MicroRNA-195對膠質瘤U251細胞株CCND1表達的影響

徐勇明 任書嫻 常璐 曲志釗 李亞娜 王宏勤

·基礎研究·

MicroRNA-195對膠質瘤U251細胞株CCND1表達的影響

徐勇明1任書嫻1常璐1曲志釗2李亞娜2王宏勤2

目的研究microRNA-195對膠質瘤U251細胞株CCND1表達的影響。方法通過脂質體Lipofectamin 2000瞬時轉染法將microRNA-195過表達、microRNA-195抑制表達轉染膠質瘤細胞株 U251。以空白轉染組作為空白對照組 （K組）、microRNA-195過表達轉染組為 M組、microRNA-195抑制表達轉染組為I組。Real-time PCR檢測轉染前后microRNA-195的含量以確保轉染效率；再通過real-time PCR檢測轉染前后CCND1mRNA的表達變化；western blotting檢測膠質瘤細胞U251中CCND1的表達水平。結果Real-time PCR結果顯示M組CCND1mRNA的表達低于I組 （M：758.264＜I：1398.04），western blotting實驗顯示M組相對I組CCND1表達減少 （M：2029＜I：22365.66）。結論MicroRNA-195對膠質瘤U251細胞株CCND1表達有影響。

微小RNA-195； 細胞周期蛋白D1； 膠質瘤

近年來，microRNA已經成為腫瘤領域研究的熱點。MicroRNA是一類長約20～25個核苷酸序列的非編碼的內源性單鏈RNA分子。Lee等[1]首先在線蟲胚胎中發現lin-4小分子RNA，并命名為miRNA。microRNA-195定位于染色體的17p13.1，位于人類17號染色體的 6 881 953～6 862 065 bp間，是AK098506基因第7個內含子的部分序列[2]。

有研究報道：microRNA-195靶點多為G1/S期的轉換調控因子，而這些因子與腫瘤細胞G1/S期轉換調控、 異常增殖、 凋亡密切相關。 過表達microRNA-195可抑制膠質瘤細胞增殖，阻滯細胞周期進展，促進細胞凋亡[2]。利用數據庫TargetScan預測microRNA-195的作用靶點，以及目前已經報道的microRNA-195的作用靶點，如 CCND1、CCND3、BCL-2等。CCND1過表達于多種人類腫瘤，包括膠質瘤、結腸癌、淋巴瘤等[3-5]。

因此，為闡明microRNA-195對膠質瘤CCND1的影響，并初步驗證CCND1為microRNA-195的作用靶點，筆者采用real-time PCR、western blotting檢測轉染前后CCND1的變化。

材料與方法

一、材料

人腦膠質瘤細胞株U251（武漢博士德生物工程有限公司）；質粒miRNA-195過表達，miRNA-195抑制表達（廣州銳博）；……