瑞舒伐他汀鈣對野百合堿誘導大鼠肺動脈高壓及對肺組織mcp-1表達的影響①

葉金玲，楊光遠，孫 晶，徐 濤

(佳木斯大學附屬第一醫(yī)院，黑龍江 佳木斯 154003)

瑞舒伐他汀鈣對野百合堿誘導大鼠肺動脈高壓及對肺組織mcp-1表達的影響①

葉金玲，楊光遠，孫 晶，徐 濤

(佳木斯大學附屬第一醫(yī)院，黑龍江 佳木斯 154003)

目的：通過實驗了解瑞舒伐他汀鈣在野百合堿誘導的大鼠肺動脈高壓以及肺組織mcp-1表達中的影響。方法：成年SD大鼠24只，隨機分為瑞舒伐他汀治療組 (R組)；野百合堿誘導肺動脈高壓組 (M組 )；正常空白對照組 (C組)。M組及R組分別給予腹部皮下一次性注射50mg∕kg野百合堿，對照組給予等量生理鹽水，并從注射之日起給予R組瑞舒伐他汀鈣2mg∕kg·d灌胃。觀察各組大鼠的一般情況，四周后實驗結束，分別測量平均右心室壓力(mRVP)、肺動脈平均壓(mPAP)，右心室肥厚指數(shù) (RVHI)及MCP-1表達水平。結果：M組的肺動脈壓及右心室肥厚指數(shù)(RVHI%)較對照組均明顯升高，R組肺動脈壓及右心室肥厚指數(shù)較M組均顯著降低(P<0.05)，但均高于對照組。與對照組比較，M組的肺動脈高壓大鼠肺組織的MCP-1表達增加,其中R組比M組肺組織MCP-1表達減少。結論：瑞舒伐他汀鈣下調(diào)MCP-1 改善野百合堿誘導的大鼠肺動脈高壓。

肺動脈高壓；瑞舒伐他汀鈣；單核細胞趨化因子-1(mcp-1)

肺動脈高壓是多種原因?qū)е碌姆蝿用}壓力和肺血管阻力升高的一類惡性心血管疾病。是眾多心、肺疾病發(fā)生及發(fā)展的重要病理生理環(huán)節(jié)，其病理學過程包括肺血管收縮、原位血栓形成及肺血管重構，最終因過度血管內(nèi)膜增生及血管阻塞導致嚴重的肺動脈高壓[1]。野百合堿是一種吡咯烷類生物堿，生物活性強，經(jīng)肝臟代謝脫氫后可產(chǎn)生細胞毒性，隨著血流經(jīng)過肺時損傷肺血管內(nèi)皮細胞，血液中蛋白酶外滲，促發(fā)炎性細胞浸潤，平滑肌細胞過度增生，血管收縮，最終出現(xiàn)肺動脈高壓。他汀類藥物是多種3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶復合物抑制劑的總稱，此類藥物除降脂作用外，還具有抗炎，抗氧化，改善血管內(nèi)皮細胞功能，影響血管生成，抑制心室重構，抗腫瘤，免疫調(diào)整等作用[2],近幾年國內(nèi)外一些研究表明他汀類藥物通過其多效性能有效改善肺動脈高壓[4]。

1 材料和方法

1.1 材料

Sprague-Dawley大鼠(清潔級)：上海斯萊克實驗動物有限責任公司 野百合堿(MCT)：Sigma公司 瑞舒伐他汀鈣 阿斯利康制藥有限公司 大鼠mcp-1試劑盒: 上海酶聯(lián)生物有限公司。

1.2 方法

1.2.1 實驗方法：將體重在220～250g，皮毛光滑，精神狀態(tài)良好的24只Sprague-Dawley大鼠隨機分為正常空白對照組(C組)、野百合堿誘導肺動脈高壓組(M組)和瑞舒伐他汀鈣處理組(R組)，每組 8 只。M組和R組采用野百合堿(50mg/kg) 一次性皮下注射，對照組以等量生理鹽水代替。并從野百合堿皮 下 注 射之日 起 ， 每 日 一次給 予R組 瑞 舒 伐 他 汀 鈣(2mg/ (kg·d)) 灌胃，C組、M組僅給予生理鹽水灌胃， 直至第 4周。

