豬毛蒿不同炮制方法炮制前后化學成分變化

吳懷墨 袁榮賢 張霞 龍澍普 李明 劉華 安鈺 陳靖

摘要[目的]研究豬毛蒿不同炮制方法炮制前后水提取物、醇提取物含量、揮發性成分以及綠原酸含量差異，為尋找豬毛蒿炮制方法奠定基礎。[方法]以重量法測定水提取物、醇提取物含量，GC-MS/MS測定揮發性成分，HPLC-UV測定綠原酸含量。[結果]與生品相比，曬干品的水、醇提取物含量均顯著下降；烘干品水提取物含量下降，而醇提取物含量提高；陰干品無顯著差異。GC-MS/MS分析不同炮制品中揮發性成分，從生品、陰干、曬干、烘干品中分別檢出25、21、27、24個色譜峰，共有的組分有13個，且豬毛蒿炮制前后既有含量的改變，也有不同結構的成分出現，曬干與生品差距最大；HPLC-UV方法測定了綠原酸含量，發現炮制后均顯著下降，含量從大到小依次為生品、陰干、曬干、烘干。[結論]豬毛蒿在加工過程中應盡量采用陰干方法，以防止有效成分損失。

關鍵詞豬毛蒿；炮制方法；化學成分；HPLC-UV；GC-MS/MS

中圖分類號R283.1文獻標識碼A文章編號0517-6611（2017）35-0111-05

Abstract[Objective] The research aimed to study the difference of water extract， alcohol extract content， volatile component and chlorogenic acid content before and after the processing of Artemisia scoparia in different processing methods， which laid the foundation for searching the method of processing Artemisia scoparia.[Method]The gravimetric method was used to determine the water and alcohol extract content. GCMS/MS method was applied to determine the volatile component and HPLCUV assay was used to determine the chlorogenic acid content.[Result]Compared with the crude materials， the water and alcohol extracts in the products dried in the sun decreased significantly；the content of water extract of dried product decreased， but the content of alcohol extract increased；there was no significant difference between crude and dried in the shade. GCMS/MS analysis of volatile components in different processed products，25， 21， 27， and 24 peaks were respectively detected in crude， dried in the shade， in the sun and in the drying oven， 13 mutual peaks were found in the four materials，and Artemisia scoparia before and after processing both the content of the change， there were also different components of the structure， the difference between dried in the sun and crude was the biggest.Content of chlorogenic acid determined by HPLCUV method，that found the content was decreased significantly after processing，the content in the order below： crude>dried in the shade>dried in the sun>dried in the drying oven.[Conclusion]Artemisia scoparia shall be dried in the shade during the process in order to avoid the loss of the effective components.

Key wordsArtemisia scoparia Waldst. et Kit.；Processing method；Chemical components；HPLCUV；GCMS/MS

豬毛蒿（Artemisia scoparia Waldst.et Kit.）為菊科（Compositae）蒿屬植物，《藥典》中記載為濱蒿[1]（西北省區俗稱），作為茵陳入藥，又名石茵陳、山茵陳、西茵陳、北茵陳等，維吾爾語名為“亞布泉”，藏語名為“阿仲”，青海藏語名為“察爾旺”。全草含揮發油[2-4]、綠原酸、對-羥基苯乙酮和大黃素等[5]。其中綠原酸具有廣泛的抗菌作用，有利膽、止血、增高白血球及抗病毒等藥理作用[6-7]。豬毛蒿臨床上可治療黃疸型肝炎、膽囊炎、小便色黃不利、濕瘡瘙癢、濕溫初起，作為蒙藥用治肺熱咳嗽、喘證、肺膿腫、感冒咳嗽、“搏熱”、咽喉腫痛。但豬毛蒿炮制方法的研究較少，《藥典》中僅記載“除去殘根和雜質，搓碎或切碎。綿茵陳篩去灰屑”[1]，而不同干燥方法對豬毛蒿化學成分的影響尚不明確。為此，筆者比較了豬毛蒿生品、陰干品、曬干品、烘干品中水提取物、醇提取物、揮發性成分及指標性成分綠原酸含量差異，為豬毛蒿飲片炮制研究奠定基礎。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1新鮮豬毛蒿樣品采集。

