Pdr1蛋白N端攜帶Flag標簽的光滑假絲酵母的構建

田園，倪琪，彭奕冰

上海交通大學醫學院附屬瑞金醫院檢驗科，上海 200025

·論著·

Pdr1蛋白N端攜帶Flag標簽的光滑假絲酵母的構建

田園，倪琪，彭奕冰

上海交通大學醫學院附屬瑞金醫院檢驗科，上海 200025

近年來，光滑假絲酵母已成為第二位引起侵襲性真菌感染的病原體。光滑假絲酵母對唑類藥物(臨床一線抗真菌藥物)的敏感性低且易發生耐藥，一直是研究的熱點。介導光滑假絲酵母對唑類藥物耐藥的關鍵基因是轉錄因子pdr1，其功能性突變會使Pdr1蛋白功能過度活躍，導致下游唑類藥物外排泵基因高表達，從而對唑類藥物耐藥。本研究利用同源重組技術，構建在基因pdr1的5′端定點插入3×Flag標簽的重組菌株2a2和2b2，為后續利用免疫染色質共沉淀技術尋找Pdr1直接調控基因奠定基礎。結果表明，3×Flag標簽添加到Pdr1蛋白N端可成功表達Flag-Pdr1蛋白；與野生型菌株相比，表達Flag-Pdr1的菌株對氟康唑的耐藥性增強。此外，與野生型菌株相比，表達Flag-Pdr1的菌株中cdr1和pup1基因表達水平顯著上升，提示在Pdr1蛋白N端加Flag標簽能使其功能活躍，表明N端對Pdr1蛋白功能具有重要意義。

光滑假絲酵母；pdr1基因；標簽；基因敲除；耐藥性

流行病學研究顯示，近年來光滑假絲酵母(Candidaglabrata，C.glabrata)已成為第二大引起侵襲性真菌感染的病原體，其血流感染的病死率接近50%[1-3]。光滑假絲酵母感染流行的重要原因是其易對唑類藥物耐藥，而唑類藥物是臨床主要抗真菌藥物。既往研究表明，光滑假絲酵母的唑類藥物獲得性耐藥機制主要有兩種[4-5]，一種是光滑……