苦參堿聯合胸腺肽對慢性乙型肝炎患者血清Foxo3a、INF-α、HBV-DNA水平及T細胞亞群的影響

唐海峰，朱素楠

(開封市傳染病醫院一病區1、檢驗科2，河南開封475001)

苦參堿聯合胸腺肽對慢性乙型肝炎患者血清Foxo3a、INF-α、HBV-DNA水平及T細胞亞群的影響

唐海峰1，朱素楠2

(開封市傳染病醫院一病區1、檢驗科2，河南開封475001)

目的研究苦參堿聯合胸腺肽對慢性乙型肝炎(CHB)患者血清叉頭盒O類轉錄因子-3a(Foxo3a)、干擾素-α(INF-α)、乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)水平及T細胞亞群的影響。方法將2013年4月至2016年4月于我院接受治療的94例CHB患者，采用隨機數表法分為對照組和觀察組，每組47例，對照組給予常規治療+苦參堿注射液治療，觀察組給予常規治療+苦參堿+胸腺肽注射液治療，治療1個月，比較兩組患者治療前后的血清Foxo3a、INF-α、HBV-DNA水平及T細胞亞群的變化。結果治療后，兩組患者的谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)、膽紅素(TBil)、凝血酶原時間(PT）水平均明顯下降，白蛋白明顯上升，且觀察組治療后的上述指標改善優于對照組，差異均有統計學意義(P＜0.05)；觀察組患者的HBV-DNA陰轉率為51.06%，乙肝病毒e抗體（HBeAb）陽轉率為51.06%，乙肝e抗原（HBeAg）陰轉率為46.81%，而對照組則分別為23.40%、23.40%、27.66%，兩組比較差異均有統計學意義(P＜0.05)；Foxo3a mRNA表達水平、INF-α、甲胎蛋白(AFP)含量均明顯下降(P＜0.05)，且觀察組下降幅度明顯高于對照組，差異均有統計學意義(P＜0.05)；對照組患者的T細胞亞群指標治療前后無明顯變化(P＞0.05)，而觀察組患者治療后的CD3+、CD4+明顯上升，CD8+明顯下降，CD4+/CD8+比值明顯上升，與對照組比較差異均有統計學意義(P＜0.05)；治療后，兩組患者的尿黃、鈉減、腹脹、乏力、肝區隱痛癥狀均明顯改善，且觀察組改善率高于對照組，差異均有統計學意義(P＜0.05)；兩組患者均未出現明顯不良反應。結論苦參堿聯合胸腺肽治療CHB患者可顯著降低Foxo3a、INF-α、HBV-DNA水平，改善肝功能，改善臨床癥狀，提高免疫力。

慢性乙型肝炎；苦參堿；胸腺肽；Foxo3a；INF-α；T細胞亞群

乙型肝炎病毒(HBV)是引起乙型肝炎病變的罪魁禍首，肝功能損傷可引起體內多種臟器功能紊亂，據報道，乙肝具有世界流行趨勢，而我國慢性HBV感染者已達9 300萬人[1]。目前有關乙肝的治療主要集中在抗病毒、護肝降酶、提升免疫力方面，尚無特效治愈藥物[2]。苦參堿具有抗HBV病毒、對抗肝功能損傷和抗纖維化作用[3]。劉曉瓊等[4]應用4種類型苦參堿治療慢性乙型肝炎(CHB)患者，發現其抗HBV效果顯著。毛莉萍等[5]應用苦參堿治療CHB肝纖維化患者，發現苦參堿可通過上調NKG2D表達而發揮抗腫瘤作用。胸腺肽是一類生物反應調節劑，調節免疫、抗病毒作用顯著，許多研究表明，胸腺肽α1在治療重癥肝炎過程中，可促進干擾素-α、干擾素-γ、白介素-2等抗炎因子表達，抑制炎癥反應，緩解肝功能損傷[6]。本文旨在研究苦參堿聯合胸腺肽對CHB患者血清叉頭盒O類轉錄因子-3a(Foxo3a)、干擾素-α(INF-α)、乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)水平及T細胞亞群的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料將2013年4月至2016年4月于我院接受治療且符合以下納入和排除標準的94例CHB患者，采用隨機數表法分為對照組和觀察組，每組47例。對照組患者中男性27例，女性20例；年齡(39.45± 8.51)歲，病程(6.51±4.51)年；臨床分型輕度20例，中度15例，重度12例。觀察組患者中男性26例，女性21例；年齡(38.81±7.91)歲，病程(6.12±5.51)年；臨床分型輕度21例，中度16例，重度10例。兩組患者的一般資料比較差異均無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 診斷標準根據中華醫學會肝病學分會《慢性乙型肝炎診斷標準(2015年版)》[7]以及《慢性乙型肝炎防治指南(2015年更新版)》[8]進行診斷。