2016年5月采于寧夏地區鹽池沙邊子，經寧夏大學李吉寧副教授鑒定為豬毛蒿（Artemisia scoparia Waldst.et Kit.）的干燥地上部分。

1.1.2試驗儀器。

超聲波清洗器（Q-500E型，昆山市超聲儀器有限公司）；水浴鍋（北京長源實驗設備廠）；電子天平（AL204，梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；旋轉蒸發儀（RE-52AA型，上海亞榮生化儀器廠）；GC-MS QP2010氣質聯用儀（日本島津）；多功能粉碎機（濰坊市精華粉體工程設備有限公司）；高效液相色譜儀（日立2000型，天美中國科學儀器有限公司）；超純水機（64132型，美國Labcone corporation公司）；循環水多用真空泵（AKB-Ⅲ型，鄭州長城科工貿有限公司）；電熱鼓風干燥箱（GHG-9075A型，上海一恒科學儀器有限公司）。

托盤、錐形瓶、移液槍、有機系微孔過濾器（0.45 μm）、漏斗、濾紙、紗布、抽濾裝置。

1.1.3試驗試劑。

蒸餾水；無水乙醇（天津市大茂化學試劑廠，分析純）；石油醚（天津市大茂化學試劑廠，分析純）；超純水（自制）；磷酸（天津市大茂化學試劑廠，分析純）；甲醇（德國默克公司，色譜純）、正己烷（天津康科德科技有限公司，色譜純）；綠原酸對照品（批號110753-201415，純度大于98%，中國食品藥品檢定研究院）。

1.2方法

1.2.1豬毛蒿不同炮制品制備。

取采收的藥材適量，除去雜質、殘根，搓碎或切碎，篩去灰屑，備用，得到豬毛蒿生品。

將藥材置于流水下快速清洗去泥土，潔凈的藥材置于托盤中，上蓋一層濕潤紗布，悶潤8 h，根切薄片（1～2 mm），莖切段（10～15 mm）。將凈選切制后的藥材分別置于陰涼通風處干燥（7.6 h）、室外曝曬（4.3 h）、烘箱烘干（60 ℃，2.1 h），篩去灰屑備用，分別得到陰干品、曬干品、烘干品。

1.2.2不同炮制品醇/水提取物含量比較。

1.2.2.1水提取物制備。

分別精密稱取豬毛蒿不同炮制品3 g，各6份，置于具塞三角瓶中，加入15 mL蒸餾水，超聲提取20 min；提取3次，合并濾液，置于預先精密稱定的蒸發皿中（m1），水浴上蒸至完全干燥，再次精密稱重（m2），m1與m2之差即為水提取物量。

1.2.2.2醇提取物制備。

方法同“1.2.2.1”，以70%乙醇代替蒸餾水，制得醇提取物。

1.2.3GC-MS/MS分析不同炮制品揮發性類成分。

1.2.3.1藥材前處理。

精密稱取豬毛蒿不同炮制品各5 g，置于具塞錐形瓶中，加入50 mL石油醚，置于超聲清洗器中超聲15 min，提取液于旋轉蒸發儀上回收溶劑，并用正己烷溶解提取物，GC-MS/MS分析不同炮制品揮發性成分[2-4]。

1.2.3.2色譜條件。

日本島津公司GC-9A型氣相色譜儀，色譜柱為DB-51（30 mm × 0.25 mm，0.25 μm）彈性石英毛細管柱，升溫條件：初始溫度60 ℃，保持12 min后，以6 ℃/min的速率升溫至260 ℃，并保持30 min。載氣He，分流比1∶30，柱前壓49 kPa，氣化室和檢測器溫度均為280 ℃。

