RIP3介導的壞死性凋亡在HT-22細胞牽張損傷模型中的作用

于澤奇 衣泰龍 涂悅 楊小颯 江繼鵬 董曉煜 張賽 程世翔

RIP3介導的壞死性凋亡在HT-22細胞牽張損傷模型中的作用

于澤奇1衣泰龍1涂悅1楊小颯1江繼鵬1董曉煜2張賽1程世翔1

目的探討受體相互作用蛋白3（RIP3）介導的壞死性凋亡在HT-22細胞牽張損傷模型中的作用及其機制。方法將HT-22細胞接種在Bioflex培養板，采用細胞損傷控制儀（CIC），設定損傷參數（閥門壓力30 PSI、氣體脈沖壓力3.5～4.5 PSI、氣體脈沖時間50 ms），建立HT-22細胞牽張損傷模型。分別采用數字全息顯微鏡（DHM）、乳酸脫氫酶（LDH）試劑盒、流式細胞術、western blot法檢測牽張損傷后6 h Ctrl組、CIC組、GSK’872組間細胞形態差異，LDH濃度變化，細胞周期分布，RIP3/受體相互作用蛋白1（RIP1）/混合系列蛋白激酶樣結構域（MLKL）、Akt/p-Akt/mTOR/p-mTOR、Caspase-8/X連鎖凋亡抑制蛋白（XIAP）蛋白表達變化。結果與CIC組相比，應用GSK’872后細胞平均數量[（244.67±11.68）vs（190.67±15.28），t=4.865，P＜0.01]、細胞平均面積[（260.14±16.81）μm2vs（175.91±15.00）μm2，t=6.476，P＜0.01]有所增加，細胞平均厚度有所減小[（6.12±0.47）μm vs（8.04±0.48）μm，t=4.942，P＜0.01]；LDH濃度有所下降[（222.74±11.06）ng/l vs（275.93±12.26）ng/l，t=5.581，P＜0.01]；細胞周期有所恢復[Sub-G1：（0.33±0.15）%vs（6.51±0.63）%，t=16.530，P＜0.01；G0/G1：（46.67±2.96）%vs（33.04±7.07）%，t=3.085，P＜0.05]；能夠降低 RIP3[（0.73±0.04）vs（1.09± 0.09），t=6.239，P＜0.01]、RIP1[（0.75±0.05）vs（0.91±0.05），t=4.211，P＜0.05]、MLKL[（0.56±0.03）vs（0.70± 0.04），t=4.785，P＜0.01]、Akt[（0.49±0.05）vs（0.77±0.05），t=6.763，P＜0.01]、p-Akt[（0.88±0.05）vs（1.06± 0.05），t=4.509，P＜0.05]、mTOR[（0.81±0.02）vs（0.90±0.05），t=2.813，P＜0.05]、p-mTOR[（0.65±0.05）vs（1.00±0.05），t=8.413，P＜0.01]、XIAP[（0.50±0.05）vs（0.73±0.05），t=5.814，P＜0.01]蛋白表達，并可促進 Caspase-8蛋白表達持續升高[（0.96±0.05）vs（0.75±0.05），t=5.351，P＜0.01]，差異具有統計學意義。結論RIP3介導的壞死性凋亡在HT-22細胞牽張損傷模型中起到重要作用，應用GSK’872可減輕HT-22細胞牽張損傷的程度，提示RIP3有可能成為將來臨床上治療顱腦創傷新的靶點。

顱腦創傷； 牽張損傷； 壞死性凋亡； 受體相互作用蛋白3； GSK’872； HT-22細胞

顱腦創傷（traumatic brain injury，TBI）是臨床上常見預后兇險的危重病，其高致死率和致殘率給患者家庭和社會帶來沉重的負擔，現已成為全球較嚴重的公共衛生問題[1,2]。降低顱腦創傷死亡率、致殘率以及提高患者的生存質量是目前神經外科領域的研究熱點[3]。近年來，壞死性凋亡在多種疾病中的作用越來越受關注，比如細菌感染，胰腺炎，動脈粥樣硬化，腦、心肌、腸道炎癥等[4-9]。……