1.2.2 檢測方法：實驗結束當日給予大鼠10% 烏拉坦( 1g/kg) 腹腔注射，小心分離右側頸外靜脈，插入內(nèi)徑為0. 9mm的聚苯乙烯管,經(jīng)右心房、右心室、至肺動脈，測定并記錄肺動脈平均壓(mPVP)及平均右心室壓力(mRVP)，處死小鼠后完整取下心臟，,沿室間隔分離出右心室(RV) 和左心室加室間隔(LV+S)，濾紙吸水后分別稱重，通過RV/(LV+S)計算出右心室肥厚指數(shù) (RVHI) 。

抽取大鼠1mL血液置于1.5mL離心管中，以3000r/min的速度離心10min，分離血清，置于-70℃冰箱中保存待測(以上操作需在30min內(nèi)完成)。 對照組以相同方法抽血待測。 試劑盒選自上海酶聯(lián)生物有限公司，采用酶聯(lián)免疫吸附法 (ELISA)檢測血清中MCP-1水平。以上操作均嚴格按照試劑盒要求進行。

1.3 統(tǒng)計學方法

2 結果

2.1 瑞舒伐他汀鈣降低大鼠平均肺動脈壓(mPAP)和抑制其右心室肥厚 野百合堿明顯增加大鼠平均肺動脈壓并促進其右心室肥厚，而瑞舒伐他汀鈣干預后可以降低大鼠平均肺動脈壓并抑制其右心室肥厚。見表 1。

表1 三組mPAP和RVHI的比較

mPAP：肺動脈平均壓；RVHI：右心室肥厚指數(shù)；與另外兩組比,*P<0.05，與對照組比較，#P<0.05。

2．2 野百合堿上調(diào)大鼠肺組織MCP-1的表達， 瑞舒伐他汀鈣抑制野百合堿誘導肺動脈。見表2。

表2 三組大鼠血清MCP-1水平

注：與另外兩組相比，*P<0.01;與正常對照組相比，#P<0.05。

3 討論

肺動脈高壓是一類惡性心血管疾病，嚴重時可誘發(fā)右心衰竭和死亡。無癥狀者平均成活時間為10～20年，有心力衰竭癥狀者平均成活時間為3～5年。特發(fā)性肺動脈高壓進展更快，平均壽命2.5年。目前發(fā)病機制還不清楚，病理學研究發(fā)現(xiàn)主要的病理學特征為肺動脈內(nèi)皮損傷，中膜增生，外膜肥厚，非肌成型動脈形成新肌層化，最終導致血管壁增厚，管腔狹窄，肺動脈壓力增高。組織學研究表明肺動脈周圍炎性細胞浸潤明顯，并且炎性細胞釋放出大量細胞因子，趨化因子等，繼而出現(xiàn)肺血管內(nèi)皮損傷、平滑肌過度增生及纖維母細胞表型改變最終出現(xiàn)血管狹窄，肺血管纖維化，肺動脈高壓形成[4～6]。

趨化因子(chemokines)是具有趨化作用的一類小分子蛋 白質(zhì)或多肽，是一類重要的生理與病理生理及免疫應答的調(diào)節(jié)因子，參與機體的多種機能活動。趨化因子的重要成員mcp-1是一種堿性蛋白，為76個氨基酸殘基構成的蛋白單 鏈，鼠mcp-1是人類mcp-1的同源體cc類趨化因子。Mcp-1的受體cc趨化因子受體2是一類含有7個跨膜區(qū)的G蛋白偶聯(lián)受體，位于3 號染色體上，在各種細胞類型上都有發(fā)現(xiàn)[7]。MCP-1與ccr2受體結合，趨化單核細 胞，T淋巴細胞等炎性細胞在病變處聚集參與破壞肺血管內(nèi)皮，誘導局部血管內(nèi)血栓形成，并通過自分泌和旁分泌刺激平滑肌細胞及成纖維細胞遷移，增殖，轉(zhuǎn)化，啟動新生血管，參與肺血管管壁的重建。