1.2.3.3質譜條件。

離子源溫度200 ℃，電力電壓70 Ev，掃描質量范圍30～400 AEU，掃描方式EI源，掃描間隔0.5 s。

1.2.4不同炮制品中綠原酸含量差異。

1.2.4.1色譜條件[8]。

色譜柱為Eclipse XDB-C18（4.6 mm× 250 mm，5 μm），甲醇-水-磷酸（26.0∶74.0∶0.1）為流動相，流速為1 mL/min，檢測波長為327 nm，柱溫為25 ℃；進樣量20 μL。

1.2.4.2對照品溶液的制備。精密稱取綠原酸對照品5.06 mg，置100 mL棕色容量瓶中，加50%甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，得到50.6 μg/mL標準品母液，備用。

1.2.4.3供試品溶液的制備。取各炮制品粉末（過四號篩）0.3 g，各6份，精密稱定，置具篩錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，稱定重量，回流提取30 min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇足補減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液1 mL，置10 mL棕色量瓶中，加流動相定容至刻度，搖勻，即得。

1.2.4.4標準曲線的繪制。分別精密吸取標準品儲備液05、1.0、2.0、4.0、5.0 mL，置10 mL棕色容量瓶中，加50%甲醇定容至刻度，搖勻，即得濃度分別為2.53、5.06、10.12、2024、25.30 μg/mL的標準品系列溶液。分別進樣20 μL，以標準品濃度為橫坐標（X）、峰面積為縱坐標（Y），繪制標準曲線。

1.2.4.5精密度試驗。精密吸取濃度為5.06、10.12、20.24 μg/mL的質控溶液（Quality Control，QC）對照品溶液20 μL，分別于同日內的第1、2、4、6、8小時進樣，測得峰面積值，計算日內精密度（RSD）和準確度（RE）；并分別于第1、2、3天進樣，測得峰面積值，計算日間精密度（RSD）和準確度（RE）。

1.2.4.6穩定性試驗。取生品粉末（過四號篩）約0.3 g，按“1.2.4.3”方法制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液20 μL，分別于第0、2、4、8、12小時進樣，計算RSD。

1.2.4.7重復性試驗。精密稱取樣品0.3 g，各3份，按“12.4.3”項下供試品處理方法，測定峰面積，計算RSD。

1.2.4.8加樣回收率試驗。精密稱取已知含量的樣品粉末，分別加入精密穩定的綠原酸對照品溶液適量，按“1.2.4.3”方法制備供試品溶液9份，進行HPLC-UV測定，計算平均加樣回收率及RSD。

1.2.4.9綠原酸含量差異比較。精密稱取不同炮制品樣品0.3 g，各6份，按“1.2.4.3”項下供試品處理方法，測定峰面積，計算RSD值，比較不同炮制方法對綠原酸含量的影響。

1.3統計方法

采用Student T-Test進行統計學分析。

45卷35期吳懷墨等豬毛蒿不同炮制方法炮制前后化學成分變化

2結果與分析

2.1水提取物含量差異比較

從表1可看出，豬毛蒿不同炮制品水提取物含量從大到小依次為生品、陰干、烘干、曬干。

2.2醇提取物含量差異比較

從表2可看出，豬毛蒿不同炮制品水提取物含量從大到小依次為烘干、生品、陰干、曬干。

2.3不同炮制品GC-MS/MS分析

從表3和圖1可以看出，從生品中共檢出25個色譜峰，陰干品21個、曬干27個、烘干24個，4種炮制品共有的組分有13個，含量存在顯著差異，其中環己基二甲基氯硅烷、十七烷、角鯊烯、四十四烷在陰干、曬干、烘干3種炮制品均比生品含量增加；二十碳烷以陰干、曬干含量較高；其余8個組分大部分以生品為最高。生品與陰干、曬干、烘干3種炮制品相比，既存在量的改變，也存在質的改變，各組均有其他組不含有的新成分產生，結果表明豬毛蒿水處理和干燥過程中揮發性成分發生了顯著的變化，可能影響藥材內在質量和藥效。

