分析葉酸代謝相關酶基因多態性與不良孕產的臨床關系

陸繼紅+施曉艷+萬金華

【摘要】 目的 探討葉酸代謝相關酶基因多態性與不良孕產的臨床關系。方法 80例不良孕產婦女作為不良孕產組， 80例正常生育婦女作為正常組。采集兩組婦女的口腔黏膜上皮細胞提取基因組DNA， 以聚合酶鏈式反應（PCR）技術進行基因多態性檢測。觀察兩組婦女的基因型分布特點， 并就其與不良孕產之間的關系展開分析。結果 不良孕產組婦女亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）基因C677T位點的TT突變純合型、A1298C位點的CC突變純合型， 甲硫氨酸合成酶還原酶（MTRR）基因A66G位點GG突變純合型基因頻率（47.50%、12.50%、18.75%）均高于正常組（21.25%、3.75%、7.50%）， 差異均有統計學意義（P<0.05）。不良孕產組婦女MTHFR基因C677T位點的CC野生純合型、A1298C位點的AA野生純合型， MTRR基因A66G位點的AA野生純合型基因頻率（21.25%、50.00%、41.25%）均低于正常組（36.25%、66.25%、58.75%）， 差異均有統計學意義（P<0.05）。結論 葉酸代謝相關酶基因多態性與不良孕產的發生有重要的關聯。

【關鍵詞】 亞甲基四氫葉酸還原酶；基因多態性；不良孕產；代謝相關酶

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.16.042

葉酸是一種水溶性維生素， 也是我們常說的維生素B9， 可以治療女性貧血， 更是預防胎兒神經管畸形的重要物質。葉酸在體內需要經過多重酶的催化才具有代謝活性， 其中關鍵的MTHFR、MTRR等酶的基因位點多態性會導致酶的活性降低， 從而造成葉酸代謝障礙， 引發一系列的疾病[1]。近年來， 臨床上針對葉酸代謝機制的研究越來越多， 很多研究指出[2]， 一部分婦女因葉酸代謝相關酶基因多態性導致不良孕產情況。本次研究以本院收集的160例婦女為研究對象， 探討葉酸代謝相關酶基因多態性與不良孕產的臨床關系。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取本院2014年12月～2016年12月收治的80例不良孕產婦女作為不良孕產組， 同期在本院檢查的80例正常生育婦女作為正常組。160例婦女年齡20～40歲， 平均年齡（30.4±4.5）歲；既往發生過48例習慣性流產、36例胎停、44例死胎、32例生育神經管缺陷患兒；46例生育1次， 114例生育1次以上。排除意識障礙、外感染、解剖學因素、福氣雙方染色體異常者， 本次研究由患者及其家屬簽署同意書。

1. 2 方法

1. 2. 1 設備與試劑 采用PCR分析儀ABI7500， 采用的PCR試劑、引物均由美國ABI公司提供， DNA提取試劑盒購于德國Qiagen公司。葉酸代謝障礙相關的單核苷酸基因多態性位點包括MTHFR C677T、MTHFR A1298C、MTRR A66G， 反應所用的基因多肽位點引物信息， MTHFR C677T上游引物：5'-GAA AAG CTG CGT GAT GAT G-3'， 下游引物5'-TTG AAG GAG AAG GTA TC-3'；MTHFR A1298C上游引物：5'-AAG AAC GAA GAC TTA AAA-3'， 下游引物：5'-TGG GGG GAG GAG CTG AC-3'； MTRR A66G上游引物：5'-AGG CAA AGG CCA TCG CA-3'， 下游引物：5‘-ATC CAT GTA CCA CAG CTT-3'[3]。

1. 2. 2 DNA提取 采集兩組婦女的口腔黏膜上皮細胞， 用柱式抽提試劑盒抽提樣本DNA， 采用基因測序技術檢測葉酸代謝相關酶MTHFR C677T、MTHFR A1298C、MTRR A66G的基因多態性。每個反應體系包括1 μl 20 ng/μl DNA模板， 5 μl 2×MasterMix， 0.5 μl 20×引物， 3.5 μl去水離子。每個反應體系的總體積為10 μl， 以95℃反應10 min， 后以92℃反應15 s， 60℃反應1 min， 以此進行20個循環后， 以89℃反應15 s， 60℃反應90 s再進行30個循環。結束后進行基因測序， 確定兩組婦女基因分型[4]。

1. 3 統計學方法 采用SPSS19.0統計學軟件處理數據。計數資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