1.3 納入與排除標準①納入標準：所有患者經診斷確定為CHB患者；HBsAg和HBeAg陽性，HBV-DNA大于106～107copies/mL者；未服用抗病毒類藥物及免疫調節類藥物時間大于半年者；簽署知情同意書，自愿參與本治療方案者。②排除標準：合并深度肝昏迷者；HBeAg陰性者；合并其病毒性肝炎患者；合并惡性腫瘤者；有嚴重心、腎、腦或免疫系統類疾病者；對本研究用藥過敏者；妊娠及哺乳期婦女。

1.4 治療方法所有患者均接受阿拓莫蘭(重慶藥友制藥有限責任公司，國藥準字H20051599)、甘草酸二銨(重慶華森制藥有限公司，國藥準字H20051643)保肝抗炎治療，安絡化纖丸(森隆藥業有限公司，國藥準字Z20010098)健脾養肝治療，恩替卡韋(中美上海施貴寶制藥有限公司，國藥準字H20052237)抗乙肝病毒治療，維生素、能量合劑等常規乙肝治療。對照組患者在此基礎上給予苦參堿葡萄糖注射液(美愈寧，北京華靳制藥有限公司，250 mL：苦參堿0.15 g與葡萄糖25 g)治療，劑量150 mg/次，1次/d。觀察組在對照組基礎上增加胸腺肽注射液(三九集團昆明白馬制藥有限公司，國藥準字H20044088，5 mL：50 mg)治療，劑量80 mg/次，溶于生理鹽水中靜脈滴注，1次/d。兩組均治療1個月。

1.5 觀察指標①肝功能指標：于治療前后每兩周檢測所有患者血清谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)、膽紅素(TBil)、凝血酶原時間(PT)和白蛋白水平變化；②HBV標記物：乙肝病毒e抗體(HBeAb)與HBeAg采用酶聯免疫吸附法檢測，HBV-DNA采用熒光定量PCR法檢測，治療前后每個月檢測一次；③Foxo3a、INF-α和甲胎蛋白(AFP)檢測：Foxo3a mRNA相對表達量采用熒光定量PCR法檢測；INF-α與AFP均采用酶聯免疫吸附法檢測；④T細胞亞群檢測：采用流式細胞儀檢測患者外周血CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+，CD系統單克隆抗體購自賽默飛公司；⑤臨床癥狀改善：觀察并記錄兩組患者治療前后尿黃、鈉減、腹脹、乏力、肝區隱痛狀況改善情況；⑥觀察兩組不良反應情況。

1.6 統計學方法應用SPSS19.0統計軟件進行數據分析，計量資料以均數±標準差()表示，組間比較采用t檢驗，計數資料組間比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者的肝功能指標比較治療后，兩組患者的ALT、AST、TBil、PT均顯著下降，白蛋白水平顯著上升，且觀察組下降或上升幅度明顯高于對照組，差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表1。

表1 兩組患者治療前后的肝功能指標比較()

表1 兩組患者治療前后的肝功能指標比較()

注：與對照組治療后比較，t值分別為8.12、11.54、10.52、9.14、23.25，aP＜0.05。

組別對照組例數47觀察組47時間治療前治療后t值P值治療前治療后t值P值ALT(U/L) 302.4±64.6 69.5±12.4 24.27＜0.01 294.9±55.8 51.2±9.2a29.54＜0.01 AST(U/L) 294.4±74.6 58.2±7.2 21.61＜0.01 287.9±76.8 42.2±6.2a21.86＜0.01 TBil(μmol/L) 87.6±75.4 53.8±9.5 3.04＜0.01 84.6±88.3 33.5±9.2a3.94＜0.01 PT(s) 19.8±2.6 16.1±1.2 8.86＜0.01 19.5±2.6 14.1±0.9a13.46＜0.01白蛋白(g/L) 26.5±3.6 34.5±1.2 14.45＜0.01 26.4±3.1 40.5±1.3a28.76＜0.01

2.2 兩組患者治療前后的HBV標記物比較治療后，觀察組患者的HBV-DNA陰轉率為51.06%，HBeAb陽轉率為51.06%，HBeAg陰轉率為46.81%，而對照組則分別為23.40%、23.40%、27.66%，兩組之間比較差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表2。

表2 兩組患者治療前后HBV標記物比較[例(%)]

2.3 兩組患者治療前后的Foxo3a、INF-α、AFP水平比較治療后，Foxo3a mRNA表達水平、INF-α、AFP含量均顯著下降，且觀察組下降幅度顯著高于對照組，差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表3。

表3 兩組治療前后的Foxo3a、INF-α、AFP水平比較()

