B7-H4與RRM2在卵巢腫瘤患者中的表達及臨床意義①

孫盛梅，牟媛媛

(佳木斯大學附屬第一醫院婦產科,黑龍江 佳木斯154003)

B7-H4與RRM2在卵巢腫瘤患者中的表達及臨床意義①

孫盛梅，牟媛媛

(佳木斯大學附屬第一醫院婦產科,黑龍江 佳木斯154003)

目的：探討B7-H4與RRM2在卵巢腫瘤組織中的表達及其臨床指導意義。方法：運用免疫組織化學法測定B7-H4與RRM2蛋白在10例正常卵巢組織、20例卵巢良性腫瘤組織、8例交界性卵巢腫瘤組織以及30例上皮性卵巢癌組織中的表達，并分析二者的相關性。結果：B7-H4與RRM2蛋白在卵巢癌組陽性表達率顯著高于正常組、良性組、交界組，差異有統計學意義(P<0.01)。B7-H4的表達與病理分期、組織分化及組織類型相關，差異有統計學意義(P<0.05)。RRM2的表達與淋巴結轉移、臨床分期、細胞分化有關，差異有統計學意義(P<0.05)。結論：①B7-H4與RRM2的高表達與上皮性卵巢癌的發生有關；②B7-H4與RRM2對上皮性卵巢癌具有協同性表達作用；③上皮性卵巢癌分期越晚、分化越差，B7H4與RRM2表達越高。

B7-H4；RRM2；卵巢腫瘤；免疫組織化學

隨著社會經濟的發展和國家醫療政策的完善，人們對健康意識的概念越來越強，由原來的治病到防患于未然。對女性來說，健康的最大威脅是生殖系統的腫瘤疾病，其中卵巢的腫瘤最為常見，其致死率最高的要屬上皮性卵巢惡性腫瘤[1]，了解卵巢惡性腫瘤的發病機制和尋求有效的腫瘤免疫標記物，對于改善卵巢腫瘤患者的預后具有積極的意義。在抵抗腫瘤細胞中具有顯著意義的是T系淋巴細胞，B7家族是T淋巴細胞的協同刺激因子，與T細胞的結合位點是其細胞表面的相應受體[2]，作用機制是以活化T細胞和細胞耐受通過向T細胞輸送協同刺激信號。研究者采用生物信息學的途徑發現T淋巴細胞的協同刺激因子的新成員—B7-H4。B7-H4可以抑制增殖T細胞，阻斷細胞生長周期，還能弱化甚至抑制某些細胞因子的釋放以減少細胞的凋亡，研究還表明B7-H4在腫瘤上皮細胞內的高表達還可促進細胞上皮的惡性轉歸。卵巢癌的發生發展決定于多基因，其組織類型和臨床分期與治療手段和預后緊密相關[3]。在基因中DNA的合成過程中核糖核苷酸還原酶(ribonucleotidereductase，RR)是關鍵酶，該酶對細胞分裂、增殖及分化具有至關重要的意義，更有助于細胞的生存。RRM2不僅具有RR的活性，也是該酶組成的重要部分，與一系列癌基因均有協同作用，共同促進細胞轉化及腫瘤形成。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 對象及標本

選取我院2014-06～2015-12入住婦產科的患者卵巢組織標本共68例，其中10例正常卵巢組織，20例卵巢良性腫瘤組織，8例交界性卵巢腫瘤組織以及30例上皮性卵巢癌組織?；颊咝g前未做任何治療并排除其他系統腫瘤疾病。所有患者的臨床資料均詳細完整，年齡16～68歲。 病理診斷均經病理科醫師證實，所有標本取下后常規固定等程序后備用。

1.1.2 實驗用品

兔抗人B7-H4抗體及兔抗人RRM2抗體，超凈工作臺，恒溫箱，顯色劑，抗體稀釋液。

1.2 實驗方法1.2.1 免疫組化步驟

通過病歷號選取病理科存檔的蠟塊切片脫蠟、封閉、滴加兔抗人B7-H4、RRM2，然后加二抗，顯色，復染，最后脫水、封片。陽性參照物為已知的卵巢癌切片，PBS代替一抗作為陰性對照。

1.2.2 結果判定

B7-H4蛋白在卵巢組織中主要有細胞漿及細胞膜陽性表達，B7-H4染色分析計數：全面觀察每張切片，以細胞漿內、細胞膜上出現棕黃色顆粒為評判標準。根據陽性細胞所占比例判定，陽性細胞<10%者為(-)，10%～25%者為(+)，26%～50%者為()，>50%為()。RRM2主要有胞漿陽性表達，最終判定：染色陽性細胞占計數細胞比例<25%者為(-)，26%～50%者為(+)，51%～75%者為()，>75%為 ()。

1.3 統計學方法

采用SPSS17.0統計軟件處理，B7-H4與RRM2表達情況采用方差分析，各相關因素比較用秩相關，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1B7-H4在卵巢腫瘤和正常卵巢組織中的表達

B7-H4蛋白主要有細胞漿及細胞膜陽性反應。B7-H4在正常卵巢組織、卵巢良性腫瘤組織、卵巢交界性腫瘤組織及卵巢癌組織中比較差異有統計學意義(χ2=35.818，P<0.01)見表1。