2.4不同炮制品綠原酸含量測定

2.4.1

標準曲線的繪制。綠原酸HPLC-UV色譜圖如圖2所示，在“1.2.4.1”的色譜條件下綠原酸的測定無干擾。標準曲線回歸方程為Y=0.043X + 0.78（r=0.999 8），表明綠原酸在2.53～25.30 μg/mL線性良好。

2.4.2精密度試驗。按照“1.2.4.5”操作，測得日內RSD為1.34%，RE為2.45%；日間RSD為1.96%，RE為2.98%，表明儀器精密度良好。

2.4.3穩定性試驗。按照“1.2.4.6”操作，測得RSD為078%，表明供試品溶液在12 h內穩定。

2.4.4重復性試驗。按照“1.2.4.7”操作，測得RSD為198%，表明方法重復性良好。

2.4.5加樣回收率試驗。由表4可知，測得平均加樣回收率為99.8%，RSD為2.29%。

2.4.6

不同炮制品綠原酸含量差異比較。試驗結果表明，與生品相比，豬毛蒿炮制后綠原酸含量均顯著下降，其中烘干品含量下降37.1倍，陰干品下降22.5倍，曬干品下降了24.7倍，綠原酸含量從大到小依次為生品（1.260%）、陰干（0.056%）、曬干（0.051%）、烘干（0.034%），表明水處理及不同干燥過程中綠原酸損失較大，陰干干燥方法比曬干、烘干好。

3結論與討論

（1）豬毛蒿生品與陰干品水提取物和醇提取物含量差異不顯著，曬干品二者含量均顯著下降；烘干品水提取物含量下降，但醇提物含量與生品、陰干、曬干品相比，分別顯著提高了13.9、16.6、22.8倍（P<0.05）。

（2）GC-MS/MS分析結果顯示，從生品、陰干、曬干、烘干品中分別檢出25、21、27、24個色譜峰，共有的組分有13個，且不同炮制品的揮發性成分組成有顯著差異，既有量的改變，也有不同的新成分出現，其中曬干與生品差距最大，其次是烘干，最后是陰干。

（3）與生品相比，陰干、曬干、烘干品中的綠原酸含量均顯著下降了幾十倍，這可能與水處理過程中綠原酸溶于水損失以及強光、熱不穩定，加熱使其分解有關，因而豬毛蒿在加工過程中應盡量采用陰干方法進行干燥，以防止有效成分損失，使藥效下降。

參考文獻

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：2015版一部[S].北京：中國醫藥科技出版社，2015：239-240.

[2] 劉洪玲，董巖.艾蒿和豬毛蒿揮發油化學成分對比研究[J].時珍國醫國藥，2007，18（4）：832-833.

[3] 鄭維發，譚仁祥，劉志禮，等.八種蒿屬植物石油醚提取物中萜類成分分析[J].南京大學學報，1996，32（4）：706-712.

[4] 董巖，劉洪玲，王新芳.山東豬毛蒿揮發油化學成分的氣相色譜-質譜研究[J].中成藥，2006，28（11）：1641-1644.

[5] 南京中醫藥大學.中藥大辭典：下冊[M].2版.上海：上海科學技術出版社，2006.

[6] 張鞍靈，馬瓊，高錦明，等.綠原酸及其類似物與生物活性[J].中草藥，2001，32（2）：173-176.

[7] 高錦明，張鞍靈，趙曉明，等.綠原酸分布、提取與生物活性研究綜述[J].西北林學院學報，1999，14（2）：73-82.

[8] 尼瑪次仁，格桑頓珠，格桑次仁，等.HPLC法測定藏藥豬毛蒿中綠原酸的含量[J].中國民族醫藥雜志，2009（4）：51-52.