表3 兩組治療前后的Foxo3a、INF-α、AFP水平比較()

注：與對照組治療后比較，t值分別為11.41、7.63、2.33，aP＜0.05。

組別對照組(n=47)觀察組(n=47) AFP(ng/mL) 254.5±154.3 93.5±104.5 4.89＜0.01 241.8±153.4 45.6±94.6a7.46＜0.01時間治療前治療后t值P值治療前治療后t值P值Foxo3a mRNA表達0.56±0.08 0.34±0.06 15.08＜0.01 0.55±0.09 0.21±0.05a22.64＜0.01 INF-α(IU/mL) 36.51±6.57 22.51±5.14 11.51＜0.01 37.15±5.27 13.51±6.24a19.84＜0.01

2.4 兩組患者治療前后的T細胞亞群比較治療后，對照組患者的T細胞亞群指標差異無統計學意義(P＞0.05)，而觀察組患者的CD3+、CD4+顯著上升，CD8+顯著下降，CD4+/CD8+比值顯著上升，兩組比較差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表4。

2.5 兩組患者治療前后的臨床癥狀比較伴有尿黃、鈉減、腹脹、乏力、肝區隱痛癥狀的患者經過治療后，癥狀得到顯著改善，且觀察組改善率高于對照組，差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表5。

表4 兩組患者治療前后的T細胞亞群比較()

表4 兩組患者治療前后的T細胞亞群比較()

注：與對照組治療后比較，t值分別為10.82、5.51、11.72、5.73，aP＜0.05。

治療前治療后t值P值治療前治療后t值P值對照組(n=47)+觀察組(n=47) 67.5±2.41 68.5±2.62 0.57＞0.05 67.2±2.13 74.6±2.84a14.29＜0.01 42.81±2.32 42.92±2.64 0.06＞0.05 42.51±2.43 45.59±2.01a6.70＜0.01 33.52±1.25 32.04±1.28 1.72＞0.05 33.51±2.04 29.21±1.05a12.85＜0.01 1.26±0.29 1.27±0.31 0.05＞0.05 1.27±0.28 1.54±0.09a6.29＜0.01

表5 兩組患者治療前后的臨床癥狀比較[例(%)]

2.6 兩組患者的不良反應比較兩組患者治療過程中未出現發燒、脫發、心腎損傷、骨髓抑制等不良反應。

3 討論

HBV病毒的不斷復制增殖是慢性CHB患者不能痊愈的主要原因，雖然目前干擾素、核苷類藥物等有明顯的抗病毒療效，但并不能徹底根除HBV[9]。且干擾素類藥物副作用較大，費用昂貴，故臨床急需尋找安全有效的治療藥物[10]。苦參堿具有抗HBV、抗肝纖維化、免疫調節、抗炎等作用，可逆轉或阻止肝纖維化的進一步發展[11]。毛莉萍等[5]臨床結果證明苦參堿能夠改善CHB肝纖維化狀態，提高患者免疫力。劉曉瓊等[4]臨床試驗證實苦參堿可降低CHB患者高HBV-DNA含量。胸腺肽調節機體免疫、抗病毒作用顯著，文獻報道，胸腺肽在治療重癥肝炎過程中，可抑制損傷肝細胞的炎癥反應，提高患者存活率[6]。本研究應用苦參堿聯合胸腺肽，從抗病毒與提升患者免疫方面治療CHB患者，發現效果顯著。