表1 卵巢腫瘤組織和正常卵巢組織中B7-H4的表達情況(例)

2.2RRM2在卵巢腫瘤和正常卵巢組織中的表達

RRM2主要有胞漿陽性反應。RRM2在正常卵巢組織、卵巢良性腫瘤組織、卵巢交界性腫瘤組織及卵巢癌組織中比較差異有統計學意義(χ2=31.719，P<0.01)見表2。

2.3B7-H4及RRM2在上皮性卵巢癌組織中的表達情況

根據免疫組化結果及統計學分析，B7-H4表達的高低與臨床分期(χ2=5.963，P<0.05)、組織分化(χ2=4.802，P<0.05)、組織類型(χ2=5.487，P<0.05)有關，而與年齡(χ2=1.06，P>0.05)及淋巴結轉移(χ2=0.215，P>0.05)無關。RRM2表達與臨床分期(χ2=5.834，P<0.05)、組織分化(χ2=6.429，P<0.05)、淋巴結轉移(χ2=4.537，P<0.05)有關，而與年齡(χ2=0.023，P>0.05)及組織類型(χ2=0.085，P>0.05)無關，見表3。

表2 卵巢腫瘤組織和正常卵巢組織中RRM2的表達情況(例)

表3 B7-H4及RRM2在上皮性卵巢癌組織中的表達情況

2.4 上皮性卵巢癌組織中B7-H4與RRM2之間的關系

經分析B7-H4與RRM2表達正相關(r=0.558，P<0.01)。見表4。

表4 皮性卵巢癌組織中B7-H4和RRM2表達的關系

3 討論

在女性生殖系統腫瘤中，致死率最高的是卵巢惡性腫瘤，組織類型最常見的是上皮性卵巢癌。盡管常規健康普查日趨完善，以外科手術為主以及化學治療等輔助治療技術的實施，但患者的死亡的主要原因是病變的復發以及轉移，使其病死率一直居高不下。最主要的原因就是缺乏早期臨床診斷標志物，75%患者被診斷為卵巢癌時，腫瘤已浸潤至卵巢外[4]，為發展至臨床分期的Ⅲ期或Ⅳ期，5年存活率僅為5%～20%。假如卵巢腫瘤惡性病變僅局限于卵巢，通過手術等治療，5年存活率可高至85%～95%，所以探索為之有效的卵巢癌臨床診斷標志物已成為熱點。

B7-H4負反饋于T細胞主要是經過對T細胞的增殖受到抑制、影響細胞因子(如IL-2等)的生長和調節細胞生長周期來實現。加強B7-H4蛋白表達可能導致腫瘤免疫因子逃逸從而與卵巢癌的發生發展有關[5]，B7-H4有可能是促癌基因。卵巢癌的發病機制復雜，可能由多基因的行為改變和遺傳學的異常決定，與組織細胞的分裂、增殖及分化密切相關[6]，脫氧核糖核酸參與了這一系列的生物行為，RRM2是脫氧核糖核酸的關鍵酶核糖核苷酸還原酶的重要組成成分，其作用是促使其細胞轉化和形成腫瘤細胞。

目前，卵巢癌的發病率呈逐年遞增趨勢，但臨床診斷率卻仍較低，研究其發病機制及探索其有效的診斷免疫標志物刻不容緩。根據p53信號通路的參考途徑，RRM2的位點位于p53信號通路中下游分支，研究表明B7H4和p53的聯合檢測更有助于胃癌等腫瘤的診斷，通過實驗證明RRM2在卵巢腫瘤的表達，以及RRM2和B7H4對卵巢腫瘤的診斷的相關性可大大提高卵巢惡性腫瘤的檢出率。這不僅僅可以提高患者的生存率，更對該病的臨床診療及其預后提供新的思路，更有益于女性的生命健康。

[1]謝幸，茍文麗.婦產科學[M].第8版.北京：人民衛生出版社，2013:321-333

[2]潘建立，牛清華.B7-HE、P53、CEA在胃癌中的表達及臨床意義[J].中國醫療前沿，2010，5(23)：39-40

[3]OikonomopoulouK,LiL,ZhengY,etal.Predictionofovariancancerprognosisandresponsetochemotherapybyaserumbasedmultiparametricbiomarkerpanel[J].BrJCancer,2008,99(7):1103-1113

[4]徐佳佳，吳英杰.70例老年婦女卵巢癌患者臨床分析[J]. 黑龍江醫藥科學，2014， 37(1)：36-37

[5]FurutaE，OkudaH，KobayashiA，eta1．Metabolicgenesincancer：theirrolesintumorprogressionandclinicalimphca—tions[J]．BiochimBiophysActa，2010，1805(2)：14t-152

[6]劉莉霞，李術平，何秀萍.Survivin蛋白在卵巢癌組織中的表達及臨床意義[J].黑龍江醫藥科學，2014， 37(2)：29-31

孫盛梅(1966～)女，黑龍江佳木斯人，碩士，主任醫師，碩士研究生導師。

牟媛媛(1989～)女，黑龍江蘿北人，在讀碩士研究生。E-mail：1015661755@qq.com。

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1008-0104(2017)02-0100-02

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