他汀類藥物的“多效性”如抗炎，抗氧化，抑制細胞增殖，誘導細胞凋亡，改善內(nèi)皮功能等[8～9]，近些年被廣泛應用于臨床，研究表明他汀類藥物在肺動脈高壓的治療中起作用，Hemandez等提出他汀能抑制ET-1的表達，從而擴張肺血管，降低血管阻力；Laufs等發(fā)現(xiàn)他汀能誘導細胞周期抑制因子P27而抑制平滑肌細胞的增殖；Nishimura等證實通過抗炎及抑制細胞增殖等作用降低肺動脈壓力，降低新生內(nèi)膜的生成，阻止肺血管重構[10]。綜上所述，他汀類藥物可能通過多種途徑抑制肺血管重建和改善血管舒縮功能降低肺動脈高壓。本實驗通過給予大鼠一次性腹部注射野百合堿誘導建立野百合堿肺動脈高壓模型，通過比對三組小鼠的平均右心室壓力(mRVP)、肺動脈平均壓(mPAP)，右心室肥厚指數(shù)(RVHI)及mcp-1的水平不難推出瑞舒伐他汀鈣可以抑制野百合堿對肺動脈壓力的影響，同時可以下調(diào)mcp-1對肺動脈的作用。實驗結果與預期相符。

[1]HumbertM．Pulmonaryarterialhypertensionandchronicthromboembolicpulmonaryhypertension：pathophysiology[J]．EurRespirRev，2010 ，19 (5 ) ：59-63

[2]AlegretM，SilvestreJS．Pleiotropicefectsofstatinsandrelatedpharmacologicalexperimentalapproaches[J]．MethodsFindExClinPharmaeol，2006 ，28 (2 ) ：627-656

[3]CordleA，Koenigsknecht-TalbooJ，WilkinsonB，etal．Mechanismsofstatin-mediatedinhibitionofsmallG-proteinfunction[J]．JBiolChem，2005 ，280 (3 ) ：34202-34209

[4]CorreaRD，SilvaLC，RezendeCJ，etal.Pulmonaryhypertensionandpulmonaryarterydissection[J].JBrasPneumol，2013，39(2): 238-241

[5]LangerF，SchrammR，BauerM，etal．Cytokineresponsetopulmonarythromboendarterectomy[J]．Chest，2004 ，126 (9 )：135-141

[6]梁闊鵬,黃雪蘭,楊麗麗,等. 斑點追蹤技術聯(lián)合Tei指數(shù)評價肺動脈高壓引起的右心功能改變[J].黑龍江醫(yī)藥科學,2015,38(2):50-51

[7]WeberC，SchoberA，ZemecheA．Oaemokineskeyregulatorsofmono-nuclearcellrecruitmentinatheroselerofievasculardisease[J].Artefio-sclerThrombVascBiol,2004,24(11):1997-2008

[8]張興麗,李娟. 不同劑量瑞舒伐他汀對急性心肌梗死患者CD40L水平的影響[J].黑龍江醫(yī)藥科學,2012,35(6:)61-62

[9]AriyarajahV,DaweDE,KhademA.Istherearoleforstatinsinatrialfibrillation[J].PacingClinElectrophysiol, 2009, 32(8):10632721

[10]NishimuraT,FaulJL,BerryGJ,etal.Simvastatinattenuatessmoothmuscleneointimalproliferationandpulmonaryhypertensioninrats[J].AmJRespirCritCareMed,2002,166(10):1403-1408

葉金玲(1986～)女，黑龍江牡丹江人，在讀碩士研究生。

楊光遠(1975～)男，黑龍江佳木斯人，博士，教授，碩士研究生導師。E-mail:15694548079@126.com。

R

A

1008-0104(2017)02-0116-02

2016-03-04)