本研究中，治療后觀察組肝功能五項指標改善優于對照組，HBV-DNA陰轉率、HBeAb陽轉率和HBeAg陰轉率顯著高于對照組，說明苦參堿聯合胸腺肽改善肝功能和抗病毒效果顯著。苦參堿的主要有效成分-氧化苦參堿，占98%以上，是《慢性乙型肝炎防治指南》唯一推薦的抗病毒中藥，具有降膽紅素退黃疸、降轉氨酶、抗病毒、提升白細胞等作用[8]。胸腺肽提高機體免疫效果顯著，兩藥聯合使用可明顯促進體內肝功能五項指標的恢復。抗病毒方面，苦參堿主要從降解病毒產物、干擾病毒增殖兩方面進行，降解病毒與其促進細胞內干擾素類細胞因子表達有關，而干擾HBV增殖與其嘌呤類化學結構有關[4-5]；胸腺肽可增強患者自然殺傷細胞活性，促進白介素-2等細胞因子表達，促進HBV病毒凋亡[6]，故兩藥聯用抗病毒效果比單用苦參堿效果顯著。Foxo3a的表達與乙肝患者肝細胞和組織損傷有關，文獻報道，Foxo3a可能通過增強HBV增強子Ⅰ區活性促進乙肝病毒復制增殖[12]。INF的大量分泌，可與機體內毒素反應，誘導體內炎癥反應，導致肝臟局部微循環障礙[13]。AFP反映患者肝臟損傷情況，其表達量與肝功能損傷程度呈正比，是CHB臨床預后檢測指標[14]。經過治療后，該三項指標均顯著下降，說明患者體內HBV得到抑制，炎癥反應得到減輕，肝功能損傷得到緩解。胸腺肽屬于免疫增強劑之一，能夠有效刺激體內T細胞免疫應答[15]。本研究患者應用胸腺肽治療后，T細胞亞群指標得到顯著改善，與對照組比較差異無統計學意義，說明兩藥聯合治療乙肝患者，療效較好。文獻報道，肝細胞受損，不一定與HBV的大量復制有關，而可能與機體內毒素血癥及免疫力亢進相關，過激的免疫反應及血癥均可引起肝細胞缺氧缺血凋亡，故應用免疫調節類藥物進行早期干預尤為必要。因為它不僅可降低炎癥反應，減輕肝細胞損傷，還可穩定溶酶體膜，抵抗內毒素血癥，抑制肝細胞凋亡[16-17]。Giuliani等[18]應用胸腺肽α1治療肝癌患者，發現可顯著增加CD8+細胞數量，提高患者生存率，與本研究結果一致。本研究所用患者經過治療后，患者尿黃、鈉減、腹脹、乏力、肝區隱痛癥狀顯著改善，且患者均未出現不良反應，說明本方案治療效果顯著，安全可靠。

綜上所述，苦參堿聯合胸腺肽治療CHB患者，抗病毒效果顯著，可有效降低轉氨酶表達，降低炎癥反應，消退黃疸，改善肝功能，改善臨床癥狀，提高免疫力，臨床上安全有效，具有重要推廣意義。

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Effect of matrine combined with thymosin on the levels of serum Foxo3a,INF-α and HBV-DNA and T cell subsets in patients with chronic hepatitis B.

TANG Hai-feng1,ZHU Su-nan2.WardⅠ1,Departmetn of ClinicalLaboratory2,Infectious Disesases Hospital of Kaifeng,Kaifeng 475001,Henan,CHINA

ObjectiveTo study the effect of matrine combined with thymosin on the levels of serum forkhead box O transcription factor-3a(Foxo3a),interferon-α(INF-α)and hepatitis B virus DNA(HBV-DNA)and T cell subsets in patients with chronic hepatitis B(CHB).MethodsNinety-four patients with CHB who were treated in our hospital between April 2013 and April 2016 were randomly divided into the control group and the observation group according to the random number table,with 47 cases in each group.The control group was treated with routine therapy and matrine injection,and the observation group was additionally treated with thymosin injection.After 1 month of treatment,the changes of serum Foxo3a,INF-α and HBV-DNA levels and T cell subsets before and after treatment were compared between the two groups.ResultsAfter treatment,the levels of alanine aminotransferase(ALT),aspartate aminotransferase(AST),bilirubin(TBil)and prothrombin time(PT)in both groups were significantly decreased(P＜0.05),while albumin levels were significantly increased(P＜0.05).The observation group after treatment improved significantly better than the control group(P＜0.05).The negative conversion rate of HBV-DNA,positive conversion rate of hepatitis B e an-tibody(HBeAb)and negative conversion rate of hepatitis B e antigen(HBeAg)in the observation group were 51.06%, 51.06%and 46.81%,as compared with 23.40%,23.40%and 27.66%in the control group(P＜0.05).Levels of Foxo3a mRNA,INF-α and alpha fetoprotein(AFP)in the two groups were significantly decreased(P＜0.05),and the decreased amplitude in the observation group was significantly greater than that in the control group(P＜0.05).In the control group, there was no significant change of T cell subsets before and after treatment(P＞0.05),while in the observation group, CD3+,CD4+and CD4+/CD8+were significantly increased and CD8+was significantly decreased after treatment,which showed significant differences with those in the control group(P＜0.05).After treatment,yellow urine,sodium reduction, abdominal distension,fatigue and liver dull pain were significantly relieved,and the relief rate in the observation group was higher than that in the control group(P＜0.05).There were no adverse reactions in the two groups.ConclusionThe application of matrine combined with thymosin in the treatment of patients with CHB can significantly reduce the levels of Foxo3a,INF-α and serum HBV-DNA,improve liver function,relieve clinical symptoms and improve immunity.

Chronic hepatitis B;Matrine;Thymosin;Foxo3a;INF-α;T cell subsets

R512.6+2

A

1003—6350（2017）07—1055—04

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.07.009

2016-08-31)

唐海峰。E-mail：13837826966@139.com