定中出現HbH區帶，HbA2水平顯著低于健康人群。β-地中海貧血由于患者β基因合成功能障礙導致珠蛋白生成障礙性貧血，患者β鏈合成受抑制或合成減少，患者血紅蛋白中的α、γ鏈集聚產生HbA2與HbF;患者血紅蛋白中HbA2與HbF水平增高；HbF水平顯著高于健康人群[10]。有學者實驗結果顯示[11]，臨床應用血紅蛋白電泳篩查新生嬰兒的地中海貧血，其與基因診斷符合率中：α-地中海貧血與β-地中海貧血檢測符合率分別為85-88%、83-85%。本次研究結果中，α-地中海貧血基因構成中--SEA/αα、-α3.7/αα及-α4.2/αα 3種類型占比最多；β-地中海貧血基因構成中βCD41-42/βN、βIVS-Ⅱ-654/βN及βCD17/βN3種類型占比最多。

有學者研究結果顯示[11]，血紅蛋白電泳技術篩查地中海貧血通過測定血紅蛋白中正常與異常蛋白組分構成來初步診斷與病例分型，由于血紅蛋白各組分電位差異，電荷量多少，將其劃分分為多個區帶。全自動血紅蛋白電泳可以測定血紅蛋白中HbA、HbF及HbA2構成比例；依據上述組分構成比例，對疑似地中海貧血病例實施分型，即α-地中海貧血或β-地中海貧血[11]。

大量實驗結果提示[12]，Hb Bart′s做為新生兒臍血中特有的血紅蛋白，新生兒出生3個月至1年將消失，是被普遍認可的新生嬰兒α-地中海貧血篩查指標，在α-地中海貧血攜帶者的新生兒臍血樣本中Hb Bart′s含量不同[12]。

有學者實驗結果提示[13]，異常血紅蛋白屬于珠蛋白一級結構出現變異，影響血紅蛋白中珠蛋白鏈分子結構與構成，此類患者臨床癥狀非典型性，無特異性表現；臨床應用血紅蛋白電泳篩查新生嬰兒臍血樣本，測定異常血紅蛋白病例，應用PCR聯合反向斑點雜交與DNA序列對比進行確診分型[13]。在我國HbE屬于臨床多見的異常血紅蛋白，患者血紅蛋白β鏈上第26位密碼子基因突變，氨基酸發生替代效應,賴氨酸替代谷氨酸[13]。

有報道指出[14]，在我國地中海貧血發病率南北差異顯著，兩廣地區及海南省是此類遺傳性溶血性病癥的重點防治區域，臨床患病率高；隨著血紅蛋白電泳檢測技術的臨床應用日益廣泛，其對于地中海貧血臨床篩查應用通過測定HbA、HbF及HbA2各構成占比，對患者初步分型，并結合家族遺傳基因進行分型確診[14]。另血紅蛋白電泳檢測對于異常血紅蛋白中少數類型進行準確判定，HbE型、 HbQ型、 HbD型、Hb New York型、Hb J及Hb G型等[14]。應用血紅蛋白電泳檢測技術初步分型后，進一步聯合基因檢測可大大提高地中海貧血的檢出率，有利于盡早確診與干預治療[14]。

有報道稱[15]，應用血紅蛋白電泳篩查的優勢在于成本低于直接基因檢測，基層醫院即可實施，雖然其技術要求低于基因檢測，但日常應用其檢測過程中仍需注意以下幾個方面：檢測時盡量有兩位以上專業醫師聯合判定，防止漏診與誤診出現；對于血紅蛋白電泳儀要定期維護與保養，確保設備運行狀態良好，所用檢測試劑定期查看有無過期，對于檢驗科室醫務人員定期培訓學習，檢測結果為臨界點時需再次測定以便明確診斷[15]。

我院對1255例3月齡嬰兒靜脈血樣本進行血紅蛋白電泳測定，結果電泳檢測篩查出血紅蛋白異常病例共91例，其中疑似α-地中海貧血57例，疑似β-地中海貧血22例，疑似異常血紅蛋白12例。基因測定結果提示α-地中海貧血51例，篩查符合率為89.47%；β-地中海貧血19例，篩查符合率為86.36%；9例異常血紅蛋白，3例HbE型，2例HbQ型，2例HbD型，Hb New York型、Hb J及Hb G型各1例。

綜上所述,臨床對嬰兒應用血紅蛋白電泳測定其靜脈血中血紅蛋白中各組分的含量，對嬰兒中地中海貧血的進行早期篩查與分類確診，具較高的診斷符合率，值得臨床推廣應用。

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Value and clinical application in infant hemoglobin electrophoresis thalassemia screening

XIAOZhen．

(XiaolanPeople'sHospitalofZhongshan,Zhongshan528415,China)

Objective To study the value and clinical application in infant hemoglobin electrophoresis thalassemia screening.Methods Our hospital from January 2012 to December 2015 do pediatric child health 1255 cases of 3-month-old baby as a research object.Application of automatic electrophoresis system for all infants blood hemoglobin electrophoresis line.For the determination of genetic analysis results of thalassemia positive cases.Results 1255 cases of 3-month-old baby blood samples,91 cases of abnormal hemoglobin cases,including 57 cases of suspected α- thalassemia,β- thalassemia suspected in 22 cases,12 cases of suspected abnormal hemoglobin.Measurement results prompted α-thalassemia gene in 51 cases,the screening rate was 89.47%;β- thalassemia in 19 cases,the screening rate was 86.36%;9 cases of abnormal hemoglobin,3 HbE type 2 cases HbQ type 2 Example HbD type,Hb New York type,Hb J and Hb G type 1 case.α- thalassemia gene constitution --SEA/αα,-α3.7/αα and -α4.2/ αα three types accounting for most,were 2.39%,0.56% and 0.48%;β- thalassemia genetic makeup the βCD41-42/βN,βIVS-Ⅱ-654/βNand βCD17/βNthree types accounting for most,were 0.64%,0.39% and 0.24%.Conclusion The clinical application of baby hemoglobin electrophoresis to determine the contents of hemoglobin in the blood of each component of infants thalassemia screening for early diagnosis and classification,with high diagnostic accuracy,worthy of wider application.

hemoglobin electrophoresis;baby;thalassemia;Screening

1007-4287(2017)06-0964-04

R556

A

肖貞(1970-)，女，副主任醫師，現主要從事兒科工作。

2016-05-07)