PD—1抗體在腫瘤治療中的應用

黃樂

【摘 要】 目的：分析PD-1抗體在腫瘤治療中的應用價值。方法：從2014年2月～2015年9月，醫院住院的15名肺癌患者中、15名體檢健康的志愿者，采血獲得外周血單個核細胞（PBMCs），體外培養CIK細胞，進行腫瘤組織離體培養，以CIK為效應細胞，以A549、H1299、原代細胞為靶細胞，將效應細胞與靶細胞按照10：1比例混合，采用GytoTox-Glo細胞毒性檢測細胞進行活化淋巴細胞殺傷作用檢測，以自身PBMC作為陰性對照組，設置實驗組加入效應細胞，同時另設三組分別加入10、50、100ngPD -1抗體（低劑量組、中劑量組、高劑量組）。結果：實驗組、小劑量組、中劑量組、高劑量組腫瘤細胞殺傷率指標差異有統計學意義，高劑量組高于中劑量組，中劑量組高于小劑量組，小劑量組高于實驗組，差異有統計學意義（P<0.05）。結論：PD-1抗體可增強效應細胞殺傷腫瘤細胞作用。

【關鍵詞】 惡性腫瘤 靶向治療 PD-1抗體

靶向治療是惡性腫瘤治療的新療法，也是當前最有潛力的腫瘤療法。PD-1抗體是PD-LI一個抑制性受體，PD-1分子尾部含有2個酪氨酸殘基，他們與下游信號傳導分子相互作用，可能發揮不同的調節作用，PD-1表達與活化的T、B淋巴細胞、NK細胞、活化的單核以及樹突狀細胞[1]。本次研究采用體外試驗研究，評價PD-1抗體在腫瘤治療中的應用價值。

1 材料與方法

1.1 樣本來源

從2014年2月～2015年9月，醫院住院的15名肺癌患者中，抽取血液10ml，其中男6例、女4例，平均年齡（58.1±5.2）歲。另選擇體檢健康的志愿者15名，其中男6例、女4例，平均年齡（58.3±5.2）歲，采血10ml。從人淋巴新=細胞中，采用梯度離心法，獲得外周血單個核細胞（PBMCs），含有10%FCS和200U/ml IL-2的PRMI-1640培養基懸浮培養。

1.2 儀器與試劑

儀器主要包括牛血清單板、PD-1單抗、流式細胞儀、自動酶標儀、各類培養基，BX-60熒光顯微鏡等。

1.3 方法

首先：體外培養CIK細胞，取靜脈血EDTA抗凝，分離淋巴細胞分離液，獲得的細胞，于4ml1640完全培養基重懸，計數臺盼藍備用，而后進行CIK細胞培養。健康的人PBMC采用1-2×106/mln濃度懸浮無血清培養液，加入重組人IFN-g，37℃，5%CO2培養箱中培養，24h加入CD3單克隆抗體50ng/ml，重組人IL-2 300U/ml，刺激CIK細胞生長增殖，加入重組人IL-1a 100U/ml，換液培養擴瓶，并補充IL-1a，第14日收獲CIK細胞，染色。其次，進行腫瘤組織離體培養，保存離體組織，快處理，消化，培養，過濾，離心濾液，進行培養，換液傳代。最后進行腫瘤殺傷實驗：以CIK為效應細胞，以A549、H1299、原代細胞為靶細胞，將效應細胞與靶細胞按照10：1比例加入到96孔U型板中，采用GytoTox-Glo細胞毒性檢測細胞進行活化淋巴細胞殺傷作用檢測，以AAF-GloTM為底物，發光強度與細胞毒效應的細胞數量成正比，計算總細胞發光強度減去死細胞發光強度計算細胞活力，計算活化淋巴細胞對靶細胞殺傷率。以自身PBMC作為陰性對照組，設置實驗組加入效應細胞，同時另設三組分別加入10、50、100ngPD -1抗體（低劑量組、中劑量組、高劑量組）。37℃，5%CO2孵育6h，每孔加入50μl熒光底物檢測，室溫下搖床低速震蕩15min，采用酶標儀檢測每孔發光值。細胞殺傷率=[（目標組發光值-淋巴對照組組發光值-靶細胞對照組發光值+培養基發光值）/（靶細胞總發光值-靶細胞對照組發光值）]×100%。

1.4 統計學處理

采用SPSS20.0軟件進行統計學計算，殺傷率指標采用（Mena±SD）符號（x±s）表示，服從正態分布組間比較采用t檢驗，多組間比較F檢驗，以P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

實驗組、小劑量組、中劑量組、高劑量組腫瘤細胞殺傷率指標差異有統計學意義，高劑量組高于中劑量組，中劑量組高于小劑量組，小劑量組高于實驗組，差異有統計學意義（P<0.05）。見表1。

3 討論

從本次研究結果來看，體外試驗證實：PD-1抗體可增強CIK效應細胞殺傷腫瘤細胞作用，提高腫瘤細胞殺傷率，且表現出劑量依賴。目前抗PD-1藥物已進入臨床試驗階段，一項針對進展期難治性NSCLC的meta分析顯示，抗PD-L1藥物可起到增效作用，提高患者的中位總生存期[HR=0.61，95%CI0.61～0.75，P<0.05），和總緩解率[HR=0.56，95%CI0.43～0.73，P<0.05）[2]。另一項針對PD-1/PD-L1抗體與多西他賽治療晚期非小細胞肺癌的meta分析顯示，看題組不良反應發生率較低，總的不良反應發生率顯著下降，但免疫相關不良反應發生率上升[3]。PD-1抗體通過發揮增效作用，延長惡性腫瘤患者生存期，也可能存在不良反應，影響免疫功能[4]。

參考文獻

[1]曹佳彬，魏敬雙.PD-1 抗體在腫瘤治療中的應用[J].中國生物制品學雜志，2014，27（6）：856-860.

[2]王心怡，李晨露.抗PD-L1藥物治療進展期難治型NSCLC有效性與安全性Meta分析[J].青島大學醫學院學報，2016，52（6）：659-664.

[3]蘇強，閆涵，侯艷麗，等.PD-1/PD-L1抗體與多西他賽治療晚期非小細胞肺癌安全性meta分析[J].中華腫瘤防治雜志，2016，23（21）：1450-1452.