PRAME、APPL1在原發性肺腺癌中的表達及臨床意義

王芳 包迪

PRAME、APPL1在原發性肺腺癌中的表達及臨床意義

王芳 包迪

目的 探討黑色素瘤特異性抗原(PRAME)、適應性蛋白L1(Adaptor protein containing PH domain，APPL1)在原發性肺腺癌中的表達及臨床意義。方法 收集2014年2月至2015年12月期間被我院收治的52例原發性肺腺癌患者手術切除的肺腺癌組織和癌旁組織為實驗標本。采用RT-PCR技術檢測組織標本中的PRAME、APPL1 mRNA表達量。結果 肺腺癌組織中PRAME表達水平低于癌旁組織，差異有統計學意義(P<0.05)。肺腺癌組織中APPL1表達水平高于癌旁組織，差異有統計學意義(P<0.05)。隨著肺腺癌病例病理分期的升高、腫瘤大小的增加、分化程度的降低，肺腺癌組織中PRAME mRNA表達減弱，APPL1 mRNA表達增強，此外，肺腺癌組織中PRAME、APPL1 mRNA水平與病例是否伴淋巴結轉移有關。伴淋巴結轉移的肺腺癌組織，PRAME mRNA水平低于未出現淋巴結轉移的肺腺癌組織(P<0.05)，APPL1 mRNA水平高于未出現淋巴結轉移的肺腺癌組織(P<0.05)。原發性肺腺癌組織中PRAME、APPL1 mRNA表達量呈負相關(r=-0.412，P=0.007)。結論 PRAME在原發性肺腺癌組織中的表達水平低于癌旁組織，APPL1在原發性肺腺癌組織中的表達水平高于癌旁組織。PRAME、APPL1的表達與原發性肺腺癌組織的病理分期、腫瘤體積、分化程度及是否伴淋巴結轉移有關。

原發性肺腺癌；PRAME；APPL1；臨床病理

肺癌是常見的呼吸系統惡性腫瘤，其發病率和死亡率在全世界惡性腫瘤中居前列[1-2]。原發性肺腺癌是肺癌的一種，在中國，其發病人數和死亡率逐年上升[3]。原發性肺腺癌早期臨床癥狀不明顯，其具有血行轉移早、淋巴結轉移早等特征，且對放化療敏感性差，目前手術治療是其治療的主要手段[4]。

黑色素瘤特異性抗原(PRAME)是在黑色素瘤組織中首先被發現，是腫瘤睪丸抗原家族成員[5]，適應性蛋白L1(Adaptor protein containing PH domain，APPL1)是細胞內的一種適應性蛋白[6]。PRAME、APPL1兩種生化標志物在惡性腫瘤組織中存在異常表達。本研究通過檢測原發性肺腺癌患者組織中PRAME、APPL1等指標的表達水平，旨在探討PRAME、APPL1在原發性肺腺癌組織中的表達情況及臨床意義。

資料與方法

一、一般資料

收集2014年2月至2015年12月期間被我院收治的52例原發性肺腺癌(診斷標準參考文獻[7])患者手術切除的肺腺癌組織和癌旁組織為實驗標本。患者年齡45-80歲，平均年齡為59.61±8.79歲，體質量指數為22.18±4.59 kg/m2；由我院病理科進行病理活檢確診為原發性肺腺癌，52例原發性肺腺癌患者中，低分化22例，中高分化30例，伴淋巴結轉移29例；按照臨床分期的不同分為，Ⅰ-Ⅱ期30例，Ⅲ-Ⅳ期22例。均無飲酒史，其中6例有肺癌家族史，22例有吸煙史，患者手術前未接受放化療治療。本研究經入組者簽署知情同意書，并獲我院倫理委員會審批通過。