不良孕產組婦女MTHFR基因C677T位點的TT突變純合型、A1298C位點的CC突變純合型， MTRR基因A66G位點GG突變純合型基因頻率（47.50%、12.50%、18.75%）均高于正常組（21.25%、3.75%、7.50%）， 差異均有統計學意義（P<0.05）。不良孕產組婦女MTHFR基因C677T位點的CC野生純合型、A1298C位點的AA野生純合型， MTRR基因A66G位點的AA野生純合型基因頻率（21.25%、50.00%、41.25%）均低于正常組（36.25%、66.25%、58.75%）， 差異均有統計學意義（P<0.05）。見表1。

3 討論

隨著近年來臨床上針對葉酸代謝相關基因的多態性與出生缺陷、不良妊娠的關系的研究擴大， 國內外針對育齡婦女葉酸代謝相關酶基因多態性的研究逐漸引起關注。MTHFR和MTRR是葉酸代謝過程中關鍵的酶， 前者能夠起到催化N5、N10-亞甲基四氫葉酸轉化為N5-甲基四氫葉酸的作用， 后者可作為甲基供體， 在MTRR的催化下廣泛參與到體內的甲基化反應中[5]。有研究指出， 葉酸代謝酶的活性降低， 可能導致同型半胱氨酸不能順利轉化為甲硫氨酸， 從而促使血漿中葉酸水平降低， 同型半胱氨酸濃度升高。這樣一來， 就容易引起患者血管內皮細胞損傷和功能異常， 血小板粘附和聚集被激活， 引起胎盤血栓性病變[6]。

MTHFR位于1號染色體短臂， 有11個外顯子和10個內含子， 其中最受關注的C677T和A1298C兩個基因突變位點是影響葉酸代謝障礙婦女的關鍵。MTRR位于5號染色體短臂， 有15個外顯子和14個內含子， 以A66G基因多態性突變位點為常見[7]。本次研究結果顯示， 不良孕產組婦女MTHFR基因C677T位點的TT突變純合型、A1298C位點的CC突變純合型， MTRR基因A66G位點GG突變純合型基因頻率（47.50%、12.50%、18.75%）均高于正常組（21.25%、3.75%、7.50%）， 差異均有統計學意義（P<0.05）。不良孕產組婦女MTHFR基因C677T位點的CC野生純合型、A1298C位點的AA野生純合型， MTRR基因A66G位點的AA野生純合型基因頻率（21.25%、50.00%、41.25%）均低于正常組（36.25%、66.25%、58.75%）， 差異均有統計學意義（P<0.05）。這說明， C677T多態性突變在MTHFR基因第4個外顯子的第677位核苷酸上細胞嘧啶突變為胸腺嘧啶， 表現為CC、CT、TT三種基因型。此突變導致基因位點處原本222位密碼子編碼的丙氨酸被纈氨酸替代， 酶熱穩定性降低。A1298C多態性突變為MTHFR基因第7個外顯子上的第1298位核苷酸上腺嘌呤被細胞嘧啶替代， 表現為AA、AC、CC型， 促使該基因位點處429位密碼自編碼的谷氨酸被丙氨酸替代， 酶活性降低。A66G多態性突變導致甲硫氨酸被異亮氨酸替代， 酶活性降低[8]。

綜上所述， 葉酸代謝相關酶基因多態性與不良孕產的發生有重要的關聯。

參考文獻

[1] 李茜西， 伍萍芝， 何琳琳， 等. 葉酸代謝相關酶基因多態性與不良孕產發生易感性的關系. 重慶醫學， 2015（10）：1330-1333.

[2] 邢金芳， 賈莉婷， 榮守華， 等. 育齡女性葉酸代謝關鍵酶基因多態性與維生素 B12和同型半胱氨酸關系的研究. 中國婦幼保健， 2014， 29（21）：3498-3501.

[3] 劉念， 閻炯， 楊林. 葉酸代謝相關酶基因多態性與不良孕產關系的研究. 中國計劃生育學雜志， 2015， 23（5）：318-320.

[4] 劉曉玲. 葉酸代謝相關酶基因多態性與不良孕產的臨床關系分析. 深圳中西醫結合雜志， 2016， 26（12）：26-27.

[5] 王芬芬， 崔蓮花， 宋揚. 葉酸代謝相關酶基因多態性與消化系統腫瘤的關系. 腫瘤， 2010， 30（12）：1074-1076.

[6] 陳云霞， 武延雋， 申麗麗. 育齡女性葉酸代謝相關酶基因多態性分析. 中國公共衛生， 2010， 26（8）：958-959.

[7] 王飛霞， 丁麗麗， 鄒愛民， 等. 陜西省漢族女性葉酸代謝相關酶基因多態性分布研究. 現代檢驗醫學雜志， 2014， 29（1）：35-37.

[8] 謝曉媛. 葉酸代謝酶MTHFR、MTRR基因多態性與原因不明復發性流產相關性研究. 天津醫科大學， 2015.