二、標本的采集及處理

原發性肺腺癌組織和癌旁組織標本切除離體后立即投入液氮中，冷凍后儲存于-80℃冰箱保存備用。

三、實驗方法

采用購自于賽飛(中國)有限公司的9701梯度PCR儀行RT-PCR，檢測原發性肺腺癌組織和癌旁組織中PRAME、APPL1 mRNA的表達水平，以GAPDH為內參PRAME上游引物為：5'TGCAGGCTCTCTATGTGGACTCT3'，下游引物為：5'TT'CATCACGTGCCTGAGCAA3'。APPL1上游引物為：5' TGAAGGTCGGAGTCAACGG3'，下游引物為：5' CTGGAAGATGGTGATGGGAT3'。PCR反應步驟：94℃預變性3min；94℃變性20s，60℃退火30s，72℃延伸40s；35個循環，72℃延伸10min。

四、統計學方法

結 果

一、肺腺癌組織、癌旁組織中PRAME、APPL1 mRNA水平比較

肺腺癌組織中PRAME表達水平低于癌旁組織，差異有統計學意義(P<0.05)。肺腺癌組織中APPL1表達水平高于癌旁組織，差異有統計學意義，P<0.05。(見表1)。

表1 肺腺癌組織、癌旁組織中PRAME、APPL1 mRNA水平比較

注：*P<0.05，與癌旁組織比較

二、不同臨床病理的原發性肺腺癌組織中PRAME、APPL1 mRNA水平

肺腺癌組織中PRAME、APPL1 mRNA水平與患者年齡、解剖部位無關，隨著肺腺癌病例病理分期的升高、腫瘤大小的增加、分化程度的降低，肺腺癌組織中PRAME mRNA表達減弱，APPL1 mRNA表達增強，此外，肺腺癌組織中PRAME、APPL1 mRNA水平與病例是否伴淋巴結轉移有關。伴淋巴結轉移的肺腺癌組織，PRAME mRNA水平低于未出現淋巴結轉移的肺腺癌組織(P<0.05)，APPL1 mRNA水平高于未出現淋巴結轉移的肺腺癌組織，P<0.05。(見表2)。

三、相關性分析

原發性肺腺癌組織中PRAME、APPL1 mRNA表達量呈負相關(r=-0.412，P=0.007)。

討 論

近年來原發性肺腺癌發病率和發病人數不斷攀升[8]。由于原發性肺腺癌對放化療敏感性較差，因此臨床上原發性肺腺癌仍然以手術治療為主。對于惡性腫瘤來說，普遍存在癌前病變、原位癌、腫瘤早期治療效果較好的現象，因此對原發性肺腺癌盡早發現、盡早治療對提高患者治療效果具有重要意義[9]。

PRAME是腫瘤睪丸抗原家族成員之一，具有能讓腫瘤溶解的功能。PRAME在多種腫瘤組織中有表達，同時也可表達于卵巢、腎上腺等正常組織中。目前已發現PRAME與兒童髓性白血病關系密切，但其與肺癌的關系尚不清楚[10]。APPL1是機體體內的一種適應性蛋白，可與膜受體結合，在體內的諸多生物反應過程中廣泛發揮作用[11]。APPL1在生化反應過程中起銜接、調節的作用，同時可以介導脂聯素的信號轉導[12-13]。有研究發現，PRAME、APPL1等生化標志物在惡性腫瘤組織中可以異常表達[14-15]。本研究RT-PCR結果顯示，肺腺癌組織中PRAME表達水平低于癌旁組織(P<0.05)。肺腺癌組織中APPL1表達水平高于癌旁組織(P<0.05)。表明原發性肺腺癌組織中，PRAME低表達，而APPL1高表達。與相關研究[14-15]結果一致。

影響因素nPRAMEmRNAt值P值APPL1mRNAt值P值年齡 ≥60歲2312．07±5．590．860．23125．41±6．810．910．196 <60歲2912．69±5．7123．98±6．34解剖部位 外周型3712．11±5．450．800．29425．64±6．840．870．196 中央型1512．69±5．6723．97±6．42病理分期 Ⅰ-Ⅱ期3015．32±6．074．810．00021．39±6．075．180．000 Ⅲ-Ⅳ期2211．07±5．5027．92±6．94腫瘤大小 >3cm1515．79±5．914．260．00027．91±6．865．300．000 ≤3cm3711．10±5．0721．17±6．64分化程度 低分化2211．07±5．094．410．00028．19±6．895．390．000 中高分化3015．37±6．0821．04±6．39淋巴結轉移 有2910．88±5．045．170．00028．14±6．965．410．000 無2315．39±6．1221．01±6．41

為探討PRAME、APPL1在不同臨床病理肺癌組織中的表達情況，我們采用RT-PCR技術檢測了不同臨床病理組織中PRAME、APPL1的水平。檢測結果顯示，原發性肺腺癌組織中PRAME、APPL1 mRNA水平與患者年齡、解剖部位無關，但隨著肺腺癌病例病理分期的升高、腫瘤大小的增加、分化程度的降低，肺腺癌組織中PRAME mRNA表達減弱，APPL1 mRNA表達增強。即PRAME、APPL1的表達水平與原發性肺腺癌的病理分期、病灶大小、分化程度密切相關。此外，我們在實驗中也發現，肺腺癌組織中PRAME、APPL1 mRNA水平與病例是否伴淋巴結轉移有關。伴淋巴結轉移的肺腺癌組織，PRAME mRNA水平低于未出現淋巴結轉移的肺腺癌組織(P<0.05)，APPL1 mRNA水平高于未出現淋巴結轉移的肺腺癌組織(P<0.05)。有學者在研究中也發現，PRAME、APPL1的表達與原發性肺腺癌分化程度分別呈正相關、負相關，與淋巴結轉移分別呈負相關、正相關[14-15]。本研究結果與相關研究[14-15]結果一致。這表明PRAME、APPL1的異常表達可能參與了原發性肺腺癌的淋巴結轉移，與患者病情惡化有關。這表明PRAME的表達減弱、APPL1的表達增強可能參與了原發性肺腺癌癌細胞的淋巴結轉移，與患者的預后存在一定的關系。

此外，我們在研究中還發現，原發性肺腺癌組織中PRAME、APPL1的表達之間呈負相關。這表明PRAME、APPL1在原發性肺腺癌的發病及進展過程中可能共同起作用。PRAME的高表達對原發性肺腺癌的發病可能起抑制作用，而APPL1的高表達對原發性肺腺癌的發病可能起促進作用。

綜上所述，PRAME在原發性肺腺癌組織中的表達水平低于癌旁組織，APPL1在原發性肺腺癌組織中的表達水平高于癌旁組織。PRAME、APPL1的表達與原發性肺腺癌組織的病理分期、腫瘤體積、分化程度及是否伴淋巴結轉移有關。PRAME、APPL1在原發性肺腺癌的發病、病情進展、惡化過程中可能共同發揮作用。

[1] Levy BP,Rao P,Becker DJ,et al.Attacking a Moving Target: Understanding Resistance and Managing Progression in EGFR-Positive Lung Cancer Patients Treated With Tyrosine Kinase Inhibitors

[J].Oncology，2016,30(7):601-612.

[2] Kim YE,Kim JO,Park KS,et al.Transforming Growth Factor-β-Induced RBFOX3 Inhibition Promotes Epithelial-Mesenchymal Transition of Lung Cancer Cells[J].Mol Cells,2016,39(8):625-630.

[3] 倪軍,郭子健,張力.單獨與聯合檢測四項肺癌血清腫瘤標志物在肺癌診斷中的價值[J].中華內科雜志，2016,55(1)：25-30.

[4] 余藝文,王傳鵬,韓耀風,等.中國非吸煙女性肺癌危險因素的Meta分析[J].中華流行病學雜志,2016,37(2):268-272.

[5] Xu Y,Yue Q,Wei H,et al.PRAME induces apoptosis and inhibits proliferation of leukemic cells in vitro and in vivo[J].Int J Clin Exp Pathol,2015,8(11):14549-14555.

[6] Fernández-Monreal M,Sánchez-Castillo C,Esteban JA.APPL1 gates long-term potentiation through its plekstrin homology domain[J].J Cell Sci,2016,129(14):2793-2803.

[7] 劉士遠.重視國內外專家共識,提高早期肺癌診治水平[J].中華放射學雜志,2015,49(4):241-243.

[8] Warnecke-Eberz U, Metzger R,H lscher AH,et al.Diagnostic marker signature for esophageal cancer from transcriptome analysis[J].Tumour Biol,2016,37(5):6349-6358.

[9] Yan H,Zhao RM,Wang ZJ,et al.Knockdown of PRAME enhances adriamycin-induced apoptosis in chronic myeloid leukemia cells[J].Eur Rev Med Pharmacol Sci,2015,19(24):4827-4834.

[10] Hermes N,Kewitz S,Staege MS.Preferentially Expressed Antigen in Melanoma (PRAME) and the PRAME Family of Leucine-Rich Repeat Proteins[J].Curr Cancer Drug Targets,2016,16(5):400-414.

[11] Dehghan R,Saidijam M,Mehdizade M,et al.Evidence for decreased expression of APPL1 associated with reduced insulin and adiponectin receptors expression in PCOS patients[J].J Endocrinol Invest, 2016,39(9):1075-1082.

[12] Chial HJ,Lenart P,Chen YQ.APPL proteins FRET at the BAR: direct observation of APPL1 and APPL2 BAR domain-mediated interactions on cell membranes using FRET microscopy[J].PLoS One,2010,5(8):e12471.

[13] Tan Y,You H,Coffey FJ,et al.Appl1 is dispensable for Akt signaling in vivo and mouse T-cell development[J]. Genesis,2010,48(9):531-519.

[14] Zhai JS,Song JG,Zhu CH,et al.Expression of APPL1 is correlated with clinicopathologic characteristics and poor prognosis in patients with gastric cancer[J].Curr Oncol,2016,23(2):e95-e101.

[15] Lerut E,Van Poppel H,Joniau S,et al.Rates of MAGE-A3 and PRAME expressing tumors in FFPE tissue specimens from bladder cancer patients: potential targets for antigen-specific cancer immunotherapeutics[J].Int J Clin Exp Pathol,2015,8(8):9522-9532.

Expression of PRAME and APPL1 in primary lung adenocarcinoma and its clinical significance

WANGFang,BAODi
NorthBranchofXiangyangCentralHospital,Xiangyang,Hubei441000,China

Objective To study the expression of PRAME and APPL1 in primary lung adenocarcinoma and its clinical significance. Methods From February 2014 to December 2015 in our hospital, 52 cases of lung adenocarcinoma tissue and tissue adjacent to carcinoma specimens by surgical resection of primary lung adenocarcinoma patients were collected for experiment. The levels of PRAME and APPL1 mRNA of tissue samples were detected by RT-PCR technique. Results The expression level of PRAME in lung adenocarcinoma tissues was lower than in tissues adjacent to carcinoma (P<0.05). The expression level of APPL1 in lung adenocarcinoma tissue was higher than in tissues adjacent to carcinoma (P<0.05). With the increase of pathological stage of lung adenocarcinoma and tumor size and the decrease of differentiation degree, the expression of PRAME mRNA in lung adenocarcinoma tissues weakened, and APPL1 mRNA enhanced. In addition, the level of PRAME and APPL1 mRNA was related with whether the cases were complicated with lymph node metastasis or not. The level of PRAME mRNA was lower in patients associated with lymph node metastasis than in patients without lymph node metastasis (P<0.05), and APPL1 mRNA was higher in patients associated with lymph node metastasis than in patients without lymph node metastasis (P<0.05). In primary lung adenocarcinoma tissues, PRAME and APPL1 mRNA showed a negative correlation (r=-0.412,P=0.007). Conclusion PRAME expression in primary lung adenocarcinoma tissue is lower than tissue adjacent to carcinoma. APPL1 expression in primary lung adenocarcinoma tissue is higher than tissue adjacent to carcinoma. PRAME and APPL1 expression in primary lung adenocarcinoma tissue is related to the pathological staging, tumor size, degree of differentiation and whether associated with lymph node metastasis.

primary lung adenocarcinoma; PRAME; APPL1; clinical pathology

10.3969/j.issn.1009-6663.2017.07.019

441000 湖北 襄陽，襄陽市中心醫院(湖北文理學院附屬醫院)腫瘤科

包迪，E-mail:75118300@qq.com

2016-11-04]